Влияние препарата JBP485 на гистологические изменения печени мышей, получивших конковалин А
Чтобы изучить влияние препарата JBP485 на гепатит, мы исследовали гистологические изменения печени мышей через 8 ч после введения конковалина А. В сравнении с нормальными клетками (Рисунки 3а, d), области портальной вены и долек печени инфильтрированы мононуклеарными и полимононуклеарными клетками. Микроскопическое исследование печени мышей, получивших Кон А, показало массивный некроз с цитплазматическим отеком в большинстве гепатоцитов (Рисунки 3b, е). Однако воспалительная инфильтрация, некроз и цитоплазматический отек уменьшился у мышей, получивших JBP485 (Рисунки 3с, f).
Рисунок 3.Влияние препарата JBP485 на некроз гепатоцитов и воспалительную инфильтрацию у мышей. Влияние препарата JBP485 на изменения некроза гепатоцитов (прямые стрелки) и воспалительную инфильтрацию (изогнутые стрелки) изучали через 8 ч после поражения печени, вызванного конканавалином А (Кон А) у мышей линии BALB/c. (a, d) Срезы печени мышей контрольной группы. (b, e) Срезы печени мышей через 8 ч после введения Кон А. (c, f) Срезы печени мышей, получивших JBP485 (25 мг/кг). Воспаление и некроз значительно уменьшились по сравнению с группой Кон А (n=6 для каждой группы, окрашивание гематоксилином и эозином, увеличение х 100 и х 400, соответственно).
Иммунногистохимический анализ ФНО-α и ICAM-1 в печени мышей, получивших конканавалин А
Чтобы определить, может ли препарат JBP485 влиять на экспрессию цитокинов и адгезивных молекул макрофагами и гепатоцитами, мы исследовали эффект JBP485 на экспрессию ФНО-α и ICAM-1 в тканях печени мышей, получивших Кон А, после внутрижелудочного введения JBP485. Экспрессию ФНО-α и ICAM-1 в тканях печени мышей изучали с помощью иммунногистохимического анализа (Рисунок 4). В контрольной группе (Рисунок 4 c, f) экспрессию ФНО-α и ICAM-1 визуализировали с помощью светло-коричневого окрашивания. Их экспрессия приводила к значительному апрегулированию через 8 ч после введения Кон А (Рисунок 4 a, d). По сравнению с группой Кон А, повышение экспрессии ФНО-α и ICAM-1 значительно подавлялось внутрижелудочным введением препарата JBP485 (Рисунок 4 b, e).
Рисунок 4.Гистопатологические изменения в печени мышей после провокации повреждения печени с помощью конканавалина А и после лечения препаратом JBP485. Изменения наблюдались после иммунногистохимического окрашивания для выявления фактора некроза опухоли альфа (ФНО-α) (a, b, c) и молекулы межклеточной адгезии - 1 (ICAM-1) (d, e, f) в тканях печени через 8 ч после введения конканавалина А (Кон А) мышам линии BALB/c (b, e) или без введения (a, d) JBP485 (25 мг/кг)ю В группе Кон А отмечалась гиперэкспрессия ФНО-α (прямые стрелки) и ICAM-1 (изогнутые стрелки) в цитоплазме; это повышение значимо ингибировалось введением препарата JBP485. (с) и (f) представляют контрольную группу (n=6, увеличение х 400).
Влияние препарата JBP485 на фрагментацию ДНК, вызванную конканавалином А
Чтобы определить, может ли JBP485 подавлять апоптоз гепатоцитов, исследовали влияние JBP485 на фрагментацию ДНК. Фрагментацию ДНК гепатоцитов исследовали с помощью электрофореза в агаровом геле (Рисунок 5). Характеристики маркера длин ДНК выявлены в группе Кон А, однако маркеры длин ДНК были значительно слабее в группе JBP485, что подтверждает способность препарата JBP485 ингибировать апоптоз гепатоцитов, вызванный инъекцией Кон А у мышей.