Методы культивирования, индикации вирусов и идентификации вирусов. Характеристика клеточных культур.

Культивирование вирусов в организме чувствительных животных	Культивирование вирусов на куриных эмбрионах	Культивирование вирусов в культурах клеток
Животные: взрослые или новорожденные (белые мыши, хомяки, кролики, обезьяны и др); Способы заражения: подкожно, внутримышечно, интраназально, интрацеребрально и т.д.)	Куриные эмбрионы 5-12 дневные; Заражают в: · Амниотическую полость · Аллантоисную полость · Желточный мешок · Эмбрион · На хорион-аллантоисную мембрану	Для приготовления культур клеток используют: 1.Эмбриональные ткани человека и животного; 2. Клетки злокачественных образований; 3. Нормальные ткани человека, обезьян и др. животных.
Методы индикации: u Клиническая картина u Патоморфологические изменения в органах и тканях, u Реакция гемагглютинации (РГА) с суспензией органов. Недостатки: видовая невосприимчивость животных ко многим вирусам человека, контаминация животных посторонними микробами, экономические и этические.	Методы индикации: u Гибель эмбриона u Специфические поражения оболочек и тела эмбриона (бляшки, оспины, кровоизлияния) u Реакция гемагглютинации (РГА). Недостатки: многие вирусы не размножаются в эмбрионах птиц.	Методы индикации: u Цитопатогенного действия (ЦПД), u Образование внутриклеточных включений, u Реакция гемадсорбции, u Реакция гемагглютинации, u Цветная реакция, u Бляшкообразование.
Методы идентификации (типирования) РН, РГА	Методы идентификации (типирования) РН (в т.ч. РТГА), РСК	Методы идентификации (типирования) РН (в т.ч. РТГА), РСК, РИФ

*Индикациявирусовлабораторный процессустановления присутствия неидентифицированныхвирусовв иссл.материале или в системе культивированиявирусов.

Условия выращивания клеточных культур:
u Соблюдение правил асептики;
u Использование лабораторной посуды из нейтрального стекла или специальных реакторов;
u Использование сложных питательных сред (среда 199, Игла), содержащих минеральные соли, аминокислоиты, витамины, глюкозу, сыворотку крови животных и человека, буферные растворы для поддержания рН;
u Добавление антибиотиков к питательной среде;
u Соблюдение оптимальной температуры (36 – 38,5 С) роста клеток
Типы клеточных культур
n Однослойныекультуры клеток – клетки прикрепляются и размножаются в виде монослоя на поверхности химически
нейтрального стекла;
n Суспензионныекультуры клеток – клетки размножаются во всем объеме питательной среде;
n Органныекультуры – цельные кусочки органов и тканей.

Однослойные клеточные культуры: по числу генераций различают:
n Первичные культуры– способны размножаться только в первых генерациях, т.е. выдерживают не более 5-10 пассажей после выделения из тканей.
n Перевиваемыеили стабильные культуры – способны размножаться в лабораторных условиях десятки лет.
n Полуперевиваемые культуры– выдерживают 40-50 пассажей.

Вироиды и прионы. Пролиферация прионов. Прионные болезни.

Близкие к вирусам инфекционные агенты если:
1. только НК = вироид,
2. только белок = прион.

Терминология

n ПРИОН– (частичная анограмма от англ. Proteinaceous infectious particles) – белковоподобная инфекционная частица;
n PrP– прионный белок (от англ. Prion protein);
n PrPc– неинфекционный клеточный белок («С» от англ. Cell – клетка)
n PrPSc– инфекционный прионный белок («Sc» - от англ. Scrapie – распространенная болезнь овец и коз);
n PRNP– ген, кодирующий синтез клеточного прионного белка (PrPc) в организме человека, локализованный на хромосоме 20;

Вироиды это - инфекционные агенты, состоящие только из кольцевой РНК. Вироиды это лишенные оболочки небольшие молекулы кольцевой, обычно одноцепочечной РНК. Вироиды способны автономно инфицировать клетки хозяина.

Прионы - особый класс инфекционных агентов, представленных белками с аномальной третичной структурой и не содержащих нуклеиновых кислот.

Прионные болезни — это группа заболеваний человека и животных, при которых происходит гибель нервных клеток головного мозга за счет накопления патологического белка (приона). Прионный белок существует в головном мозге и в норме, но при патологии он становится способным к формированию больших белковых агрегатов, мешающих работе нервной клетки. Белковые комплексы сначала накапливаются внутри клетки, а потом высвобождаются во внеклеточное пространство, где формируют «амилоидные бляшки».

Пролиферация патологических прионов: превращение прионов в измененные формы происходит при нарушении кинетически контролируемого равновесия между ними. Процесс усиливается при возрастании количества патологического (РгР) или экзогенного приона. РгР является нормальным белком, заякоренным в мембрану клетки. РгР' - глобулярный гидрофобный белок, образующий агрегаты с собой и с РгР'' на поверхности клетки: в результате РгР' преобразуется в РгР'' и далее цикл продолжается. Патологическая форма РгР''' накапливается в нейронах, придавая клетке губкообразный вид.

Нозологические формы прионных болезней человека:
n болезнь Крейтцфельдта-Якоба (БКЯ)
n Куру
n синдром Герстманна-ШтреусслераШейнкера (СГШШ)
n фатальная семейная инсомния (ФСИ)

7. Общая характеристика и строение бактериофагов. Этапы взаимодействия вирулентного фага с бактерией-хозяином.

8. Умеренные бактериофаги: особенности, репродукция. Лизогения и лизогенная конверсия.

9. Применение бактериофагов в медицине.