Приготовление мазков из твердых и жидких пит. Сред.

При приготовлении мазка с плотной питательной среды на обезжиренное предметное стекло нанести петлей небольшую каплю воды. В правую руку взять бактериологическую петлю, в левую - пробирку с культурой. Простерилнзовать петлю, внося ее в пламя горелки в вертикальном положении. После того как петля накалится докрасна, провести конец петледержателя через пламя. Вынуть пробку из пробирки, захватить ее мизинцем правой руки. Обжечь на спиртовке крал пробирки. Внося петлю в пробирку, охладить ее, касаясь стенок пробирки. Затем петлей с поверхности среды снять очень небольшое количество культуры. Не касаясь стенок пробирки, вынуть петлю, еще раз обжечь края пробирки над спиртовкой и закрыть ее пробкой. Захваченную петлей культуру внести в приготовленную ранее каплю воды, хорошо размешать и равномерно распределить по стеклу в виде небольшого круга или овала (1-1,5 см в диамет-ре). По окончании приготовления мазка вновь простерилнзовать петлю.
Для приготовления мазка из бульонной культуры на предметное стекло нанести 1-2 петли исследуемого материала и равномерно распределить по стеклу (не требуется использование воды). С обратной стороны стекла карандашом по стеклу записать шифр препарата и обвести мазок,
Высушивание. Высушивание мазка производится на воздухе. Для ускорения высушивания предметное стекло с мазком, обращенным кверху, подержать в струе теплого воздуха, высоко над пламенем спиртовки, не внося препарат в пламя.
Фиксация. Используют физический и химический методы фиксаций. Физический - фиксация мазка над пламенем горелки или спиртовки в течение нескольких секунд мазком вверх. Эту операцию проводят достаточно быстро, стараясь не перегреть мазок так как при перегревании могут произойти необратимые изменения в клетке. Химический метод фиксации - более мягкий по сравнению с фиксацией на пламени. В качестве фиксаторов используют этанол, ацетон, смесь Никифорова (этанол + эфир 1:1), метанол, фйрмалин. После фиксации мазок можно окрашивать.

Правила работы с микроскопом.Виды микроскопов.Микроскоп - это оптический прибор, позволяющий получить обратное изображение изучаемого объекта и рассмотреть мелкие детали его строения, размеры которых лежат за пределами ра Микроскоп состоит из оптической и механической частей. Механическая часть представлена:штатив;тубус;предметный столик.Оптическая часть представлена: зеркало;конденсор;объектив;окуляр .

Правила работы с микроскопом

1. Работать сидя;

2. осмотреть, вытереть

3. установить перед собой, немного слева на 2-3 см от края стола. Во время работы не сдвигать;

4. Открыть полностью диафрагму, поднять конденсор в крайнее верхнее положение;

5. Работу с микроскопом всегда начинать с малого увеличения;

6. Опустить объектив в рабочее положение, т.е. на расстояние 1 см от предметного стекла;

7. Установить освещение в поле зрения микроскопа, используя электроосветитель или зеркало.

8. Положить микропрепарат на предметный столик так, чтобы изучаемый объект находился под объективом. Глядя сбоку, опускать объектив при помощи макровинта до тех пор, пока расстояние между нижней линзой объектива и микропрепаратом не станет 4-5 мм;

9. Смотреть одним глазом в окуляр и вращать винт грубой наводки на себя, плавно поднимая объектив до положения, при котором хорошо будет видно изображение объекта. Нельзя смотреть в окуляр и опускать объектив. Фронтальная линза может раздавить покровное стекло, и на ней появятся царапины;

10. Передвигая препарат рукой, найти нужное место, расположить его в центре поля зрения микроскопа;

11. Если изображение не появилось, то надо повторить все операции пунктов 6, 7, 8, 9;

12. Для изучения объекта при большом увеличении, сначала нужно поставить выбранный участок в центр поля зрения микроскопа при малом увеличении

13. По окончании работы с большим увеличением, установить малое увеличение, поднять объектив, снять с рабочего столика препарат, протереть чистой салфеткой все части микроскопа, накрыть его полиэтиленовым пакетом и поставить в шкаф.Виды микроскопов:оптический,электронный,биологические,люминисцентные,

Криминалистические,стереомикроскоп…

Репродукция вирусов. Для вирусов характерен дизъюнктивный способ репродукции-размножения. Потомство вируса возникает в результате сборки нуклеиновых кислот и белковых субъединиц, которые синтезируются раздельно клеткой хозяина. Проникновение вируса в клетку и воспроизведение себе подобных проходит в несколько фаз: проникновение в клетку хозяина, синтез ферментов, необходимых для репликации вирусных нуклеиновых кислот, синтез вирусных частей, сборка и композиция зрелых вирионов, выход зрелых вирионов из клетки. Фаза I -- адсорбция вириона на поверхности клетки. Протекает в две стадии: первая -- неспепифическая, когда вирус удерживается на поверхности клетки благодаря возникновению противоположных зарядов между отдельными участками мембраны клеток и вируса. Эта фаза взаимодействия вируса с клеткой обратима, на нее оказывают влияние такие факторы, как рН и солевой состав среды. Вторая стадия -- специфическая, когда взаимодействуют специфические рецепторы вируса и рецепторы клетки, комплементарные друг другу. По химической природе рецепторы клетки могут быть мукопротеидашг (или мукополисахаридами) и липопротеидами. Разные вирусы фиксируются на разных рецепторах: вирусы гриппа, парагриппа, аденовирусы -- на мукопротеидах, а вирусы клещевого энцефалита, полиомиелита -- на липопротеидах. Фаза II -- проникновение вируса в клетку. Электроноскопические наблюдения за процессом проникновения вирусов в чувствительные к ним клетки показали, что оно осуществляется посредством механизма, напоминающего пиноцитоз, или, как чаще называют, виропексис. В месте адсорбции вируса клеточная стенка втягивается внутрь клетки, образуется вакуоль, в которой оказывается вирион. Параллельно клеточные ферменты (липазы и протеазы) вызывают депротеинизацию вириона -- растворение белковой оболочки и освобождение нуклеиновой кислоты. Фаза III -- скрытый период (период эклипса -- исчезновения). В этот период в клетке невозможно определить наличие инфекционного вируса ни химическими, ни электронно-микроскопическими, ни серологическими методами. О сущности этого явления и его механизмов пока известно мало. Предполагается, что в скрытой фазе нуклеиновая кислота вируса проникает в хромосомы клетки и вступает с ними в сложные генетические взаимоотношения. Фаза IV -- синтез компонентов вириона. В этой фазе вирус и клетка представляют единое целое, вирусная нуклеиновая кислота выполняет генетическую функцию, индуцирует образование ранних белков и изменяет Функцию рибосом. Ранние белки подразделяются на: белки-ингибиторы (репрессоры), подавляющие метаболизм клеток; белки-ферменты (полимеразы), обеспечивающие синтез вирусных нуклеиновых кислот. Синтез нуклеиновых кислот и белков протекает неодновременно и в разных структурных частях клетки. У вирусов, содержащих ДНК или РНК, эти процессы имеют некоторые различия и особенности. Фаза V -- формирование зрелых вирионов. Процесс «сборки» вируса осуществляется в результате соединения компонентов вирусной частицы. У сложных вирусов в этом процессе принимают участие клеточные структуры и происходит включение в вирусную частицу липидных, углеводных, белковых компонентов клетки хозяина. Процесс формирования вирионов начинается спустя определенное время после того, как начал осуществляться синтез составляющих их компонентов. Продолжительность этого периода довольно вариабельна и предопределяется природой вируса -- для РНК-содержащих обычно короче, чем для ДНК-вирусов. Например, продукция полных вирусных частиц осповакцины начинается приблизительно спустя 5--6 ч после инфицирования клеток и продолжается в течение последующих 7--8 ч, т. е. после того как синтез вирусной ДНК уже завершен. Между нуклеиновой кислотой и соответствующим белковыми субъединицами образуются очень прочные связи, о чем свидетельствуют трудности отделения белка от вирусной нуклеиновой кислоты. Большую прочность вирусной частице придают входящие в ее состав углеводы и особенно липиды. Формирование вирионов, так же как и синтез компонентов вируса, происходит в разных местах клетки, при участии различных клеточных структур. После завершения процесса формирования образуется зрелая дочерняя вирусная частица, обладающая всеми свойств вами родительского вириона. Но иногда наблюдается образование так называемых неполных вирусов, которые состоят или только из нуклеиновой кислоты, или из белка, или из вирусных частиц, формирование которых остановилось в какой-то промежуточной стадии. Фаза VI -- выход зрелых вирионов из клетки. Существуют два основных механизма выхода зрелых вирионов из клетки: 1) выход вириона с помощью почкования. В этом случае наружная оболочка вириона происходит из клеточной мембраны, она содержит как материал клетки хозяина, так и вирусный материал; 2) выход зрелых вирионов из клетки через бреши в мембране. Эти вирусы не имеют наружной оболочки. При таком механизме выхода вирусов клетка, как правило, погибает и в среде появляется большое количество вирусных частиц.

Риккетсии.Риккетсиозы (Rickettsiosis) — группа болезней, вызываемых внутриклеточными микроорганизмами, риккетсиями. Как правило, передаются они трансмиссивным, а также воздушно-капельным, пылевым и алиментарным путями и сопровождаются признаками интоксикации и лихорадки.

Rickettsia — род микроорганизмов сем. Rickettsiaceae, объединяющий полиморфные, неподвижные, грамотрицательные микроорганизмы, окрашивающиеся по Романовскому-Гимзе. Они не растут на обычных бактериальных питательных средах; для их культивирования нужны питательные субстраты, содержащие живые (переживающие) клетки, желточный мешок развивающихся ЭК, культуры клеток чувствительных животных. Это мелкие внутриклеточные паразиты, обычно короткие с закругленными концами палочки размером 0,2—0,5X0,3—1,5 мкм. Располагаются они одиночно или парами, иногда имеют кокковидную овальную или нитевидную форму. Размножаются только в цитоплазме или в цитоплазме и ядре пораженных клеток поперечным делением или дроблением (нитевидные формы). Они имеют клеточную стенку, цитоплазматическую мембрану, рибосомы, ядерный аппарат, синтезируют белок, ДНК, РНК, АТФ, ферменты промежуточного обмена. Цитоплазматическая мембрана отличается высокой проницаемостью, что служит основой паразитического образа жизни риккетсии.

Риккетсии — аэробы, образуют гемолизины, активно окисляют глюта-миновую кислоту, выделяя углекислый газ, но индифферентны к глюкозе, образуют токсические вещества, сходные в иммунологических реакциях с бактерийными токсинами, но, будучи связанными с риккетсиями, они не выделяются в окружающую среду.

Риккетсиозы регистрируют у разных видов диких млекопитающих (преимущественно грызунов) и птиц. В период риккетсиемии мелкие дикие млекопитающие становятся источниками возбудителя для блох и клещей, через которых он может передаваться животным и человеку. Риккетсиозы протекают преимущественно бессимптомно, как Ку-лихорадка у рогатого скота, или в виде такого тяжелого, нередко оканчивающегося гибелью животного, заболевания, как гидроперикардит. К болезням, вызываемым патогенными риккетсиями, относятся: Ку-лихорадка, зооантропонозное заболевание крупного и мелкого рогатого скота и человека, инфекционный гидроперикардит крупного и мелкого рогатого скота, риккетсиозный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота, овец, коз и верблюдов, моноцитозы риккетсиозные (клещевая лихорадка овец и коз, эрлихиоз крупного рогатого скота, риккетсиозный моноцитоз собак).

Как сапрофиты, риккетсии обнаружены у кровососущих членистоногих (в кишечнике овечьего рунца, блох, вшей, клопов, власоедов).

Ку-лихорадка (Q-febris) — природно-очаговая зооантропонозиая болезнь домашних, промысловых и диких млекопитающих животных и птиц. Вызывается она риккетсиями и протекает чаще бессимптомно, при обострении — с признаками кратковременной лихорадки, поражением ретикулоэндотелиальной системы. Название произошло от первой буквы английского слова Qveri fever — буквально: «вопросительная лихорадка», так как в начале причина болезни была не ясна, т. е. «лихорадка не выясненного происхождения». Регистрируют ее на всех континентах, протекает у животных обычно доброкачественно, летальность незначительна, однако при осложнениях у животных снижается продуктивность, они абортируют, приплод погибает.

Возбудитель — риккетсия Бёрнета (R. Burneti) сем. Rickettsiaceae — кокковидный микроорганизм размером 0,2—0,5X0,25 мкм; культивируется при 37 °С в желточном мешке ЭК, к экспериментальному заражению чувствительны морские свинки и белые мыши. Риккетсии могут длительно сохраняться в сухих и влажных субстратах. В молоке выдерживают нагрев до 90°С 1 ч, но гибнут за 5 мин при кипячении и за 1 мин при 100°С. В фекалиях клещей, молоке и нехлорированной воде при 4С остаются живыми более года.

Эпизоотологические данные. Основной источник и резервуар в природных очагах — клещи и грызуны. В естественных условиях животные заражаются через укусы клещей, аэрогенно, алиментарно с кормом и водой, загрязненными выделениями грызунов-риккетсионосителей. Исследованиями сывороток крови в РДСК выявлено 3—7 % положительно реагирующих животных среди внешне здорового крупного и мелкого рогатого скота.

Клинические признаки. Инкубационный период — от 3 до 30 дн. Болезнь развивается медленно, часто латентно с накоплением специфических антител в сыворотке крови. Обладая выраженной избирательностью, риккетсии размножаются в легких, лимфатических узлах, молочной железе, селезенке и семенниках. Накапливаясь в значительном количестве, они образуют микронекротические фокусы с замещением их соединительной тканью. Формируется аллергическая сенсибилизация организма.

На 3-й день инкубационного периода (после экспериментального заражения) у крупного рогатого скота повышается температура тела до 41—41,8°С и удерживается 3—5 дн. Отмечают угнетение, отказ от корма, серозные ринит и конъюнктивит, значительное и на продолжительный период (до нескольких месяцев) снижение удоя молока, у стельных коров аборты, рождение нежизнеспособного плода, плацентиты. В течение 3—8 мес регистрируют повторные, нерегулярные подъемы температуры тела.

В естественных условиях заражения болезнь у коров протекает чаще бессимптомно и выявляют ее лишь серологическими исследованиями и заражением лабораторных животных. Однако иногда отмечают приступы острого лихорадочного состояния, аборты на втором периоде стельности и длительное выделение риккетсии с молоком, мочой и испражнениями. Кроме того, отмечают бронхопневмонию, поражения половых органов, маститы (у быков орхиты), конъюнктивиты.

Рост и размножение бактерий.Термином "рост" обозначают увеличение размеров отдельной особи, а "размножение" - увеличение числа особей в популяции.Бактерии размножаются путем бинарного деления пополам, реже путем почкования. У грамположительных бактерий из клеточной стенки и цитоплазматической мембраны образуется перегородка, враста­ющая внутрь. У грамотрицательных бактерий образуется перетяжка, и затем происходит разделение клетки на две особи.Делению клеток предшествует репликация бактериальной хромо­сомы по полуконсервативному типу. При этом двуспиральная цепь ДНК раскручивается, каждая нить достраивается комплиментарной нитью и в результате каждая дочерняя клетка получает одну мате­ринскую нить и одну вновь образованную.Быстрота размножения разных видов бактерий различна. Боль­шинство бактерий делятся каждые 15-30 минут. Микобактерии тубер­кулеза делятся медленно - одно деление за 18 часов, спирохеты - одно деление за 10 часов.Если посеять бактерии в жидкую питательную среду определен­ного объема и затем каждый час брать пробу и определять количество живых бактерий в такой замкнутой среде и составить график, на кото­ром по оси абсцисс откладывать время в часах, а по оси ординат лога­рифм количества живых бактерий, то получим кривую роста бактерий. Рост бактерий подразделяют на несколько фаз:1) латентная фаза (лаг-фаза) - бактерии адаптируются к пита­тельной среде, количество их не увеличивается;2) фаза логарифмического ро­ста - количество бактерий увели­чивается в геометрической про­грессии;3) фаза стационарного роста, во время которой число вновь об­разованных бактерий уравнивает­ся числом погибших, и количество живых бактерий остается постоян­ным, достигая максимального уровня. Это М-концентрация - величина, характерная для каждого вида бактерий;4) фаза отмирания, когда число отмирающих клеток начинает пре­обладать над числом жизнеспособных бактерий вследствие накопления продуктов метаболизма и истощения среды.Культура бактерий в такой замкнутой несменяющейся среде на­зывается периодической. Если же в засеянный объем непрерывно подают свежую питательную среду и удаляют такое же количество жидкости, то такую культуру называют непрерывной. Количество живых бактерий в такой культуре будет постоянно в М-концентрации. Непрерывное куль­тивирование применяют в микробиологической промышленности.

Рост микроорганизмов в жидких питательных средах.не характеризуется большим разнообразием.При микроскопическом исследовании(невооруженным глазом)отмечают характер и степень помутнения среды:равномерное (диффузное)интенсивное,умеренное,слабое и в виде опалесценций.Учитывают цвет,оттенок пленки,толщину(грубая,нежная,тонкая,толстая).Культуры микробов некоторых видов в жидкой среде образуют осадок-он может быть обильный и незначительный,плотный(компакный).Рост культуры в жидкой среде может быть пристеночным.Культуры микроорганизмов некоторых видов могут обладать одновременно не одним,а несколькими признаками проявления роста в жидкой среде.

Рост микроорганизмов на плотной питательной среде.(МПА).Проявляется образованием колоний-скоплений микробов,образующихся в результате размножения одной бактериальной клетки.Колонии характеризуются большим разнообразием,могут быть изолированными и слившимися. Учитывают след.признаками:а)форма(круглая,овальная);б)размер(изм.с помощью линейки или окуляра микрометра микроскопа);крцпные(диаметр свыше 4мм);средние(диаметр 2-4мм);мелкие(диаметр 1-2мм);в)край колонии-ровный S-форма шероховатая;R-форма-волнистая,бахромчатый,зубчатый;г)прозрачность и блеск;д)цвет;е)

Профиль(рельеф);ж)поверхность;з)консистенция.

Систематика (классификация) бактерий. Одна из систематик делит бактерии на два порядка - шизомицеты (дробящиеся грибки) и актиномицеты (лучистые грибки), внутри которых различают семейства и роды. В основу деления на семейства взята внешняя форма бактерий и способность их к спорообразованию, а в основу деления на роды - положение перегородки при делении клетки и степень извитости клетки. Шизомицеты подразделяют на шесть семейств: кокки, бактерии, спириллы, спирохеты, десмобактерии и бациллы. Семейство кокки объединяет шаровидные бактерии - кокки. Они имеют форму шара, подвижность и спорообразование у них наблюдается очень редко. Это семейство включает три рода, насчитывающие более 300 видов: стрептококки размножаются путем деления клеток всегда в одной плоскости и образуют цепочки из двух и более клеток; сарцины размножаются путем деления последовательно в трех взаимно перпендикулярных плоскостях и образуют пакеты из восьми сросшихся клеток; микрококки размножаются путем деления в разных плоскостях, поэтому встречаются в виде одиночных клеток (микрококки), соединенных по четыре клетки (тетракокки) или целых скоплений клеток (стафилококки). Семейство бактерии включает один род - собственно бактерии, объединяющие более 300 видов. Этот род представлен неспорообразующими палочковидными подвижными и неподвижными клетками. Бактерии встречаются в виде одиночных, а также соединенных попарно и цепочками палочек. Семейство спириллы состоит из двух родов спирально извитых и изогнутых палочек, не образующих спор: спириллы имеют длинные и сильно изогнутые клетки, напоминающие спираль или штопор. Часто они бывают снабжены пучком полярных жгутиков. вибрионы характеризуются короткими, слабо изогнутыми клетками, напоминающими запятую. Движение вибрионов осуществляется преимущественно за счет одного полярного жгутика. Семейство спирохеты подразделяют на несколько родов - спирохеты, лептоспиры и др. Представители этого семейства имеют очень длинные и тонкие клетки, длина которых во много раз превышает толщину. Клетки многократно изогнуты, наподобие длинной спирали. К этому семейству относятся главным образом болезнетворные бактерии, например, возбудители сифилиса, возвратного тифа и др. Среди нитчатых бактерий бывают подвижные и неподвижные формы. Движение нитчатых бактерий осуществляется изгибанием тела, жгутиков они не имеют. Семейство бациллы состоит из одного рода - бациллы. К ним относятся подвижные и неподвижные спорообразующие палочки, которые после спороношения принимают веретенообразную форму (клостридиум) или форму барабанных палочек (плектридиум). Группа бацилл включает многочисленных представителей (более 500 видов). Они широко распространены в природе и участвуют в превращениях азотистых и без-азотистых веществ. Среди бацилл имеются болезнетворные формы, вызывающие опасные заболевания.

Систематика вирусов

Классификация.
а)Вирусы классифицируются по сердцевине:
ДНК-содержащие и РНК-содержащие (ретро) вирусы.
б)По структуре капсомеров.
Изометрические (кубические), спиральные, смешанные.
в)По наличию или отсутсвию дополнительной липопротеидной оболочки
г)По клеткам-хозяинам
Кроме этих классификаций есть еще много других. На пример, по типу переноса инфекции от одного организма к другому.
Семейство Picornaviridae. (pico-маленький, RNA)
Вирион лишен суперкапсида, кубической формы, 22-30 нм. Липидов и углеводов в составе нет. Геном - односпиральная, линейная РНК. Размножение происходит в цитоплазме клеток.
Семейство Flaviviridae (flavus – желтый).
Флавивирусы – большая группа вирусов, поражающая позвоночный и насекомых. Вирионы представляют собой сферические частицы диаметром 40-60 нм. Нуклеокапсид имеет икосаэдрическую форму и покрыт наружной липопротеиновой оболочкой. Геном представлен одной одноцепочечной нитевидной молекулой РНК. Размножение вируса происходит в цитоплазме, созревание вирионов происходит почкованием через внутрицитоплазматические мембраны и везикулы.
Семейство Birnaviridae.
Бирнавирусы – небольшая группа вирусов, поражающая позвоночных, беспозвоночных и насекомых. Вирионы представляют собой сферические частицы диаметром 60 нм. Они состоят из сердцевины, содержащей РНК и белок и икосаэдрического капсида, построенного и 92 капсомеров. Вирионы содержат 90% белка, 10% РНК, липидов нет. Геном представлен двумя фрагментами 2-спиральной линейной РНК.
Семейство Herpesviridae.
Герпесвирусная инфекция – самая распространенная среди людей и животных. В семейство входят вирусы поражающие ЦНС (энцефалит, миелит, энцефаломиелит), глаза (кератит, кератоконьюнктивит), слизистые оболочки (афтозные язвы, стоматит, поражение гениталий), кожные покровы (экзема, везикулярные воспаления). В семейство герпесвирусов входят вирусы вызывающие такие болезни животных как:

Спирохеты. Спирохеты - микроорганизмы, имеющие штопорообразную извитую форму с тонким, спирально извитым телом и сильно выраженной подвижностью. Спирохеты - группа 1 - включает порядок Spirochaetales . Тонкие спиралевидные одноклеточные формы, обладающие своеобразной морфологией и способом движения ( рис. 13 ). Длина клеток колеблется от 5 до 250 мкм. Склонны к образованию аномальных форм (гранул, цист ). Размножаются поперечным делением. Клетки состоят из протоплазменного цилиндра, аксиальной нити и наружной оболочки. Оболочка тонкая и эластичная, что и обеспечивает спирохетам своеобразный способ передвижения. Грамотрицательны. Представители этой группы различно относятся к кислороду. Есть среди них облигатно аэробные , факультативно и облигатно анаэробные формы. Хемоорганогетеротрофы , существенно различающиеся по степени требовательности к субстрату. Среди них есть свободноживущие формы, основное место обитания которых - пресные и соленые озера, среда с высоким содержанием H2S; комменсалисты , обитающие в желудочно- кишечном тракте пресноводных и морских моллюсков, и паразиты. Некоторые виды патогенны: Treponema pallidum - возбудитель сифилиса ; Borrelia recurrentis - возбудитель возвратного тифа .

Приготовление мазков.Мазки готовят различно. В тех случаях, когда материал жидкий, наносят каплю его на чистое предметное стекло и размазывают, пользуясь краем другого предметного стекла (лучше шлифованного); если материал очень густой (например, гной), то его либо разводят физиологическим раствором и тогда поступают, как в первом случае, либо размазывают тонким слоем по предметному стеклу при помощи петли или стеклянной палочки. Наконец, можно готовить мазки-отпечатки, для чего чистое предметное стекло прикладывают непосредственно к серозному покрову, слизистой оболочке или к свежей поверхности разреза какого-либо органа (ткани). При наличии жидкого содержимого (экссудат, моча и пр.) рекомендуется центрифугировать и из осадка готовить мазки. Полученные по одному из вышеуказанных способов мазки тщательно высушивают и затем фиксируют сухим жаром. Фиксация достигается посредством несильного нагревания (примерно до 70°С) предметного стекла, которое для этого трижды проводят над пламенем спиртовки мазком вверх. Можно фиксировать мазки и в 96°спирте (10--15 минут).Метод Михина :1 на фиксированный мазок крови или мазок отпечаток с места разреза ткани органа (печени, почки, селезенки) наносим щелочной раствор метиленовой сини(по Леффлеру); 2подогревают до появления паров, в горячем виде выдерживают 5-7 мин; 3 окраску сливают, быстро промывают водой высушивают фильтровальной бумагой, и микроскопируют – вегетативная клетка окрашивается в синий цвет, окружающая ее капсула – в розово-красный цвет. Метод Романовского – Гимзы: 1 фиксированный мазок отпечаток помещают мазок вниз в чашку Петри, на дне устанавливают подставки – стеклянные или деревянные палочки; 2 под препарат наливают краску Гимзы (чтобы осадок остался на дне чашки) окрашивают 40-50 мин; 3 промывают, высушивают, микроскопируют – вегет клетка синий цвет, окружающая ее капсула в розовый цвет. Метод Ольта; 1свежий горячий 2% фильтрат водного раствора сафронина наносят на фиксир препарат, окраш 5-7 мин ; 2 быстро(слегка) промывают водой, высушивают, микроскопируют- вегет клетки окрашив в красно-кирпичный цвет, капсула в желто-оранжевый цвет. Метод Циль –Нельсона: на фиксир препарат кладут лист белой фильтровальной бумаги на него наливают раствор карболового фуксина, снизу препарат подогревают над пламенем до появления паров и оставляют на мостике 5-7 мин затем краску с бумагой сливают( непромывая) и обесцвечивают 3-5%раствором серной кислоты 5-7 сек, хорошопромывают водой и дополнительно окрашивают метиленовой синькой Леффлера 4-5 мин. В заключении препарат промывают водой и высуш филтров бумагой. Кислотоустойчивые бактерии окрашив в красный цвет, некислоустойчивые в синий цвет. Метод Миллера: 1 фиксир мазок протравляют 5%хромовой кислоты 2-3 мин; 2 промывают водой, высушивают филтров бумагой ;3 окрашив карбоновым фуксином; 4 препарат снизу подогревают до появления паров, окрашивают 5-7 мин; 5 краску сливают, не промывая водой, обрабатыв 5% раствором серной кислоты 5-7 сек; 6 хорошо промывают водой; 7 окрашивают метиленовой синью 4-5 мин;8 промываем водой, сушим фильтровальной бумагой, микроскопируют – споры окрашив в розово-красный цвет, вегетатив клетки в синий. Метод Леффлера: 1 Мазок кладут на 0,5--1 мин в слегка нагретую протраву (100 мл 12 % водного раствора танина + 50 мл насыщенного на холоде раствора сульфата железа + 50 мл спиртового раствора фуксина). 2. Хорошо промывают мазок водой и ополаскивают в спирте. 3. Окрашивают насыщенным раствором фуксина в анилиновой воде, к которому по каплям добавляют 1 % гидроксида нутрия до тех пор, пока раствор не станет мутным и не начнет выпадать, осадок красителя. Раствор красителя наливают на часовое стекло, мазок пускают плавать, подогревая краситель на спиртовке до появления паров. Окрашивают в течение 1-2 мин.

Стафилококки. Представители данного рода — неподвижные грамположительные кокки, диаметр клетки которых составляет от 0,6 до 1,2 мкм. Для представителей рода характерно расположение микробных клеток «виноградными гроздьями» в чистой культуре. Стафилококки — факультативные анаэробы, при этом они не образуют спор или капсул. Некоторые стафилококки синтезируют характерные пигменты. Широко распространены в почве, воздухе, представители нормальной кожной микрофлоры человека и животных. В состав этого рода входят патогенные и условно-патогенные для человека виды, колонизирующие носоглотку, ротоглотку и кожные покровы[1].Патогенные стафилококки продуцируют эндо- и экзотоксины, ферменты, нарушающие жизнедеятельность клеток[2]. Например, виды, обладающие способностью к синтезу эксфолиативного токсина, могут вызывать «синдром ошпаренной кожи», а гиалуронидаза «разрушает» соединительную ткань не позволяя организму локализовать очаг. Устойчивость стафилококков в окружающей среде высока: при температуре 60°C они погибают через 1 ч, в высушенном состоянии на перевязочном материале сохраняются до 6 мес; в экссудате — до 2,5-3,5 лет. Стафилококки представляют собой грамположительные недвижимые аэробные или факультативные анаэробные кокки, принадлежащие к семейству микрококков. Стафилококки - это целый класс микроорганизмов, на данный момент известно уже 27 видов, при этом 14 видов обнаружены на коже и слизистых оболочках. Большинство стафилококков совершенно безвредны: из упомянутых 14 видов, только 3 способны вызывать заболевания, но и этих трех более чем достаточно. Коварность и болезнетворность любой бактерии, а стафилококк в данном аспекте не исключение, обозначается присутствием так называемых "факторов патогенности" - т. е. опасен не микроб сам по себе, а совершенно определенные вещества. Есть три вида болезнетворных стафилококков: золотистый стафилококк (по-латыни - staphylococcus aureus, , эпидермальный стафилококк (S. epidermidis) и сапрофитный стафилококк (S. saprophyticus). Сапрофитный стафилококк – самый "мирный" и крайне редко поражает детей. Огромный любитель женского пола – чаще всего и именно у женщин провоцирует воспаления мочевого пузыря (реже почек), так как основное место его обитания - кожа в районе гениталий и слизистая оболочка мочеиспускательного канала. Эпидермальный стафилококк – меньше разборчив, жить может где угодно - на разных слизистых оболочках, на любом участке кожи - это нашло отражение и в названии микроба (эпидермис - поверхностный слой кожи). Возможность S. epidermidis провоцировать заболевания невелика - организм здорового человека любого возраста (даже новорожденного) легко с ним борется. Золотистый стафилококк-cамый известный. На его фоне все остальные представители стафилококкового племени кажутся безобидными домашними животным. Может вызывать гнойные воспалительные процессы почти во всех органах и тканях.

Стерилизация- процесс, направленный на полное уничтожение всех микроорганизмов в каком-либо объекте. Для стерилизации используют физические, химические методы и их сочетание. Стерилизация высокой температурой. Прокаливание на огне. Это надежный метод стерилизации, но он имеет ограниченное применение из-за порчи предметов. Таким спосо­бом стерилизуются бактериологические петли. Стерилизация сухим жаром. Проводится в печи Пастера (сухожаровый шкаф) при температуре 160-170°С в течение 1-го часа. Этим способом стерилизуют лабораторную стеклянную посуду, пипетки, завернутые в бумагу, пробирки, закрытые ватными пробками. При температуре выше 170°С начинается обугливание бумаги, ваты, марли. Стерилизация паром под давлением (автоклавирование). Наиболее универсальный метод стерилизации. Проводится в автоклаве - водопаровом стерилизаторе. Принцип действия автоклава основан на зависимости температуры кипения воды от давления. Автоклав представляет собой двустенный металлический котел с герметически закрывающейся крышкой. На дно автоклава наливают воду, в рабочую камеру помещают стерилизуемые предметы, закрыва­ют крышку, сначала не завинчивая ее герметически. Включают нагревание и доводят воду до кипения. Образующийся при этом пар вытесняет из рабочей камеры воздух, который выходит наружу через открытый выпускной кран. По окончании стерилизации автоклав отключают, ждут, пока давление не снизится, выпускают постепенно пар и открывают крышку. Стерилизация текучим паром проводится в аппарате Коха или в автоклаве при незавинченной крышке и открытом выпускном кране. Вследствие этого стерилизация текучим паром могут подвергаться только питательные среды, т.к. для прорастания спор необ­ходимо наличие питательных веществ. Стерилизация облучением УФ-лучи. Лампы ультрафиолетового излучения используют для обез­зараживания воздуха лечебных учреждений, бактериологических боксов и лабораторий, а также для стерилизации жидкостей с помощью особых аппаратов. Стерилизации ионизирующим излучением подвергаются в меди­цинской и микробиологической промышленности разнообразные объекты: лекарственные средства, перевязочные материалы, шелк, хирургические перчатки, одноразовые шприцы, пластмассовые труб­ки для внутривенного введения и многие другие материалы. Химическая и физико-химическая стерилизация. Химическую стерилизацию применяют для обработки рук хирурга, операционного поля пациента, хирургических инструментов и перчаток, анестезирующих масок. Применяют некоторые дезинфицирующие средства, хлоргексидин и многие другие вещества. Физико-химические методы - это сочетание физических и хими­ческих воздействий на микроорганизмы, например, действие дезин­фицирующего вещества и нагревания. Методы частичного обеспложивания. Кипячение - применяется для обработки шприцев, игл, инструмен­тов. Стерилизацию проводят в течение 30 минут в специальных стери­лизаторах для инструментов, в воду для устранения ее жесткости и по­вышения температуры кипения рекомендуется добавить 1-2% бикарбо­ната натрия. При кипячении споры бактерий не погибают, поэтому для стерилизации питательных сред этот способ не применяется. Подлежа­щие кипячению инструменты подвергаются обработке специальными мющими растворами для удаления крови и т.п. Пастеризация._Метод был предложен Пастером для частичного обеспложивания жидкостей, теряющих свои качества под действием высокой температуры. Применяется для обработки вина, молока, дру­гих пищевых продуктов. При прогревании жидкости при 50-60°С в те­чение 30 минут, 70-80°С 5-10 минут и 90°С 2 минуты погибает большин­ство бесспоровых микробов. Споры остаются живыми. Поэтому во избежание их прорастания пастеризованный продукт необходимо хра­нить в холодильнике. Холодная стерилизация. Фильтрование - освобождение жидкостей от микробов, применяется в тех случаях, когда материал не может быть подвергнут нагреванию. Фильтры должны быть настолько мелкопористыми, чтобы задерживать микробы. Бактериальные фильтры изготавливаются из мелкопористых веществ в виде фарфоровых свечей, асбестовых пластинок Зейтца или мембранных фильтров. Фильтрование производят, создавая с помощью насоса разрежение в приемнике. Перед употреблением фильтрующее устройство должно быть простерилизовано. Вирусы проходят через бак­териальные фильтры, поэтому метод фильтрования можно отнести к ме­тодам частичного обеспложивания. Этот метод используют не только для стерилизации питательных сред и растворов, но и для того, чтобы освободить от микробов токсины, антибиотики, бактериофаги, вирусы.

Стрептококк. Стрептококки - это грамм положительная, неподвижный, бесспоровый кокк, который обнаруживают в виде цепей или парных клеток. Отдельные клетки – это яйцевидно-круглые кокки, 0,6-1,0 мк<