Клещевой энцефалит. Этиология, принципы лабораторной диагностики, профилактика. Роль советских ученых в изучении клещевого энцефалита.

Клещевой энцефалит — природно-очаговая вирусная инфекция, характеризующаяся лихорадкой, интоксикацией и поражениемсерого вещества головного мозга (энцефалит) и/или оболочек головного и спинного мозга (менингит и менингоэнцефалит). Заболевание может привести к стойким неврологическим и психиатрическим осложнениям и даже к смерти больного.

Семейство:

Flaviviridae

Род:	Flavivirus

Вид:	Вирус клещевого энцефалита

Морфологические свойства: мелкий однонитчатый, содержащий +РНК, размером 25—45 нм, покрыт оболочкой с ворсинками,структурные белки – V2капсид,V3суперкапсид,V1внутри от суперкапсида. Состав липидов и углеводов наружной оболочки определяется хозяином, так как созревание вириона происходит при почковании нуклеокапсида через цитоплазматическую мембрану клетки-хозяина. Вирус образует включения в ядрах клеток аммонова рога. Культивируется в однослойных культурах ткани, в оболочках куриного эмбриона и в организме белых мышей и обезьян, которых заражают подкожно, через нос и в мозг..

Антигены. В составе нуклеокапсида содержится один белок с группоспецифическими антигенными свойствами. На внешней оболочке имеются шиповидные отростки, содержащие гликопротеин, обладающий гемагглютинирующимм свойствами. Наружные белки обладают типовой специфичностью.

Устойчивость. Несмотря на небольшую устойчивость вируса к действию физических и химических факторов, в организме перенос­чиков он сохраняет свою жизнеспособность от —150С до +30С.

Резистентность: Высокая, к действию кислых значений рН, что важно при алиментарном пути зара­жения. Вирус обладает висцеротропностью и нейротропностью. К вирусу чувствительны белые мыши.

Эпидемиология:Переносчиком и ос­новным резервуаром являются иксодовые клещи. У клещей происходит трансовариальная и трансфазовая передача вируса. Поддержание циркуляции осуществляется за счет прокормителей клещей — грызунов, птиц, диких животных. Характерна весенне-летняя сезонность.

Патогенез:Человек заражается трансмиссивно при укусе инфицированными клещами, от кото­рых в период кровососания вирус проника­ет в макроорганизм. Проникновение вируса в организм возможно также контактным путем через мелкие повреждения кожи. Алиментарный путь заражения при употреблении сырого молока коз и овец. Употребление молока ведет к ощелачиванию желудочного сока, что пре­пятствует инактивации вируса. Инкубационный период — от 8 до 23 дн. Заболевание начинается остро, после инкубационного периода около 2 нед, с подъема температуры до 40°С и менингеальных явлений: судорог, рвоты, головной боли, гиперестезий. Состояние тяжелое в течение 5—12 дней. Затем появляются вялые параличи, чаще верхних конечностей. Летальность высокая — до 25%. После выздоровления могут оставаться стойкие параличи мышц шеи и плечевого пояса. Иногда течение клещевого энцефалита может быть легким, в виде стертых и абортивных форм.

Клиника: Сначала вирус размножается в месте входных ворот инфекции под кожей, откуда он попада­ет в кровь. Возникает резорбтивная вирусемия. Вирус проникает в эндотелий кровеносных сосудов, внутренних органов, где активно размножа­ется. При пищевом пути заражения входными воротами является слизистая оболочка глотки и тонкой кишки. В конце инкубационного периода в эндотелии крове­носных сосудов возникает вторичная вирусе­мия, длящаяся 5 дн. Вирусы гематогенно, периневрально проникают в головной и спинной мозг, поражая мотоней­роны (крупные дви­гательные клетки в сером веществе спинного мозга). Различают три клинические формы кле­щевого энцефалита: лихорадочную, менингеальную и очаговую.

Иммунитет: После перенесенного заболевания остается стойкий иммунитет. Вирус клещевого энце­фалита относится к факультативным возбуди­телям медленных вирусных инфекций.

Микробиологическая диагностика: Для идентификации выделенного вируса используют реакции нейтрализации, РТГА, РСК.При серодиагностике ориентируются на прирост антител в парных сыворотках или на присутствие вирусспецифических IgM — показателя недавно перенесенной инфекции. Серодиагностика про­водится в реакции нейтрализации, РСК, РТГА, а также с помощью ИФА и РИА.

Лечение и профилактика:Для лечения и экстренной профилактики при­меняют специфический гомологичный донорский иммуноглобулин против клещевого энцефалита,полученный из плазмы доноров, проживающих в природных очагах клещевого энцефалита и содержащий в высоком титре антитела к вирусу клещевого энцефалита. При отсутствии препарата назначают специфический гетерологичный лоша­диный иммуноглобулин.При лечении тяжелых форм применяют иммуногемосорбцию и серотерапию иммунной плазмой доноров. Применяют виферон, ридостин, рибонуклеазу.

История изучения КЭ в 1921г в Пермской области профессор невропатолог Первушин налюдал заболевания,которые диагностировались как атипичный полиомиелит.
Заболеваемость КЭ в Пермск.крае:в 2013г исследовано 12108клещей,из них 476+ на КЭ.
100чел заболело КЭ,из них 13детей.

КЭ открыт в 1937г на Дал.Востоке научной экспедицией во главе с Зильбергом Л.А.

В 1938г-вторая экспедиция(Павловский)

В 1939г-эксп.Пшеничногго.

Доказали алиментарного путипередача молока-Пшеничников,Крещенко.

Разработака методов индикации вируса КЭ доценотом Стародубцевой.

Разработка метода лактопроб проф-ом Кузеевым.

Изучение КЭ над Запад.Уралом проф-ом Минаевым и др.сотрудниками.

Билет № 16

1. Жгутики.

Подвижные бактерии могут быть скользящие (передвигаются по твердой поверхности в результате волнообразных сокращений) или плавающие, передвигающиеся за счет нитевидных спирально изогнутых белковых (флагеллиновых по химическому составу) образований- жгутиков.По расположению и количеству жгутиков выделяют ряд форм бактерий.1.Монотрихи- имеют один полярный жгутик.2.Лофотрихи- имеют полярно расположенный пучок жгутиков.3.Амфитрихи- имеют жгутики по диаметрально противоположным полюсам.4.Перитрихи- имеют жгутики по всему периметру бактериальной клетки. Способность к целенаправленному движению (хемотаксис, аэротаксис, фототаксис) у бактерий генетически детерминирована.

По расположению и количеству жгутиков выделяют ряд форм бактерий.

1.Монотрихи- имеют один полярный жгутик.

2.Лофотрихи- имеют полярно расположенный пучок жгутиков.

3.Амфитрихи- имеют жгутики по диаметрально противоположным полюсам.

4.Перитрихи- имеют жгутики по всему периметру бактериальной клетки.

Система интерферонов.

Интерфероны- синтезируемые различными клетками организма гликопротеиды широкого спектра биологической активности (прежде всего антивирусной), быстрый ответ организма на получение клетками неспецифического сигнала чужеродности. Существует целая система интерферонов, которые разделены на альфа, бета и гамма подтипы с выраженной гетерогенностью свойств. Противовирусное действие проявляется в способности подавлять внутриклеточное размножение ДНК- и РНК- вирусов (прежде всего в результате блокировки синтеза вирусных макромолекул). Индукцию синтеза интерферонов вызывают вирусы, бактерии, риккетсии, простейшие, синтетические соединения.

3. Род Chlamydia и род Chlamydophila Представители семейства Chlamydiaceae (хламидии) являются патогенными облигатными внутриклеточными бактериями.Они не способны синтезировать высокоэнергетические соединения и обеспечивать собственные энергетические потребности ( энергозависимые паразиты), что и определяет их облигатный паразитизм.С учетом своих особенностей хламидии занимают самостоятельное (особое) положение среди других микроорганизмов - прокариот. Chlamydia trachomatis , различные серотипы которого вызывают трахому, венерическую лимфогранулему и наиболее распространенные урогенитальные хламидиозы.Клеточный цикл развития хламидий имеет две основных формы - элементарные тельца (ЭТ) - инфекционная форма и ретикулярные тельца (РТ) - вегетативная форма. Сферические ЭТ значительно меньше размерами (менее 300 нм в диаметре), имеют более жестную электронно- плотную структуру, метаболически мало активны.Кроме того, хламидии способны образовывать L - формы, персистентные формы.Хламидии не растут на питательных средах самого сложного состава, для их культивирования могут быть использованы лабораторные животные и куриные эмбрионы (биопроба).Способны самостоятельно синтезировать нуклеиновые кислоты, некоторые белки и липиды. Являются энергетически зависимыми от хозяина эндопаразитами. Chlamydia trachomatis обладает гликоген - синтетазной, синтезирует предшественники фолиевой кислоты и соответственно биохимической активности чувствителен сульфаниламидам.Антигенная структура.1. Выделяют поверхностный родоспецифический антиген (ЛПС), локализующийся на наружной мембране клеточной стенки., термостабилен.2. МОМР - главный белок наружной мембраны несет функцию структурного белка и порина. Включает термолабильные белковые детерминанты , обладающие видо - , типо - и сероварной специфичностью.Детерминанты патогенности.1. Эндотоксин (липополисахарид), подобный эндотоксинам грамотрицательных бактерий.2. Экзотоксины - термолабильные субстанции.3. Антигены клеточной поверхности, подавляющие защитные реакции.Лабораторная диагностика.Золотой стандарт - метод культивирования в культурах клеток применяется очень редко в связи с трудоемкостью и длительностью культивирования, необходимостью работы с инфекционным материалом, этот метод по чувствительности уступает ПЦР, требует быстрой доставки материала для исследования.Применяемые лабораторные методы можно разделить на две основные группы - методы выявления антител и методы выявления антигенов.Методы выявления антител наиболее эффективны при генерализованных формах хламидиозов.Большинство методов выявляет антитела к группоспецифическому липополисахариду хламидий, что не позволяет определить вид хламидий. Среди используемых методов:- РСК - достаточно специфичный, но мало чувствительный метод;- РНГА - более эффективный метод для диагностики текущего инфекционного заболевания;- ИФА - наиболее чувствительный метод серологической диагностикиМетоды выявления возбудителя, его ДНК и антигенов. Метод флюоресцирующих антител (МФА) с моноклональными антителами (МКА) к группоспецифическому липополисахариду хламидий - наиболее распространенный, чувствительный и специфичный метод, позволяет выявлять локализацию возбудителя (урогенитальные мазки), морфологию (характер гранул, преобладание РТ или ЭТ). Метод требует высокой квалификации микроскописта и качества мазка - отпечатка ( достаточное количество клеток с учетом внутриклеточного расположения возбудителя).4. ПЦР для выявления ДНК хламидий - наиболее чувствительный метод. Однако и при нем возможны ложноположительные (при недостаточной чистоте работы - при контаминации) и ложноотрицательные (наличие в пробах материала ингибиторов Tag - полимеразы) результаты.Применяют антибактериальные препараты, проникающие в клетки, чаще доксициклин или сумамед (азитромицин)Эффективных методов специфической профилактики нет.

Билет № 17

Спирохеты

- имеют различное число завитков, аксостиль- совокупность фибрилл, специфический для различных представителей характер движения и особенности строения (особенно концевых участков). Из большого числа спирохет наибольшее медицинское значение имеют представители трех родов- Borrelia, Treponema, Leptospira.

Характеристика морфологии риккетсий, хламидий, микоплазм, более подробная характеристика вибрионов и спирохет будет дана в соответствующих разделах частной микробиологии.

Данный раздел завершаем краткой характеристикой (ключем) для характеристики основных родов микроорганизмов, имеющих медицинское значение, на основе критериев, применяемых в определителе бактерий по Берджи (Berge).

2. В основе видового иммунитета лежат различные механизмы естественной неспецифической резистентности. Среди них- кожные покровы и слизистые оболочки, нормальная микрофлора организма, фагоцитоз, воспаление, лихорадка, система комплемента, барьерные механизмы лимфоузлов, противомикробные вещества, выделительные системы организма, главная система гистосовместимости.

Кожа и слизистые- первая линия защиты против возбудителей. Кроме функции механического (анатомического) барьера кожа обладает бактерицидной активностью. Слизь, лизоцим, желудочный сок, слезная жидкость, слюна, деятельность мерцательного эпителия способствует защите слизистых оболочек.

Нормальная микрофлора организма препятствует колонизации организма посторонней микрофлорой (конкуренция за субстраты, различные формы антагонизма, в т.ч. выделение антибиотических веществ, изменение рН и др.).

Воспаление как защитная реакция организма на различные повреждения тканей возникло на более высокой ступени эволюции, чем фагоцитоз и характерно для высокоорганизованных организмов, обладающих кровеносной и нервной системами.

Инфекционное воспаление сопровождается различными сосудистыми и клеточными (включая фагоцитоз) реакциями, а также запуском целого ряда медиаторов воспалительных реакций (гистамина, серотонина, кининов, белков острой фазы воспалеия, лейкотриенов и простагландинов, цитокинов, системы комплемента).

3. Род Vibrio.Холера.Подвижные, изогнутые палочковидные бактерии, обладающие полярными жгутиками,не образующие спор и капсул, хорошо растущие на обычных средах. Они ферментируют углеводы с образованием кислоты без газа,. Можно культивировать при температуре от плюс 18 до 37^о С, рН 8,6-9,0.Род насчитывает более 25 видов, из них основное значение имеет Vibrio cholerae- возбудитель холеры, а также V.parahaemolyticum, V.vulnificus.Vibrio cholerae.Морфология. Холерный вибрион имеет один полярный жгутик, часто напоминает запятую (запятая Коха). Важный диагностический признак - подвижность (определяют микроскопией по методу висячей или раздавленной капли). Морфологически изменчивы. Хорошо окрашиваются водным фуксином Пффейфера и карболовым фуксином Циля.Культуральные свойства. Факультативный анаэроб. Холерный вибрион неприхотлив к питательным средам. На плотных средах холерный вибрион образует гладкие стекловидные, прозрачные с голубоватым оттенком дисковидные колонии вязкой консистенции. Используют щелочной агар, желчно - солевой агар, щелочной агар с кровью, наилучшей является TCBS - агар (агар с тиосульфатом, цитратом, солями желчных кислот и сахарозой).Биохимические свойства. Холерный вибрион сбраживает с образованием кислоты без газа многие углеводы (глюкозу, сахарозу, маннозу, маннит, лактозу, левулезу, гликоген, крахмал. Холерный вибрион разлагает желатин, казеин, свертывает молоко и разлагает белковые препараты до индола и аммиака.Вид V.cholerae делят на биотипы, серогруппы и серовары.. Основные биотипы - классический (V.cholerae asiaticae) и Эль - Тор (V.cholerae eltor). Серогруппы выделяют по структуре О- антигенов. Антигенная структура. У холерных вибрионов выделяют термостабильные О- антигены и термолабильные Н- антигены. Холерный вибрион может переходить из S- в R- форму, не агглютинироваться О- сывороткой. В связи с антигенной структурой для идентификации V.cholerae используют О- сыворотку.Факторы патогенности холерного вибриона.1. Подвижность (жгутики) и хемотаксис.2. Ферменты способствуют адгезии и колонизации, взаимодействию с эпителиальными клетками- муциназа, нейтаминидаза, лецитиназа и другие.3. Эндотоксин - термостабильный липополисахарид.4. Экзотоксин - холероген - главный фактор патогенности, термолабильный белок5. Энтеротоксины.Некоторые особенности эпидемиологии. Холера - кишечная инфекция. Основной источник - человек (больной или вибрионоситель), загрязненная вода. Способ заражения - фекально - оральный. Лабораторная диагностика. Холера относится к группе особо опасных инфекций, культивирование ее возбудителя требует соблюдения особого режима биологической безопасности. Основной метод диагностики - бактериологический, включает выделение и идентификацию возбудителя.Материал для исследования - испражнения и рвотные массы, секционные материалы от погибших, пробы воды и смывы с объектов окружающей среды, пищевые остатки.Для посева используют жидкие среды обогащения, щелочной МПА, элективные и дифференциально - диагностические среды Для ускоренной диагностики применяют иммунолюминесцентный метод, биохимическую идентификацию с набором индикаторных дисков, для обнаружения холерных вибрионов в первичных материалах - РНГА с антительным диагностикумом, для выявления некультивируемых форм - ПЦР, для определения вирулентности и синтеза холерогена - биопробы на кроликах - сосунках, ИФА, ДНК- зонды (выявление фрагмента хромосомы, несущего оперон холерогена).Специфическая профилактика. Имеются различные вакцины - убитая из сероваров Инаба и Огава, анатоксин холерогена, химическая бивалентная вакцина. Вакцины применяют только по эпидпоказаниям. Может проводиться антибиотикопрофилактика.

Билет № 20

1. Морфология и ультраструктура вирусов бактерий (фагов). Особенности взаимодействия вирулентного и умеренного фагов с бактериальной клеткой.

Бактериофаги— вирусы бактерий, обладающие способностью специфически проникать в бактериальные клетки, репродуцироваться в них и вызывать их растворение (лизис). Наиболее морфологически распространенный тип фагов характеризуется наличием головки- икосаэдра, отростка (хвоста) со спиральной симметрией (часто имеет полый стержень и сократительный чехол), шипов и отростков (нитей), т.е. внешне несколько напоминают сперматозоид.

Взаимодействие фагов с клеткой (бактерией) строго специфично, т.е. бактериофаги способны инфицировать только определенные виды и фаготипы бактерий.Основные этапы взаимодействия фагов и бактерий.1.Адсорбция (взаимодействие специфических рецепторов).2.Внедрение вирусной ДНК (инъекция фага) осуществляется за счет лизирования веществами типа лизоцима участка клеточной стенки, сокращения чехла, вталкивания стержня хвоста через цитоплазматическую мембрану в клетку, впрыскивание ДНК в цитоплазму.3.Репродукция фага.

4.Выход дочерних популяций.Основные свойства фагов.Различают вирулентные фаги, способные вызвать продуктивную форму процесса, и умеренные фаги, вызывающие редуктивную фаговую инфекцию (редукцию фага). В последнем случае геном фага в клетке не реплицируется, а внедряется (интегрируется) в хромосому клетки хозяина (ДНК в ДНК), фаг превращается в профаг. Этот процесс получил название лизогении. Если в результате внедрения фага в хромосому бактериальной клетки она приобретает новые наследуемые признаки, такую форму изменчивости бактерий называют лизогенной (фаговой) конверсией. Бактериальную клетку, несущую в своем геноме профаг, называют лизогенной, поскольку профаг при нарушении синтеза особого белка- репрессора может перейти в литический цикл развития, вызвать продуктивную инфекцию с лизисом бактерии.Умеренные фаги имеют важное значение в обмене генетическим материалом между бактериями- в трансдукции (одна из форм генетического обмена). Например, способностью вырабатывать экзотоксин обладают только возбудитель дифтерии, в хромосому которого интегрирован умеренный профаг, несущий оперон tox, отвечающий за синтез дифтерийного экзотоксина. Умеренный фаг tox вызывает лизогенную конверсию нетоксигенной дифтерийной палочки в токсигенную.По спектру действия на бактерии фаги разделяют на :

- поливалентные (лизируют близкородственные бактерии, например сальмонеллы);

- моновалентные (лизируют бактерии одного вида);

- типоспецифические (лизируют только определенные фаговары возбудителя).

На плотных средах фаги обнаруживают чаще с помощью спот (spot) - теста (образование негативного пятна при росте колоний) или методом агаровых слоев (титрования по Грациа).

Практическое использование бактериофагов.1.Для идентификации (определение фаготипа).2.Для фагопрофилактики (купирование вспышек).3.Для фаготерапии (лечение дисбактериозов).4.Для оценки санитарного состояния окружающей среды и эпидемиологического анализа.