Определение Rh фактора экспресс-методом в пробирке без подогрева

Rh-фактор может быть определен в свежей крови, консервированной крови, а также в эритроцитах после сформирования сгустка и отстаивания сыворотки.

Техника определения: на дно пробирки вносят одну каплю антирезусной универ­сальной сыворотки, добавляют одну каплю исследуемой крови или эритроцитов. Про­бирку встряхивают и несколько раз переворачивают, чтобы содержимое растеклось по стенкам, что ускоряет реакцию. Агглютинация наступает обычно в течение минуты, но наблюдение следует проводить не менее 3 минут. Для исключения неспецифической аг­регации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического р-ра и перемеши­вают путем 1-2 кратного перевертывания пробирки, но не взбалтывают!

Результаты оценивают визуально:

1. Наличие агглютинации указывает на Rh-положительную кровь.

2. Отсутствие агглютинации свидетельствует о Rh-отрицательной принадлежности крови.

Rh-фактор может быть определен также и анти-Dig М моноклональным реагентом (эритротест ТМ-Цоликлон анти-Дсупер) - диагностические моноклональные антитела для определения Rh-фактора в крови человека.

Техника определения: на чашку Петри или пластинку со смачиваемой поверхно­стью наносится большая капля (около 0,1 мл) реагента. Рядом помещается маленькая капля (0,01-0*05 мл) исследуемой крови и смешивается с реагентом. Пластинка после смешивания реагента с кровью покачивается не сразу, а через 30-60 с, что позволяет раз­виться более полной крупнолепестковой агглютинации. Наиболее крупная четкая агг­лютинация наблюдается при наличии в крови эритроцитов в высокой концентрации. Ре­акция агглютинации начинается через 10-15 с, четко выраженная агглютинация наступа­ет через 30-60 с. При применении подогретой до 37-40 С чашки Петри или пластинки время наступления агглютинации сокращается. Окончательный результат учитывается через 3 мин визуально:

1. Наличие агглютинации указывает на Rh-положительную кровь.

2. Отсутствие агглютинации свидетельствует о Rh-отрицательной принадлежности крови.

Примечания: Реагент хранится при температуре + 2 - +8 С, сыворотка хранится при температуре +5 - +8 С, хорошо укупоренная.

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

1. В клинику поступил больной с ожоговой болезнью, имеющего AB(IV) группу крови. Проведите дополнительное контрольное исследова­ние с целью исключения аутоагглютинации эритроцитов больного, ведуще­го к неправильному определению группы крови.

2. Исключите неспецифическую агрегацию эритроцитов при определе­нии резус-фактора экспресс-методом в пробирке без подогрева.

ПРОГРАММИРОВАННЫЙ КОНТРОЛЬ

1 Групповые агглютиногены крови находятся: а) в плазме крови: б) в сыворотке; в) в лейкоцитах: г) в эритроцитах: д) в тромбоцитах.

2. Агглютинины (антитела) содержатся: а) в сыворотке, б) в плазме кро­ви, в) в лейкоцитах, г) в эритроцитах, д) в тромбоцитах.

3. Наиболее частая разновидность подгруппового агглютиногена А: а) А¹; б) А²: в) А³; г) А⁴; д) А⁵.

4. Определение групп крови возможно в крови: а) нативной; б) стабили­зированной; в) взятой из пальца; г) без консерванта; д) взятой из раны во время операции.

5. Для определения группы крови используют: а) стандартные сыворот­ки; б) стандартные эритроциты; в) цоликлон анти-А; г) цоликлон анти-В; д) плазму.

6. Оптимальная температура окружающей среды при определении группы крови: а) +10°С; б) +15°С; в) +20°С; г) +25°С; д) +30°С.

7. Оптимальная температура хранения растворенных цоликлонов: а) +2°С; б) +5°С; в) +8°С; г) +10°С; д) +15°С.

8. Объемные отношения крови и цоликлона при определении группы крови: а) 1:5; б) 1:10; в) 1:15; г) 1:20; д) 1:25.

9. Длительность наблюдения за реакцией агглютинации при определении группы крови: а) 1 мин; б) 2,5 мин; в) 3 мин; г) 4,0 мин; д) 5 мин.

10.Оценка результатов реакции агглютинации эритроцитов: а) агглю­тинации нет с анти-А и анти-В Цоликлонами - группа крови 0(1); б) агглюти­нация с цоликлоном анти-А, отсутствует агглютинация с цоликлоном анти-В - группа крови В(Ш); в) агглютинация с цоликлоном анти-В, отсутствие с цо­ликлоном анти-А - группа крови В(Ш); г) агглютинация с обоими Цоликло­нами - группа крови 0(1); д) отсутствие агглютинации с цоликлоном анти-А. агглютинация с цоликлоном анти-В - группа крови А(И).

11 Количество основных антигенов резус-фактора: а) 2; б) 3; в) 4; г) 5; д) 6.

12.Наибольшая выраженность резус-фактора: а) в эритроцитах, б) лей­коцитах; в) тромбоцитах; г) плазме; д) сыворотке.

13.Основной антиген резус-фактора, имеющий наибольшее практиче­ское значение: а) Д; б) С; в) Е; г) д; д) с.

14.Число людей в процентах, содержащих в эритроцитах основной анти­ген резус-фактора (Д): а) 40; б) 50; в) 60; г) 70; д) 85.

15.Резус-фактор определяется антирезусной сывороткой: а) I группы; б) II группы, в) Ш группы; г) IV группы: д) универсальной (Д).

16.В какой крови возможно определение резус-фактора: а) в свежей кро­ви; б) консервированной, в) свертке-сгустке крови, г) взятой с операцион­ного белья, д) взятой с предметов (пол. стекло и тд.)

17.Длительность наблюдения за реакцией агглютинации при определении резус-фактора: а) 1 мин; б) 2 мин; в) 3 мин; г) 4 мин; д) 5 мин.

18.Оптимальная температура хранения универсальной антирезусной сы­воротки (Д) : а) +2°С; б) +5°С; в) +7°С; г) +8°С; д) + 10°С.

Приложение 1

Учебная карта практическою навыка по теме: "ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ"

'Этап	Оснащение	Выполнение	Ошибки
Подготовка хорошо осве­щенной комна­тыс темпера­турой окру­жающей среды от +15 до 25°С.	Цоликлон анти-А, цоликлонанти-В, иссле­дуемая кровь, чашка Петри (тарелка, план­шет); гашетки, стек­лянные палочки.	Чашку Петри (тарелку, планшет)делят линией пополам, наносят надписи:в од­ной половине "А", в другой "В". Под со­ответствующей надписью наносятЦоли­клоны по одной большой капли (0,1 мл), а рядом - исследуемую кровь объемом в 10 раз меньше капли цоликлона. Стеклянной палочкой обе капли тщательно перемеши­вают до получения гомогенной жидкости. Наблюдают за реакцией при покачивании чашки в течении чашки в течении 2,5 мин., после этого определяют результаты реакции: 1) положительная - наступила реакция агглютинации эритроцитов: 2) от­рицательная - агглютинации эригроцитов нет, капля остается равномерно окрашен­ной (агрегатов, хлопьев, одного большого агглютината нет). Полученная группа кро­ви вписывается в историю болезни, спец. журнали т.д.	Возможны из-за: - Окончания срока годности цоликлонов; Несоответствия объемов цоликлона и крови:. - Исследования некачественной крови (гемолизированная, слишком густая или слишком жидкая)'. - плохого освещения комнаты: - несоответствия температуры окру­жающей среды; - несоблюдения 2,5-минутиого наблюде­ния за течением реакции; - плохого перемешивания капель цозда-1 клона и крови: - плохой подготовки чашки Петри, та­релки.

Приложение 2