Принципы микробиологической диагностики инфекционных болезней
Лабораторная диагностика инфекционных болезней человека основана на обнаружении в организме больного микроба, вызвавшего болезнь, микробных антигенов или продуктов жизнедеятельности (токсинов и др.).
Материалом для исследования служат кровь, гной, моча, мокрота, ликвор, кал, рвотные массы, промывные воды и ткань (биопсия от живого организма или аутопсия от трупа). В некоторых случаях на исследование берут объекты окружающей среды: воздух, воду, пищевые продукты, смывы.
При взятии материала для микробиологического исследования необходимо соблюдать следующие правила:
- Количество материала должно быть достаточным для проведения исследования и при необходимости его повторения.
- Материал берут по возможности в начальном периоде болезни, именно в этот период возбудители выделяются чаще, их больше, они имеют более типичную локализацию.
- Материал должен быть взят до начала антимикробной химиотерапии или через определенный промежуток времени после введения антибактериального препарата, необходимый для его выведения из организма.
- Материал берут непосредственно из очага инфекции или исследуют, соответствующее отделяемое (гной, мочу, желчь и др.) в момент наибольшего содержания в нем возбудителя.
- Необходимо исключить возможность контаминации материала нормальной флорой больного и микробами окружающей среды.
- Любой клинический материал рассматриваться как потенциально опасный для человека.
Транспортировку материала в лабораторию следует проводить в максимально короткие сроки, соблюдая температурный режим, чтобы исключить гибель неустойчивых видов микроорганизмов, или помещать его в специальные транспортные среды. К материалу прилагают сопроводительный документ, содержащий основные сведения, необходимые для проведения микробиологического исследования (фамилия, имя и отчество больного, номер истории болезни, клинический диагноз и т. д.).
В процессе транспортировки материал следует оберегать от действия света, тепла, холода, от механических повреждений, чтобы исключить гибель микробов и контаминацию материала посторонней микрофлорой. Лучше всего доставлять материал в специальных металлических контейнерах.
Микробиологическая диагностика включает в себя пять методов:
микроскопический, микробиологический (культуральный), биологический, серологический и аллергический.
¨ Микроскопический метод - приготовление микроскопических препаратов (нативных или окрашенных) из исследуемого материала и их изучение с применением различных видов микроскопической техники (световая, темнопольная, фазово-контрастная, люминесцентная, электронная и др.). В бактериологии этот метод называют бактериоскопическим, в вирусологии - вирусоскопическим.
¨ Микробиологический (кулътуралъный) метод - посев исследуемого материала на питательные среды с целью выделения и идентификации чистой культуры возбудителя. В бактериологии культуральный метод называется - бактериологический в микологии - микологический, в протозоологии – протозоологический.
¨ Биологический метод (экспериментальный, или биопроба) - заражение исследуемым материалом чувствительных лабораторных животных. Его используют для выделения чистой культуры возбудителя, определения типа токсина и активности антимикробных химиотерапевтических препаратов.
¨ Серологический метод - определение специфических антител в сыворотке крови больного. С этой целью используют серологические реакции
¨ Аллергологический метод заключается в выявлении инфекционной аллергии (ГЗТ) на диагностический микробный препарат-аллерген. С этой целью ставят кожные аллергические пробы с соответствующими аллергенами.
Особое значение приобретают методы экспресс-диагностики, которые позволяют поставить микробиологический диагноз в течение короткого промежутка времени (от нескольких минут до нескольких часов) с момента доставки исследуемого материала в лабораторию. К этим методам относятся РИФ, ИФА, РИА, ПЦР, газовая хроматография и др.
В вирусологии методы лабораторной диагностики вирусных инфекций имеют свою специфику, учитывая особенности биологии вирусов. Используют три метода лабораторной диагностики:
вирусоскопический, вирусологический и серологический.
• Вирусоскопический метод заключается в обнаружении вируса в исследуемом материале под микроскопом. Чаще всего используют электронный микроскоп, реже люминесцентный.
• Вирусологический метод заключается в заражении исследуемым материалом лабораторных животных, куриных эмбрионов или культуры клеток, индикации вируса и его последующей идентификации.
Особенностью серологического метода в вирусологии является исследование парных сывороток. Первую сыворотку берут у больного в начале болезни, хранят при температуре 4-8 °С, а вторую сыворотку берут через 10-14 дней. Сыворотки исследуют одномоментно. О болезни свидетельствует сероконверсия, т.е. нарастание титра антител во второй сыворотке по сравнению с первой. Диагностически значимой является сероконверсия в 4 раза и выше.