Лабораторная диагностика. Основным экспресс-методом диагностики является выявление токсина

Основным экспресс-методом диагностики является выявление токсина. Проводят выявление токсина в фильтрате исследуемого материала (пленки, ткани трупа) или материала после 4-5-часового подращивания бактерий в сывороточном бульоне. С этой целью можно ставить реакцию коагглютинации со стафилококковым антительным противодифтерийным диагностикумом. С этой же целью можно ставить РПГА, ИФА и ПЦР и ДНК-зонды для обнаружения гена tox в бактериальной хромосоме. При заражении культур клеток Vero дифтерийный токсин дает цитопатическое действие.

Бактериоскопический метод. В мазке из слизи зева и фибринозного налета при окраске по Нейссеру выявляют типичную морфологию возбудителя и явление метахромазии. Можно окрашивать препарат корифосфином и изучать препарат в люминесцентном микроскопе (оранжево-красное свечение).

Бактериологический метод – засевают материал на сывороточный агар и другие селективные среды (Клауберга, Тинсдаля и кровяной агар, т.к. некоторые штаммы дифтерийного возбудителя не растут при наличии теллура).

Определение Tox+ - реакция преципитации.

На чашку с сывороточным агаром накладывают фильтровальную бумагу, смоченную антитоксической противодифтерийной сывороткой, а вокруг на расстоянии 1,5 см сеют выделенные и идентифицированные дифтерийные культуры. Если культура выделяет экзотоксин, то он диффундирует в среду, и на месте встречи с антителами видны линии преципитации. При идентификации культуры в бактериологическом методе необходима дифференциация возбудителя дифтерии от других коринебактерий, которые могут вызывать дифтериеподобные заболевания или просто находиться в слизи зева.

Серологический метод используют при стертых формах и для выявления неиммунной прослойки населения. С этой целью ставят РПГА, ИФА и реакцию нейтрализации токсина в культуре клеток Vero.

Кожно-аллергическая проба на чужеродный белок.

Профилактика.

Специфическая: с трех месяцев после рождения детям вводят вакцину АКДС 3 раза с интервалом в 45 дней. Ревакцинация через 1,5-2 года, вводят АКДС, или АДС-М (мало), или АД (адсорбированный дифтерийный анатоксин) по схеме. При низком титре антител (менее 1:40 в РПГА или 0,03 мE/мл в реакции флоккуляции) по эпидемическим показаниям проводят ревакцинацию. К группам риска для вакцинации в РБ относят не только детей, но и взрослое население с низким уровнем (менее 1:40) антитоксических антител.

Лечение. Антитоксическая противодифтерийная сыворотка применяется в ранние сроки. Ее вводят по методу Безредки (дробно, постепенно увеличивают дозу). Параллельно используют антибиотики, глюкозу, витамины, антигистаминные препараты.

Бордетелла

Бордетеллы –возбудители коклюша – острого антропонозного воздушно-капельного инфекционного заболевания детей, которое характеризуется цикличным течением и приступообразным спастическим кашлем.

В.pertussis – коклюш; В.parapertusis – паракоклюш; В.bronchiseptica – ОРЗ.

Морфология.

ХАРАКТЕРИСТИКА В.pertussis

• C закругленными концами.

• Грамотрицательные палочки.

• При окраске толуидиновым синим - метахроматические биполярные гранулы.

• Жгутиков, спор нет.

• Имеют капсулу и пили

• Ферментативные свойства – слабые, не ферментирует углеводы

• Только на специальных средах, на КУА – в виде капелек ртути.

• Гемолиз на кровяном агаре.

ХАРАКТЕРИСТИКА В.parapertussis

• Растет на простых средах, на 2 сутки

• Капсулы нет

• Ферментативно более активна:

– Имеет уреазу, тирозиназу

– Образует красно-коричневый пигмент на КУА и агаре с тирозином

• Углеводы не ферментирует

• На МПА в виде коричневых колоний

Культуральные свойства.

• Строгие аэробы

• Прихотливы к питательным средам, нуждаются в факторах роста. В среды добавляют аминокислоты, кровь, уголь, ионообменные смолы, никотиновую кислоту, цистеин, метионин.

• Лучшими средами являются глицерино-картофельно-кровяной агар (среда Борде-Жангу); КУА (казеиново-угольный агар). Уголь и кровь добавляют в среды для адсорбции ЖК, которые образуются в процессе роста бордетелл. На этих средах возбудитель коклюша образует колонии в виде капелек ртути, паракоклюша – коричневые колонии.

• Скорость роста – 3-4 суток.

Биохимические свойстваслабо выражены.

Резистентность: чувствительны к температуре, солнечным лучам, к фенолу, лизолу.

Антигенная структура:

• О- Аг – соматический:

– 7 – родовой

– 1 – видовой B. pertussis

– 14 - B. parapertussis

– 12 - B. bronchiseptica

• К-Аг – поверхностный, 2 фракции:

– Белковая – термолабильная, свойства экзотоксина с нейротропным действием

– ЛПС – термостабильная, свойства эндотоксина

• Аг пилей

• Протективный Аг

Факторы патогенности

В.pertussi:

• Факторы адгезии:Пили.Филаментный гемагглютинин.Пертаксин – белок наружной мембраны клеточной стенки (мм 69 кДа).Капсульные агглютиногены.

• Токсины:

- Пертуссин–токсин – фермент из категории АДФ-рибозилтрансфераз, состоит из 2 субъединиц: А и В. Повышает уровень цАМФ (инактивирует белок G1– ингибитор аденилатциклазы) – повышение проницаемости сосудов. Усиливает чувствительность к гистамину и серотонину. Подавляет бактерицидность Мф.

- Внеклеточная аденилатциклаза: усиливает синтез и накопление цАМФ в клетках, угнетает дыхательный взрыв и бактерицидность Мф.

- Трахеальный цитотоксин – повреждаетэпителиоциты респираторного тракта. Бронхоспазм.

- Дермонекротоксин (термолабильный токсин) –местные повреждения

- Эндотоксин –ЛПС клеточной стенки, стимулирует выработку цитокинов, повреждение эпителия

Характеристика заболевания

Источник инфекции – больной ребенок и бактерионоситель. Путь передачи – воздушно-капельный.

Выделяют 3 периода заболевания:

I. Катаральный – очень заразный (насморк, кашель), длится 2 недели.

II. Период судорожного кашля – спастический кашель со спазмом гортани. 1 час.

III. Реконвалесценция наступает через 4-6 недель.

Иммунитет:

• Слабый естественный иммунитет у детей до трех лет – высокая восприимчивость.

• Приобретенный постинфекционный, видоспецифический, обычно стойкий, пожизненный.

• Механизмы приобретенного иммунитета:

Ø Гуморальный – формируются протективные антитела к адгезинам, токсину, пертактину. Местные IgA подавляют прикрепление возбудителя к эпителию.

Ø Клеточный. Развивается ГЗТ

Профилактика. Для специфической профилактики применяют АКДС (ассоциированную коклюшно-дифтерийную столбнячную вакцину) с 3-х-месячного возраста 3 раза с интервалом 45 дней. Ревакцинация моновакциной из убитых коклюшных бактерий в I фазе. Испытывается вакцина, состоящая из коклюшного анатоксина, гемагглютинина, пертактина (мембранный протеин) и антигена микроворсинок. Эту вакцину можно применять и для ревакцинации, и для первичной вакцинации.

Лечение: антибиотики, препараты Ιg, витамины. Холодный свежий воздух.

Лабораторная диагностика.

Материал для исследования: слизь задней стенки носоглотки, взятая тампоном. При наличии кашля применяют метод «кашлевых пластинок». Покашлять на КУА.

Идентификацию возбудителя проводят по морфологическим, культуральным, антигенным (с О-агглютинирующими сыворотками к 1, 14, 12 и 7 антигенам или в РИФ с антителами, меченными флюоресцеином) и биохимическим свойствам.

Дифференциальные признаки патогенных видов бордетелл

Признак	Bordetella pertussis	Bordetella parapertussis	Bordetella bronchiseptica
Жгутики	-	-	+
Редукция нитратов	-	-	+
Утилизация нитрата	-	-	+
Образование уреазы	-	+	+
Потемнение на МПА	-	+	+
Рост на среде Борде-Жангу через 24-48 ч через 72-96 ч	- +	+	+
Сенсибилизация мышей к гистамину	+	-	-
Специфический термолабильный антиген
Рост на простом агаре	-	+	+
Оксидазная активность	-	-	+
Восстановление нитратов	-	-	+
Капсула	+	+	-
Лимфоцитоз	+	-	-
Чувствительность к ингибиторам роста	+	-	-

Серологический метод – выявляют антитела в парных сыворотках больного, начиная со II периода заболевания в реакции агглютинации, РСК, РПГА или ИФА. Определяют также IgG и IgA против филаментозного гемагглютина и против токсина B. рertussis.

Аллергическая кожная проба – учет проводится через 20-24 часа (ПЧЗТ).

Гемофильные бактерии

Род Haemophilus.

H. influenzae – основной возбудитель Заболевания ВДП: бронхиты, пневмонии, у детей – менингиты.Отит. Эпиглоттит – воспаление надгортанника. Реже – другие воспалительные процессы: артрит, эндокардит, послеродовые инфекции, раневая инфекция и др. (ур. носительства среди здоровых – 90 %)

H. parainfluenzae

H. haemolyticus

H. aegypticus (биовар H. influenzae) – возбудитель заразного конъюнктивита

H. ducreyi – возбудитель мягкого шанкра

Морфология.

- Грам -, мелкие коккобактерии,

- Выражен полиморфизм,

- Имеют капсулу,

- Нет спор,

- Нет жгутиков.