Работа 1. Определение мочевой кислоты в биологических жидкостях
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ СТУДЕНТОВ
к практическим занятиям
Модуль VI. Обмен и функции нуклеиновых кислот. Матричные биосинтезы
учебной дисциплины (модуля)«Биохимия»
для специальности Лечебное дело
курс II семестр 4
| Составитель: Артюкова О.А., к.б.н., доцент Рецензент: Лемешко Т.Н., к.б.н., доцент |
Владивосток – 2016 г.
Практическое занятие № 5 (29)
Тема:«Биосинтез и катаболизм нуклеотидов. Количественное определение мочевой кислоты в крови и моче»
Мотивация: получить представление о судьбе нуклеиновых кислот (как эндогенных, так и экзогенных) в организме, образовании конечных продуктов обмена; уметь использовать эти знания для объяснения причин нарушений пуринового обмена и биохимических методах коррекции.
Общая цель:Полученные по данной теме знания формируют общекультурные и профессиональные компетенции (ПК- 3, ПК-15) , необходимые в последующем для изучения вопросов профессиональной направленности.
Конкретные цели и задачи.
- знатьбиосинтез и катаболизм пуриновых нуклеотидов и нарушения синтеза, приводящие к развитию патологий (подагра, синдром Леш-Найхана); биосинтез и катаболизм пиримидиновых нуклеотидов и нарушения синтеза, приводящие к развитию патологий (ортацидурия); образование дезоксирибонуклеотидов и нарушения синтеза, приводящие к развитию иммунодефицитов. Ингибиторы биосинтеза рибо-и дезоксирибонуклеотидов, используемые как противовирусные и противоопухолевые препараты. Функции нуклеотидов и их производных в клетках организма.
- уметь использовать знания о путях синтеза и распада нуклеотидов для понимания патогенеза заболеваний, связанных с нарушением их метаболизма; объяснять действие ингибиторов биосинтеза рибо-и дезоксирибонуклеотидов, используемых в качестве противовирусных и противоопухолевых препаратов.
- владетьметодом анализа получаемой по дисциплине информации с позиции междисциплинарных связей и будущих задач профессиональной деятельности. Владеть медико-функциональным понятийным аппаратом (терминами):подагра, гиперурикемия, гипоурикемия, гиперурикурия (урикозурия), синдром Леш-Нихана, ксантинурия,
оротацидурия.
Вопросы, изученные на предшествующих дисциплинах и необходимые для освоения темы:
1. Строение и свойства азотистых оснований, нуклеотидов и нуклеиновых кислот (биоорганическая химия)
Этапы проведения занятия:
1. Вводная часть
2. Основная часть занятия: лабораторная работа
3. Заключительная часть занятия
Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию
Перечень контрольных вопросов для самоконтроля знаний:
1. Обмен и функция нуклеиновых кислот.
2. Биосинтез и катаболизм азотистых оснований нуклеиновых кислот. Представление о биосинтезе пуриновых нуклеотидов. Роль ФРПФ. Происхождение атомов пуринового кольца. ИМФ как предшественник АМФ и ГМФ. Регуляция синтеза пуриновых нуклеотидов.
3. Катаболизм пуриновых нуклеотидов. Пути регенерации пуриновых нуклеотидов.
4. Нарушения метаболизма пуринов: подагра, синдром Леша-Найхана.
5. Синтез пиримидиновых нуклеотидов.
6. Синтез дезоксирибонуклеотидов.
7. Использование ингибиторов синтеза дезоксирибонуклеотидов в химиотерапии онкологических заболеваний.
8. Регуляция синтеза пиримидинов. Конечные продукты распада пиримидинов. Нарушения метаболизма пиримидинов.
Ориентировочная основа деятельности (ООД) студентов для проведения лабораторной работы
Работа 1. Определение мочевой кислоты в биологических жидкостях
Принцип метода. Мочевая кислота восстанавливает фосфорно-вольфрамовый реактив с образованием соединения голубого цвета, оптическая плотность которого при 640 нм пропорциональна концентрации мочевой кислоты в исследуемой жидкости (моча)
Порядок выполнения работы:
| Реактивы | Калибровочная проба | Опытная проба |
| Моча (разведение 1:10) | - | 2 мл |
| Калибровочный раствор мочевой кислоты (0,03 ммоль/л) | 2 мл | - |
| Раствор карбоната натрия (20%) | 1 мл | 1 мл |
| Фосфорновольфрамовый реактив | 0,5 мл | 0,5 мл |
Содержимое пробирок тщательно перемешать. Через 30 мин определить оптическую плотность на ФЭКе при 640 нм (красный светофильтр) против воды в кювете с толщиной оптического слоя 1 см. Расчет экскреции мочевой кислоты производится по формуле:
С = ( Еопыт : Екалиб) х 0,03 х 10 х Д
где: С – концентрация мочевой кислоты в пробе
Еопыт - оптическая плотность опытной пробы
Екалиб – оптическая плотность калибровочной пробы
0,03 - содержание мочевой кислоты в калибровочной пробе
10 - перерасчет на разведение мочи
Д - суточный диурез (♂ - 1,5 л/сут, ♀ - 1,2 л/сут, дети – 1 л/сут)
Нормальные значения:
Экскреция мочевой кислоты с мочой: 1,6 – 3,54 ммоль/сут(270 – 600 мг/сут)