Опосредованный клетками киллинг. Антителозависимая и антителонезависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность.

Ответ: Опосредованный клетками Киллинг - форма иммунного реагирования осуществляется непосредственно клетками-киллерами. Киллинг способны осуществлять активированные фагоциты, Т-киллеры, естественные киллеры. Клегки-киллеры осуществляют санацию организма от чужеродных, трансформированных или инфицированных клеток.

Механизм. Киллеры вырабатывают ряд веществ, обладающих цитотокси чески м или цитолитическим действием: вызывают некроз нарушением целостности клеточной мембраны (или стенки) или индуцируют апоптоз. Цитотоксические субстанции синтезируются только при активации клетки. Киллеры осуществляют свою функцию дистантно или при непосредственном контакте. Мишень- раковотрансформированные, мутантные или зараженные вирусами клетки, грибы, простейшие, гельминты и некоторые бактерии. Способ распознавании генетической чужеродносги клеток-мишеней

1) Антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность реализуется благодаря экс­прессии на мембране иммунокомпегентных клеток рецепторов к Fc-фрагменту молекулы иммуноглобулина . Эти рецепторы являются трансмембранными белковыми молекулами и различаются по специфичности и аффинности. FcR всегда специализирован к определенному изотипу тяжелой цепи молекулы Yg. Высокоаффинные могут взаимодействовать с интактной молекулой иммуноглобулина, используя ее в дальнейшем как ко-рецепторный фактор (базофилы, тучные клетки), низкоаффинные — связываются уже с иммунным комплексом. Антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность могут осуществлять активированные макрофаги, эозинофилы и естественные киллеры.

Активированные макрофаги продуцируют перекисные и N0'—ион-радикалы и ферменты, которьП поражают мембрану клетки на расстоянии или после фагоцитирования. Первичное распознавание чужеродных клеток происходит при помощи FcR по антителам, которые связались с поверхностными антигенами клеток-мишеней.

Так же принимают участие естественный киллер ЕК с фенотипом СБ 16 С056^мало. На своей поверхности они несут низкоаффинный FcR к молекуле Yg, связанной антигеном в иммунный комплекс. Этот фенотип ЕК постоянно циркулирует в биологических жидкостях в поиске клеток, инфицированных различными паразитами (вирусами, бактериями, простейшими) и «помеченных» Yg. При контакте с зараженной клеткой индуцирует разрушение клеток-мишеней осмотическим лизисом (перфорин) или индукцией в них апоптоза (гранзимы, гранулизин).

У эозинофилов имеет противогельминтную ориентацию. Она реализуется благодаря наличию на их мембране низкоаффинных FcR к YgA или YgE, связанных в ИК. Э выделяют путем дегрануляции антигельминтные токсические факторы (F и белк токсины) и синтезируют цитокины, стимулирующие клеточное звено иммунитета и липидные медиаторы воспаления.

2) Антителонезависимаи клеточно-оиосредованнаи цитотоксичность осуществляется без непосредственного участия молекулы Yg. Ее индукторы - клетки лимфоидного ряда, несущие иммунорецепторы «прямого» распознавания. К этой группе клеток относятся Т-хелперы, Т- киллеры и СО 16СВ56^{М| 1010} естественные киллеры.

Прямой механизм цитотоксичности предполагает совмещение индукторной и эффекторной функции одной и той же клеткой без посредников. Основной клеткой, использующей этот тип механизма, является Т-киллер (AB-тип). Эта клетка при помощи TCR распознает антиген в составе МНС 1 класса на мембране клеток собственного организма и определяет аллогенность клетки- мишени. Контакт зрелого активированного Т-киллера с чужеродной клеткой-мишенью запускает их цитотоксические механизмы: осмотический лизис (перфорин) и индукцию апоптоза (гранзимы, гранулизин).

Киллинг клетки-мишени этапы:

2) Установление плотного контакта. Т-киллер прикрепляется к поверхности клетки-мишени. Образуется тесный контакт, или интерфейс, с узким синаптическим пространством.

2) Активация Т-киллера. Эффекгорная клетка при помощи своего ТСК анализирует комплекс МНС I класса. При установлении чужеродносги этого комплекса Т-киллер активируется и начинает синтезировать токсические субстанции, которые накапливаются в гранулах. Происходит полярное перераспределение внутриклеточных органелл киллера. Это необходимо для обеспечения строго направленного действия.

2) Экзоцитоз токсических субстанций. Содержимое !ранул выделяется в узкое си- наптическое пространство между клет ками путем экзоцитоза.

2) Токсическое воздействие. В результате воздействия перфорина в мембране клетки-мишени образуются поры, способные вызвать осмотический лизис. Через поры внутрь клетки проникают гранзимы и гранулизин и запускают аноптоз.

Непрямой механизм цитотоксического эффекта характерен для Т-хелперов. При помощи ТСК эти клетки способны распознать чужеродные антигены в составе МНС II класса. Однако сами они не являются эффекторами. Т1-хелпер активирует макрофаг, включая его цитотоксические свойства, а Т2-хелпер — эозинофил.

2. В бактериологическую лабораторию поступило несколько образцов кожи КРС для определения зараженности возбудителем сибирской язвы. Какой экспресс-метод исследований следует применить для этой цели? Что необходимо иметь в наличии в лаборатории? Каковы действия в случае положительного заключения?

Ответ: По эпидемиологическим показаниям исследуют различные объекты внешней среды, а также шерсть и щетину животных. Все образцы помещают в герметичные сосуды и транспортируют закупоренными в опломбированных боксах или деревянных ящиках в лаборатории особо опасных инфекций.

Микробиологическую диагностику проводят с соблюдением правил техники безопасности как при особо опасных инфекциях. Для диагностики применяют все пять методов микробиологической диагностики.

Первоначально готовят мазки и окрашивают их по Граму и для обнаружения капсул (по Романовскому Гимзе) и спор (по Ауэске). Наличие в мазках крупных грам-положительных стрептобацилл, окруженных капсулой, дает возможность поставить предварительный диагноз. Люминесцентная микроскопия применяется как дополнительный метод диагностики сибирской язвы, при этом сибиреязвенные бациллы, обработанные люминесцирующей сывороткой - палочки с ободком, светящиеся зеленоватым светом. Для выделения ЧК исследуемый засевают на МПА и МПБ, а также заражают лабораторных животных (белые мыши, морские свинки). Выделенную чистую культуру идентифицируют но общепринятой схеме с учетом морфологии, характера роста на МПА и МПБ, разжижения желатина в виде перевернутой елочки, отсутствия подвижности, положительного теста «жемчужного ожерелья» и лизиса сибиреязвенным бактериофагом «ВА-9» и «Саратов». Дополнительно определяют лецитиназную, фосфатазную и гемолитическую активность. В биопробе патологический материал или испытуемую культуру вводят подкожно: морским свинкам в паховой области, мышам в корень хвоста. Обычно мыши погибают через 1-2 суток, морские свинки — через 2-4 суток. Наблюдение за животными продолжают в течение 10 дней. У павших животных исследуют печень, селезенку, лимфатические узлы, почки, кровь из полостей сердца, места введения исследуемого материала. О наличии возбудителя сибирской язвы

свидетельствуют типичная патолог о-анатомическая картина у подопытных животных: отек в месте введения исследуемого материала, темная не свернувшаяся кровь, кровоизлияния в клетчатке, рыхлая селезенка и плотная красная печень. В мазках-отпечатках из органов и крови — наличие грамположительных капсулированных палочек. Серодиагностика проводится в тех случаях, когда не удается обнаружить возбудителя в материале. Для определения антител в сыворотке крови больного используют реакцию латексной агглютинации или РПГА с прогективным сибиреязвенным АГ. Сибиреязвенные антигены определяют в РИФ, ИФА, РСК, РИГА, РП в геле и реакции термопреципитации по Асколи. Реакция Асколи имеет большое значение, гак как позволяет обнаружить возбудитель при от­рицательных результатах бактериологического исследования. Наличие сибиреязвенного ан­тигена в разложившемся или мумифицированном трупе животного, коже (свежей, сухой, выделанной) и изделиях из нее, шкурках, мехе, шерсти определяют с помощью реакции термонрецини гации но Асколи. Однако для прижизненной диагностики она не дает серьезных преиму ществ перед бактериологическим и серологическим методами.

Для ретроспективной диагностики при эпидемиологических исследованиях ставят кожные аллергические пробы с антраксином. Антраксин вводят внутрикожно объемом 0,1 мл, результаты учитывают через 24—48 ч. Пробу считают положительной при наличии гиперемии диаметром более 16 мм и инфильтрата.

Дтя экстренной профилактики назначают сибиреязвенный иммуноглобулин. Не специфическая профилактика санитарно-ветеринарным мероприятиям:

• Изоляция больных и подозрительных животных.

• Сжигание трупов погибших животных и зараженных объектов (подстилка, навоз).

• Обеззараживание мест содержания больных животных.

• Очистка водопоев.

• Осушение заболоченных участков (перепахивание, хлорирование).

• Организация скотомогильников. При невозможности сжигания трупов их хоронят на отдельных сухих и пустынных участках; глубина ямы должна быть не меньше 2 м, труп кладут на толстый слой хлорной извести и засыпаю! ею сверху слоем до 10 см. Все мероприятия по захоронению следуег проводить с соблюдением санитарных норм.

• Санитарный надзор за предприятиями, занятыми переработкой животного сырья. Все поступающее сырье проверяют в реакции термопреципитации по Асколи, меховые изделия изготовляют только из сырья, давшего отрицательный результат в этой реакции.

Реакция термопрецини гации но Асколи. основана на обнаружении термостабильных антигенов Bacillus anthracis, которые экстрагируют физиологическим раствором из исследуемого материала. Сыворотку для осаждения (преципитации) получают при гипериммуннизации лошадей убитой культурой сибиреязвенного микроба. Если в исследуемом экстракте имеется антиген, то на границе его контакта с раствором сыворотки появляется тонкое кольцо помутнения.