Реакция агглютинации: сущность, условия и способы постановки и учета, диагностическое значение.

РА- это склеивание и выпадение в осадок микробных клеток в присутствии специфических антител.

Способы постановки:

1. макроскопическая объемная агглютинация в пробирках

2. ускоренная ориентировачная реакция агглютинации на предметном стекле

для постановки требуется:

а. сыворотка крови

б. изотонический раствор хлорида натрия

в. Корпускулярный аг (взвесь живых бактерий или диагностикум)

положительный результат РА – образование на дне пробирок осадка и выраженное просветление надосадочной жидкости.

Титром реакции считают последнее разведение сыворотки, в которм наблюдатеся агглютинация.

1. РА с целью серодиагностики считается положительной, если она прошла в разведении, равном условному диагностическому титру(1:200 и выше)

2. РА с целью сероидентификации считается положительной, если она прошла в титре или 1\2 титра сыворотки указанного в ампуле.

3. Результат пластинчатой РА на предметном стекле учитывают через 5-10 минут при комнатной температуре. При положительной раекции в капле с сывороткой отмечают склеивание бактерий в виде хлопьев.

Реакция непрямой гемагглютинации: сущность, условия и способы постановки и учета результатов, диагностическое значение.

РПГА – это реакция с участием эритроцитарного диагностикума и Ат сыворотки крови больного. В основе реакции лежит способность эритроцитов адсорбировать на себе АГ. При взаимодействии со специфическими АТ происхоидт склеивание сенсибилизированных эритроцитов и выпадение их в осдаок с образованием гемаагглютинината. Эта реакция ставится в одном направлении – с целью серодиагностики.

Способ постановки реакции:

Реакция ставится в пластинках с лунками из органического стекла. Из сыворотки готовят ряд разведений по 0,5 мл 1% взвеси сенсибилизированных эритроцитов.

Результат оценивают по осадку эритроцитов в лунках. В случае положительного результата эритроциты равномерно оседают на дне лунки в виде «зонтика». При отрицательном результате образутеся «пуговка».

Эту реакцию применяют при инфекциях, вызванных бактериями и риккетсиями.

Реакция торможения гемагглютинации: сущность, применение, диагностическое значение.

РТГА основана на способности некоторых вирусов вызывать агглютинацию эритроцитов кур или др видов животных, которая тормозится специфическими АТ.

Способ постановки реакции:

Реакция ставится в развернутом ряду лунок в пластинках из органического стекла.

Для постановки требуется:

1. сыворотка крови

2. изотонический раствор натрия хлорида

3. вирусный антиген

4. 1% взвесь куриных эритроцитов

Из сыворотки готовят двукратные разведения в изотоническом растворе хлорида натрия по 0,25 мл. к разведению сыворотки добавляют по 0,25 мл рабочего разведения аг. Лунки встряхивают и оставляют на 30 минут при комнатной температуре. Затем вносят в каждую по 0,5 мл 1%-й взвеси куриных эритроцитов.

При положительной реакции эритроциты оседают на дно лунки в виде «пуговки». При отрицательной реакции вирус вызывет агглютинацию эритроцитов, образуя «зонтик».

РТГА с целью серодиагностики ставится с «парными» сыворотками и считается положительной, если произошло увеличение титра АТ не менее чем в 4 раза. РТГА ставится только при вирусных инфекциях.

Реакция связывания комплемента: сущность, условия, направления, способы постановки и учета, диагностическое значение.

Сложные реакции

Сложные реакции называются так потому, что состоят из нескольких простых реакций.

Реакция связывания комплемента (РСК) предложена Ж. Бордё и О. Жангу. Реакция включа­ет две фазы. В фазе I (специфической) искомый Аг (или AT) реагирует с диагно­стической антисывороткой (или Аг-диагностикумом) и комплементом. Образующийся комплекс Аг-АТ связывает комплемент. В фазе II (индикаторной) определяют наличие свободного комп­лемента внесением в реакционную среду ге­молитической системы — эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей AT к ним. Если Аг и AT не соответствуют друг дру­гу и не образуют иммунных комплексов, то связывания комплемента не происходит. В этом случае свободный комплемент взаимодейству­ет с компонентами гемолитической системы, фиксируясь на комплексе эритроцит-антиэритроцитарное AT. Следствие этого — гемолиз ин­дикаторных клеток (феномен «лаковой кро­ви») — реакцию считают отрицательной. Если в фазе I AT и Аг соответствуют друг другу, то образующиеся иммунные комплек­сы связывают комплемент, разрушения эрит­роцитов после внесения гемолитической сис­темы не наблюдают и реакцию считают по­ложительной.

Основные недостатки РСК: сложность (включает 5 компонентов), лабиль­ность некоторых компонентов [их необходи­мо готовить прямо перед постановкой реакции (комплемент) либо за несколько суток (эрит­роциты барана)] и возможные антикомплементарные свойства у сывороток и Аг. Тем не менее РСК применяют в диагностике многих заболеваний, например при диагностике сифили­са (реакция Вассерманна).

Реакция радиального гемолиза в геле — вариант РСК. Принцип реакции основан на иммобилизации комплемента и Аг (эритроциты барана) в агаровом геле. Затем в геле нарезают лунки и вносят AT (например, гемолитическую сыворотку). Диффундирующие AT связывают Аг и комплемент, что проявляется появлением зон гемолиза. Их размеры пропорциональны титрам AT в сыворотке. В диагностических целях эритроциты барана «нагружают» Аг различ­ных возбудителей (например, вирусов гриппа, краснухи), а в лунки вносят сыворотку больных.

Реакция локального гемолиза в геле предложена Н. Йёрне и А. Нордином (1963). Прин­цип аналогичен реакции радиального гемолиза, но в гель вносят эритроциты барана и суспен­зию клеток-антителопродуцентов. Последние секретируют AT, диффундирующие в агар и фик­сирующиеся на эритроцитах. Затем в реакционную систему вносят комплемент (наслаивая его на агар) и наблюдают образование зон гемолиза вокруг каждой клетки, образующей AT к эритроцитам барана. Метод получил широкое распространение во многих областях иммуноло­гии, так как даёт возможность оценивать образование AT на уровне отдельных тканей и клеточ­ных популяций после различных воздействий. Метод позволяет определять динамику образова­ния антителообразующих клеток к различным Аг, связывая их с эритроцитами, а также опреде­лять классы образуемых Ig.

Определение принадлежности AT к тому или иному классу Ig имеет большое диагностическое значение, так как позволяют определить фазу инфекционного процесса. На базе классичес­ких серологических реакций доступна унитиоловая проба, в основу которой положена способность унитиола расщеплять дисульфидные (S-S) мостики в молекулах IgM, но не IgG. Первоначально в порции сыворотки определяют общие титры AT (например, в РИГА), затем в неё вносят унитиол и после инкубации снова определяют титры AT. Разницу между титра­ми первого и второго измерения составляют титры IgM.