Работа 1. Определение мочевой кислоты в биологических жидкостях
Принцип метода. Мочевая кислота восстанавливает фосфорно-вольфрамовый реактив с образованием соединения голубого цвета, оптическая плотность которого при 640 нм пропорциональна концентрации мочевой кислоты в исследуемой жидкости (моча)
Порядок выполнения работы:
| Реактивы | Калибровочная проба | Опытная проба |
| Моча (разведение 1:10) | - | 2 мл |
| Калибровочный раствор мочевой кислоты (0,03 ммоль/л) | 2 мл | - |
| Раствор карбоната натрия (20%) | 1 мл | 1 мл |
| Фосфорновольфрамовый реактив | 0,5 мл | 0,5 мл |
Содержимое пробирок тщательно перемешать. Через 30 мин определить оптическую плотность на ФЭКе при 640 нм (красный светофильтр) против воды в кювете с толщиной оптического слоя 1 см. Расчет экскреции мочевой кислоты производится по формуле:
С = ( Еопыт : Екалиб) х 0,03 х 10 х Д
где: С – концентрация мочевой кислоты в пробе
Еопыт - оптическая плотность опытной пробы
Екалиб – оптическая плотность калибровочной пробы
0,03 - содержание мочевой кислоты в калибровочной пробе
10 - перерасчет на разведение мочи
Д - суточный диурез (♂ - 1,5 л/сут, ♀ - 1,2 л/сут, дети – 1 л/сут)
Нормальные значения:
Экскреция мочевой кислоты с мочой: 1,6 – 3,54 ммоль/сут(270 – 600 мг/сут)
Концентрация мочевой кислоты в крови: ♂ - 0,24 – 0,50 ммоль/л
♀ - 0,16 – 0,44 ммоль/л
Клинико-диагностическое значение определения мочевой кислоты и уратов в биологических жидкостях:
Гиперурикемия – повышение концентрации мочевой кислоты в крови
Гиперурикурия– увеличение выделения мочевой кислоты с мочой (урикозурия)
Гипоурикурия -уменьшение выделения мочевой кислоты с мочой
Возможные причины гиперурикемии:
I. Первичные гиперурикемии (обусловлены энзимодефектами): подагра, синдром Леш-Нихана
II. Вторичные гиперурикемии:
- алиментарные (пищевые);
- нарушение экскреции мочевой кислоты при поражении почек;
- усиление катаболизма (распада) собственных нуклеопротеинов тканей.
Варианты изменения концентрации мочевой кислоты в крови и моче:
| Гиперурикемия Гипоурикурия | Подагра (во время приступа) Поражение почек (острый и хронический нефрит) |
| Гиперурикемия Гиперурикурия | Избыточное потребление нуклеопротеинов с пищей (мясо,икра и др) Катаболизм собственных нуклеопротеинов тканей и органов (лейкоз, лучевая болезнь, гемолиз, злокачественный рост, лечение цитолитиками и цитостатиками, артрит, диабет, голодание, аллергия, гипоксия и др.) |
| Гипоурикемия Гипоурикурия | Прием KJ, хинина, атропина Прогрессирующая мышечная дистрофия |
Задания для СРС во внеучебное время
Задания для самоконтроля подготовки к практическому занятию (тесты):
1. Источниками атомов азот при биосинтезе пуринового ядра являются:
а) асп, глу(н), гли
б) глу, ала, про
в) лиз, ала, гли
г) три, мет,гли
2. Синтез пуриновых нуклеотидов замедляется при недостатке витамина:
а) аскорбиновой кислоты
б) пантотеновой кислоты
в) фолиевой кислоты
г) рибофлавина
3. Инозиновая кислота – это нуклеотид, пуриновая часть которого представлена:
а) гипоксантином
б) ксантином
в) аденином
г) гуанином
4. Конкурентным ингибитором ксантиноксидазы является:
а) аллопуринол
б) гипоксантин
в) метилурацил
г) эритромицин
5. «Пиримидиновый голод» наблюдается при
а) авитаминозах
б) гипоэнергетических состояниях
в) синдроме Леш-Нихана
г) отрицательном азотистом балансе
д) оротацидурии
6. Значительное снижение активности фермента гипоксантин-гуанин-фосфорибозилтрансферазы имеет место при
а) синдроме Леш-Нихана
б) алкаптонурии
в) оротацидурии
г) синдроме Вернике-Корсакова
7. Гиперурикемия – это повышение в крови:
а) мочевины
б) аммиака
в) мочевой кислоты
г) оротовой кислоты
8. Выберите правильные ответы. Причиной развития подагры могут быть следующие метаболические нарушения:
а) активация синтеза пуриновых нуклеотидов
б) активация синтеза пиримидиновых нуклеотидов
в) подавление реутилизации пуриновых нуклеотидов
г) недостаточность фолиевой кислоты
9. Соли мочевой кислоты называются:
а) нитраты б) карбонаты
в) оксалаты г) ураты
10. Выделение мочевой кислоты с мочой у здорового человека в норме составляет:
а) 1 - 2 г/сут б) 270-600 мг/сут
в) 20-30 мг/сут г) 20 - 35 г/сут
Задания для контроля уровня сформированности компетенций в учебное время:
1. Какой конечный продукт образуется при катаболизме пуриновых азотистых оснований?
2. Какие конечные продукты образуются при катаболизме пиримидиновых азотистых оснований?
3. С какого метаболита начинается синтез пуриновых нуклеотидов de novo?
4. Какие аминокислоты участвуют в синтезе пуринов?
5. Назовите промежуточный метаболит в синтезе АМФ и ГМФ.
6. Как регулируется синтез пуриновых нуклеотидов?
7. Какие вещества участвует в синтезе пиримидиновых нуклеотидов?
8. Назовите промежуточный метаболит в синтезе пиримидиновых нуклеотидов.
9. При участии, какого белка образуются дезоксирибонуклеотиды?
10. Почему структурные аналоги азотистых оснований, нуклеозидов и нуклеотидов нашли применение в качестве противовирусных и противоопухолевых препаратов?
11. Каковы биохимические принципы лечения подагры, подагрических синдромов и кризов?
12. Какими биохимическими методами анализа можно подтвердить или исключить подагру?
13. Почему длительное время подагру считали "болезнью гурманов"?
14. Почему подагра считается «привилегией» мужчин?
15. С чем связан тот факт, что в последние годы увеличилось количество заболеваний, связанных с нарушениями обмена нуклеиновых кислот?
16. Каковы биохимические методы коррекции нарушений метаболизма при развитии мочекаменной болезни, обусловленной образованием уратных камней?
17. Каковы биохимические механизмы развития гиперурикемии у больных синдромом Леш-Нихана?