Препараты иммуноглобулинов. Моноклональные антитела. Интерфероны. Получение, очистка, показания к применению.
Иммуноглобулинами (гамма-глобулинами) называют очищенные и концентрированные препараты гамма-глобулиновой фракции сывороточных белков, содержащие высокие титры антител и присутствующие в крови, цереброспинальной жидкости, лимфоузлах, селезенке, слюне и других тканях. Синтезируются они в лимфоидных клетках, содержат углеводные группировки и могут рассматриваться как гликопротеины. По электрофоретической подвижности иммуноглобулины относятся в основном к гамма- глобулинам и ß 2 -глобулинам. Биологическая роль иммуноглобулинов в организме связана с участием в процессах иммунитета. Их защитная функция обусловлена способностью специфически взаимодействовать с антигенами.
Освобождение от балластных сывороточных белков способствует снижению токсичности и обеспечивает быстрое реагирование и прочное связывание с антигенами. Применение гамма-глобулинов снижает количество аллергических реакций и осложнений, возникающих при введении гетсрологичных сывороток. Современная технология получения человеческого иммуноглобулина гарантирует гибель вируса инфекционного гепатита. Основным иммуноглобулином в препаратах гамма-глобулина является IgG.
11ормальные и специфические иммуноглобулины являются мощным средством экстренной профилактики и лечения многих заболеваний, прежде всего инфекционных. В практике здравоохранения применяют гомологичные (человеческие) и гетерологичные (лошадиные) иммуноглобулины.
Гомологичные сыворотки или гамма-глобулины человека не вызывают анафилактических реакций и вводятся однократно.
Важным условием эффективного использования гамма-глобулинов для лечения и профилактики инфекционных заболеваний является как можно более раннее их назначение с момента заболевания или заражения. Пассивный иммунитет возникает через несколько часов и длится до двух недель. Показания к применению Нормальные и специфические иммуноглобулины являются мощным средством экстренной профилактики и лечения многих заболеваний, прежде всего инфекционных. Пассивная иммунизация дает быстрый и хороший эффект, особенно в сочетании с антибиотикотерапией. Такой способ иммунопрофилактики используется в качестве превентивной меры при опасности заражения в эпидемические сезоны и в стрессовых ситуациях, а также при сепсисе, токсических состояниях.
Специфические иммуноглобулины оказывают не только прямое действие на возбудителя инфекции, они обладают выраженным неспецифическим иммуномодулирующим свойством. Оно зависит прежде всего от присутствия в препаратах биологически активных веществ (лизоцим, компоненты системы комплемента, цитокины). 1 крепективным источником создания специфических иммуноглобулиновых препаратов являются моноклональные антитела, они обладают узкой специфичностью и могут быть получены в большом количестве. Получение и контроль качества иммуноглобулинов
Наиболее часто для получения препаратов иммуноглобулина применяют метод Кона, метод фракционирования белков этиловым спиртом. Используются различные модификации этого метода, фракционирование проводится при низкой температуре. Используются дополнительные способы фракционирования с целью освобождения препаратов от пигментов, гонадотропных гормонов, групповых веществ крови и других антигенов. Для гарантии исключения вирусной контаминации в современном производстве применяются дополнительные методы обезвреживания сывороточных препаратов: пастеризацию (термическую обработку материалов при 60°С в течение 10 часов), обработку хлороформом, полиэтиленгликолем, ß-пропиолактоном. ультрафиолетовое облучение.
Препараты иммуноглобулинов контролируются но физико-химическим свойствам на содержание общего белка, фрагментированных и агрегированных молекул, на электрофоретическую однородность, степень очистки от балластных сывороточных белков, на стерильность, токсичность, пирогенность, способность к хлопкованию, наличие HBsAg и антител к вирусу гепатита С и ВИЧ. По российским требованиям количество фрагментов и агрегатов иммуноглобулина в коммерческих препаратах не должно превышать 3%. хотя по европейской фармакопее этот процент измененных молекул в препаратах иммуноглобулина может достигать 10.
Нормальный иммуноглобулин, полученный по методу Кона, состоит в основном из IgG. IgM и IgA остаются в балластных фракциях, хотя они содержат антитела, играющие важную роль в развитии иммунитета против бактериальных и вирусных инфекций. При использовании метода Кона IgM и IgA попадают в осадок В. наиболее опасный в отношении возможной контаминации ретровирусами. В связи с этим для получения обогащенных препаратов применяются дополнительные методы фракционирования и очистки иммуноглобулинов с помощью методов ионообменной хроматографии, адсорбционной хроматографии, ультрафильтрации, а также дополнительные методы их обезвреживания.
Моноклинальные антитела - антитела, вырабатываемые иммунными клетками, принадлежащими к одному клеточному клону, то есть произошедшими из одной клетки- предшественницы. Моноклональные антитела распознают' и связывают антигены для распознавания специфических эпитопов. которые обеспечивают защиту против болезнетворных организмов.
Они связывают различные белки, которые влияют на активность клеток, такие как рецепторы или другие белки, представленные на поверхности нормальных и раковых клеток. Специфичность моноклональных антител позволяет им связывать раковые клетки и, взаимодействуя с цитотоксическими агентами, такими как сильные радиоактивы, разрушают раковые клетки, не повреждая здоровые.
Раковые клетки, которые способны реплицироваться бесконечно, сливаются с клетками млекопитающих, которые продуцируют специфические антитела, что приводит к образованию гибридом, постоянно продуцирующих антитела. Эти антитела называют моноклональными, которые происходят из одного типа клеток, т.е. из клеток-гибридом. Антитела, получаемые с помощью традиционных методов, получают из клеток различного типа и называют поликлональными.
Моноклональные антитела искусственно производят против специфических антигенов, для связи с антигенами-мишенями. Лабораторное производство моноклональных антител, основанное на получении антигенов из одной клетки, позволяет получать идентичные друг другу моноклональные антитела.
При слиянии культур миеломных клеток с антителами клеток селезенки млекопитающих образуются гибридные клетки/ гибридомы, которые производят моноклональные антитела в большом количестве. Моноклональные антитела являются гораздо более эффективными методами, чем традиционные методы лечения, поскольку эти методики воздействуют не только на инородную субстанцию, но и на собственные клетки организма, что вызывает сильные побочные эффекты. Моноклональные антитела взаимодействуют только с инородными антителами/ клетками-мишенями, не оказывая или оказывая минимальные побочные эффекты.
Присутствие большого количества специфических моноклональных антител в крови говорит о присутствии в организме аномального белка. Как правило, этот белок может быть обнаружен в процессе клинического обследования и идентифицирован с помощью скринингового анализа крови, например, с помощью белкового электрофореза. Источником аномального производства моноклональных антител является популяция плазматических клеток в костном мозге.
Интерферон - полипептид, вырабатывающийся и аккумулирующийся во всех ядросодержащих клетках крови и эпителиальных клетках слизистых оболочек. Он является основным звеном противоинфекционной защиты человека. Интерфероны вырабатываются и выделяются местно, в околоклеточное пространство. Действуют преимущественно на близлежащие клетки.
В зависимости от типа клеток-продуцентов все интерфероны можно разделить на:
•а-интерфероны.
• ß-интерфероны.
•у-интерфероны.
По способу получения интерфероны делятся на:
1 .Природные, получаемые из культуры клеток лейкоцитов человека, стимулированных вирусами.
2.Рекомбинантные, продуцируемые бактериями со встроенным геном интерферона в их геном.
Показания к применению:
Препарат предназначен для профилактики и лечения гриппа, а также других ОРВИ (острых респираторных /дыхательных/ вирусных инфекций).
- При плановом обследовании сотрудников детского сада при помощи реакции Вассермана серопозитивных лиц не было выделено. Но при заборе крови мед сестра обратила внимание на многочисленные пустулы на руке одной из нянь. Диагностику какого заболевания проводят с помощью этой реакцией? На чем основано проведение реакции Вассермана? Какие дополнительные исследования можно провести чтобы исключить наличие этого заболевания у няни.
Реакция Вассермана (РВ)
Для пробы на реакцию Вассермана исследуется кровь из локтевой вены. При заражении больного сифилисом проба на реакцию Вассермана дает положительный результат не сразу, а только через 6—7 недель.
При сероотрицательной стадии первичного сифилиса отрицательная реакция Вассермана не может служить показателем отсутствия болезни и для того, чтобы подтвердить или опровергнуть диагноз, используются более точные методы диагностики
· Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
Эта проба основана на том, что бледные грепонемы, которые берут от зараженного сифилисом кролика, при взаимодействии с сывороткой больного сифилисом человека дают желто-зеленоватое свечение при микроскопировании в люминесцентном микроскопе. Если сифилиса у испытуемого человека нет, то свечения не наблюдается. Если же свечение выявлено, то его интенсивность оценивается так же, как при пробе на реакцию Вассермана:
1+ или отсутствие свечения — отрицательная проба 2+, 3+, 4+ — положительная проба
Важно то, что РИФ дает положительный результат на более ранних стадиях сифилиса, чем РВ, из-за ее большей чувствительности.
· Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)
Эта проба позволяет распознать ложноположительный результат РВ, который иногда может быть у здорового человека, поэтому обычно при положительном анализе на РВ его подтверждают или опровергают при помощи анализа на РИБТ. В некоторых случаях используются и другие методы диагностики, например, компьютерная томография для диагностирования нейросифилиса, но эти методы не столь распространены и применяются в редких случаях по решению венеролога. Точнейшим методом диагностики возбудителя является ПЦР-диагностика( до 95% точности)
- Состав и применение АДС-анатоксина