Методы культивирования. Внутриклеточные включения при вирусных инфекциях. Цитопатическое действие вирусов.

Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Эти же методы используют и для культивирования риккетсий и хламидий — облигатных внутриклеточных бактерий, которые не растут на искусственных питательных средах. Культуры клеток готовят из тканей животных или человека. Их подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые. Количество вирусных частиц определяют методом титрования по цитопатическому действию (ЦПД) в культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным разведением вируса. Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для определения их видовой принадлежности. Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорбировать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее постановки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотонич. р-ром NaCl. На поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты. Другой метод — реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жидкости культуры клеток, либо амниотической жидкости куриного эмбриона. Культивирование вирусов в куриных эмбрионах: используют эмбрионы в возрасте от 8 до 14 дней в зависимости от вида вируса, способа заражения и задач исследования. Вирусы гриппа культивируются в 9-10, осповакцины - в 12, паротита - в 7-дневных куриных эмбрионах. Более точным количественным методом учета отдельных вирусных частиц является метод бляшек. Его также используют для дифференциации, селекции вирусов, а также для определения их концентрации в исследуемом материале. Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям, которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток. Выбор экспериментальных животныхопределяется целью работы и видовой чувствительностью к изучаемому вирусу. Для заражения используют обезьян, кроликов, морских свинок, хомячков, белых крыс и мышей. Лабораторных животных заражают различными способами в зависимости от тропизма вируса к определенным тканям. Так, например, для культивирования нейротропных вирусов заражение производят преимущественно в мозг (вирусы бешенства, клещевого энцефалита и др.), культивирование респираторных вирусов осуществляется при интраназальном инфицировании животных (вирусы гриппа), дерматотропных (вирус оспы) - путем накожного и внутрикожного заражения. Формирование включений: включения наиболее часто формируются при вирусных и хламидиозной инфекциях. Они могут состоять или из собранных вирусных частиц, или из остатков вирусных нуклеиновых кислот. Включения могут образовываться в ядре и цитоплазме клеток. Их присутствие может помогать в установлении правильного диагноза при гистологическом исследовании. Цитомегаловирус- увеличение клеток (цитомегалия).Эозинофильные большие внутриядерные включения, окруженные светлым ободком. Вирусы герпеса- большие эозинофильные внутриядерные включения, окруженные светлом ободком. Ядра в виде матового стекла. Гигантские клетки с 3-8 ядрами. Вирус натуральной оспы -большие, зернистые, округлые эозинофильные цитоплазматические включения (тельца Гарньери). Вирус бешенства-округлые, 2-10 мкм в диаметре, эозинофильные цитоплазматические включения (тельца Негри). Вирус гепатита В-цитоплазма в виде матового стекла. Вирус кори- многоядерные (10-1000 ядер) гигантские клетки Вартина-Финкельдея. Маленькие эозинофильные внутриядерные включения. Вирус контагиозного моллюска-гомогенные эозинофильные цитоплазматические включения, заполняющие клетку и оттесняющие ядро.

Репродукция большинства вирусов сопровождается подавлением синтеза клеточных ДНК, РНК и белков, чтобы предотвратить или ограничить выработку интерферона и обеспечить собственную репродукцию прежде, чем в организме разовьется полноценный иммунный ответ. Чаще всего вирусы специфически угнетают синтез клеточных белков, нарушая образование инициаторного комплекса трансляции, поскольку для трансляции вирусных мРНК этот комплекс обычно не нужен. Например, протеаза вируса полиомиелита расщепляет компонент инициаторного комплекса трансляции. У вируса простого герпеса один из белков матрикса вызывает быстрое разрушение клеточных мРНК.

101.Взаимодействие вируса с клеткой. Формы вирусной инфекции.

Взаимодействие идет в единой биологической системе на генетическом уровне.Существует четыре типа взаимодействия:1) продуктивная вирусная инфекция (взаимодействие, в результате которого происходит репродукция вируса, а клетки погибают);2) абортивная вирусная инфекция (взаимодействие, при котором репродукции вируса не происходит, а клетка восстанавливает нарушенную функцию);3) латентная вирусная инфекция (идет репродукция вируса, а клетка сохраняет свою функциональную активность);4) вирус-индуцированная трансформация (взаимодействие, при котором клетка, инфицированная вирусом, приобретает новые, ранее не присущие ей свойства).После адсорбции вирионы проникают внутрь путем эндоцитоза (виропексиса) или в результате слияния вирусной и клеточной мембран. Образующиеся вакуоли, содержащие целые вирионы или их внутренние компоненты, попадают в лизосомы, в которых осуществляется депротеинизация, т. е. "раздевание" вируса, в результате чего вирусные белки разрушаются. Освобожденные от белков нуклеиновые кислоты вирусов проникают по клеточным каналам в ядро клетки или остаются в цитоплазме.Нуклеиновые кислоты вирусов реализуют генетическую программу по созданию вирусного потомства и определяют наследственные свойства вирусов. С помощью специальных ферментов (полимераз) снимаются копии с родительской нуклеиновой кислоты (происходит репликация), а также синтезируются информационные РНК, которые соединяются с рибосомами и осуществляют синтез дочерних вирусных белков (трансляцию).После того как в зараженной клетке накопится достаточное количество компонентов вируса, начинается сборка вирионов потомства. Процесс этот происходит обычно вблизи клеточных мембран, которые иногда принимают в нем непосредственное участие. В составе вновь образованных вирионов часто обнаруживаются вещества, характерные для клетки, в которой размножается вирус. В таких случаях заключительный этап формирования вирионов представляет собой обволакивание их слоем клеточной мембраны.Последним этапом взаимодействия вирусов с клетками является выход или освобождение из клетки дочерних вирусных частиц. Простые вирусы, лишенные суперкапсида, вызывают деструкцию клетки и попадают в межклеточное пространство. Другие вирусы, имеющие липопротеидную оболочку, выходят из клетки путем почкования. При этом клетка длительное время сохраняет жизнеспособность. В отдельных случаях вирусы накапливаются в цитоплазме или ядре зараженных клеток, образуя кристаллоподобные скопления - тельца включений. Вирусные инфекции подразделяют на антропонозные, присущие только человеку (например, полиомиелит), и зоонозные, являющиеся болезнями животных, к которым восприимчив также человек (например, бешенство). Выделяют природно-очаговые Вир.инф., наблюдающиеся только в их природных очагах, существование которых обусловлено поддержанием вируса в природе независимо от человека. Возбудители большинства этих болезней передаются человеку и животным кровососущими насекомыми — клещами, комарами, москитами. Инфицируя человека, вирусы могут поражать различные органы и системы, и по этому признаку их удобно разделять на кишечные (например, ротавирусы), респираторные (например, вирус гриппа), поражающие ц.н.с. (например, вирусы энцефалитов), внутренние органы (например, вирусы гепатитов), кожу и слизистые оболочки (например, вирус ветряной оспы), сосудистую систему (например, вирусы геморрагических лихорадок), иммунную систему (например, вирус иммунного дефицита человека, вызывающий ВИЧ-инфекцию.

102.Особенности противовирусного иммунитета. Интерфероны, мех-мы дей-ия.

Особенности противовирусного иммунитета:1)Противовирусный иммунитет начинается со стадии презентации вирусного антигена Т-хелперами.2)Иммунитет направлен на нейтрализацию и удаление из организма вируса, его антигенов и зараженных вирусом клеток. Особенностью противовирусного иммунитета является и то, что фагоцитарная реакция в защите от вирусной инфекции не играет такой роли, как при защите макроорганизма от бактериальных инфекций. Неспособность фагоцитовсправиться с вирусамиобъясняется прежде всего биологическими особенностями последних. Интерфероны— общее название, под которым в настоящее время объединяют ряд белков со сходными свойствами, выделяемые клетками организма в ответ на вторжение вируса. Благодаря интерферонам клетки становятся невосприимчивыми по отношению к вирусу. «Определяемый в качестве интерферона фактор должен быть белковой природы, обладать антивирусной активностью по отношению к разным вирусам, по крайней мере, в гомологичных клетках, опосредованной клеточными метаболическими процессами, включающими синтез РНК и белка» Интерферон– низкомолекулярный белок, обладающий выраженными антивирусными, а также высокими иммуномодулирующими и другими биологическими свойствами, в том числе и противоопухолевой активностью. Механизм действия интерферона заключается в подавлении процесса транскрипции вирусной РНК и синтеза вирусного белка. Интерферон не действует на вирион, он может лишь подавлять репродукцию вируса в клетке. Этим объясняется наибольший эффект применения интерферона с профилактической целью. Интерферон — единственное универсальное средство, действующее против многих вирусов; кроме того, оно не вызывает никаких побочных явлений. Все это открывает широкие перспективы для практического применения интерферона, особенно с профилактической целью или для лечения в самом начале заболевания

103. Вирусы гриппа, парагриппа. Св-ва. Изменчивость вируса, ее эпидемическое значение, особенности иммунитета. Принципы для специфического лечения и профилактики.Вир.гриппа-РНК сод.вирус,относится к сем.Ортомиксовируса. Им-т округлую форму. В сост. оболочки вир. Гриппавход.геммаглютинины и нейраминидаза. Вир. Гриппа подразд. На3 типа:АВС. Они сод-т 2 антигена:S антиген связан с нуклеокапсидом-общ.для всех типов и V антиген-геммаглютенин, определяющий типы и штаммоспецифичность. Вирус гриппа, вызываетаглютинацию эритроцитов у более 20 видов животных. Вирус гриппа обладает общими антигенами с изоантигенами эритроцитов человека. Это обуславл. Неспособность нек-х людей продуцировать против него антитела. Вир гриппа хор.размн.в амниотической и аллантоической оболочках куриных эмбрионов. Вир.В активно репродуцир.в клудьтурах почек обезьян, при комнt°иннактивир-яс ч/з неск-ко часов, нагревание до 65° погибает в течении 5-10 мин. Чуствителен к высушиванию, бычтро разрушается в кислой и щелочной среде по дей-м УФО-луч, эфиров, хлораминов. Вир.гриппа передается возд.кап. путем при чихании и кашле, разговоре.Он вызыв.ч/з опред эпидемию и эндемии. Проникнув в орг.восприимчив.человека ч/з носоглотку, вир.гриппа внедряется в кл.поверхн.эпителия,сл.обл.верхн.дых. путей. Важн. Ролдь в развитии заб-ия пренадл.интоксикации,к-ая развив. в рез-те всасыв.в кровь вируса и его токсичн.белков. Постинфекционный иммунететобусл.антителами АТ к гемагглютинину и нейраминидазе,к-ые быстр.образ.в выс.титрах больных гриппом. Он носит типа и штаммоспецифический хар-р и обеспеч.невосприимч.людей к вирусу. Если тип А-в теч 1-2 лет, В-3-5 лет, С-пожизненно.Профилактика:Иммунизация: д/я акт.иммунизации примен.живые и инактив-ые вакцины, при вакцинации иннактивир-ой вакц.эффект. 60-70%. Для пассивной профилактики примен.противогрипозные Igчел-ка(из крови доноров иммунизир.гриппозн.вакциной). Для профилактики и купирования симптомов применяют производные аммантадина(ремантадин). Симпт.профил-ка-интерфероон.Лечение: Иммуно-стимулирующие препараты(витамина С); Противовирусные препараты(Существуют два класса препаратов: ингибиторы нейраминидазы и ингибиторы M2 (производные адамантана); Симптоматическое лечение: для облегчения носового дыхания действенны нафтизин, санорин, галазолин.