Обезвоживание, уплотнение и заливка материала в парафин»

Оснащение: термостаты, бюксы/банки с притертой пробкой, фарфоровые стаканы, формочки для заливки, эксикатор, пинцет, водяная баня.

Реактивы: растворы спиртов различной концентрации (70% -100%), ксилол, парафин, смесь парафина и 5% воска.

Алгоритм действий:

1 этап – обезвоживание:

- Промытый материал поместить в 50% спирт на 1-3 часа

- Перенести в 70% спирт

- Перенести в 96% спирт 1 порция по 3-6 ч в каждом реактиве

- Перенести в 96% спирт 2 порция

- Поместить в 100% спирт

2 этап – уплотнение:

- Материал поместить для пропитыванияв ксилол (1-я порция) по 1-3 часа в каждой

- Перенести во 2-ю порцию ксилола порции

- Поместить материал в смесь ксилола с парафином в соотношении 1:1 в термостате при 37°С на 3-6 ч

- Пропитать материал в парафине (1-я порция) в термостате при 56°С

- Перенести материал во 2-ю порцию парафина по 1,5-2 ч в каждой порции

3 этап – заливка в парафин (вариант 1):

- Приготовить бумажные формочки*

- Емкость с парафином (2-я порция) перенести на водяную баню

- Теплым пинцетом перенести материал в центр бумажной формочки

- Заполнить формочку парафином для заливки**

- Формочки до краев погрузить в холодную воду, пока на поверхности не появится пленка

- Формочку полностью погрузить в воду до полного отвердения парафина.

* Схема приготовления бумажной формочки с использованием деревянного брусочка (А) и без него (Б)

А Б

3 этап – заливка в парафин (вариант ):

Заливка материала с использованием модульной системы для заливки в парафин

Оснащение: модульная система для заливки в парафин, заливочныеформы, пинцет,

Реактивы: парафиновая среда для заливки

Алгоритм действий:

- Выбрать заливочную форму в зависимости от размера кусочка

- Налить расплавленный парафин* в заливочную форму

- Перенести материал из кассеты в заливочнуюфоорму

- Накрыть заливочную форму крышкой от кассеты

- Завершить заливку материала через отверстия кассеты

- Поместить блок на поверхность охлаждающего модуля

- Отделить кассету с блоком от заливочной формы

- Образец готов к микротомии

* Если в лаборатории нет возможности использовать для заливки готовую гомогенизированную парафиновую среду (например, HISTOMIX), которая уже содержит в своем составе парафин, натуральный воск и синтетические полимерные добавки, то к этой порции парафина следует добавить 5% воска.

Приготовление спиртов различной концентрации»

Приготовление абсолютного спирта

Вариант 1.

Оснащение: фарфоровая ступка с пестиком, спиртовка, банка с притертой пробкой

Реактивы: сульфат меди, 96% спирт.

Алгоритм действий:

- Сульфат меди растереть в ступке до порошкообразного состояния

- Прокалить над спиртовкой, постоянно помешивая до полного испарения воды. При этом сульфат меди приобретает бледно-голубую окраску.

- Безводный сульфат меди засыпать в банку (1часть)

- Добавить 4-6 частей 96% спирта

- Плотно закрыть пробкой и взболтать

- Оставить сутки, периодически взбалтывая

- Если весь сульфат меди адсорбировал воду и вновь приобрел синюю окраску, спирт слить в новую банку, добавить безводный сульфат меди и перемешать. Процедуру повторяют до тех пор, пока сульфат меди не останется безводным.

Вариант 2.

Оснащение: термостат, фарфоровая ступка с пестиком, банка с притертой пробкой, прямоугольный лоток, бумага

Реактивы: сульфат меди, 96% спирт.

Алгоритм действий:

- Сульфат меди растереть в ступке до порошкообразного состояния

- Лист бумаги положить на дно прямоугольного лотка

- Распределить медный купорос тонким слоем на бумаге

- Поместить лоток в термостат при 56º С; периодически помешивать. При этом сульфат меди приобретает бледно-голубую окраску.

- Безводный сульфат меди засыпать в банку (1часть)

- Добавить 4-6 частей 96% спирта

- Плотно закрыть пробкой и взболтать

- Оставить сутки, периодически взбалтывая

- Если весь сульфат меди адсорбировал воду и вновь приобрел синюю окраску, спирт слить в новую банку, добавить безводный сульфат меди и перемешать. Процедуру повторяют до тех пор, пока сульфат меди не останется безводным.

Разведение спиртов»

Оснащение: мерный цилиндр, широкогорлые банки с притертыми пробками, таблица разведения спиртов.

Реактивы: спирт 96%, дистиллированная вода

Алгоритм действий:

- Изучить таблицу разведения спиртов и рассчитать необходимое количество 96% спирта и дистиллированной воды

- Отмерить в цилиндре необходимое количество 96% спирта и перелить его с подготовленную банку

- Отмерить мерным цилиндром требуемое количество дистиллированной воды и перелить ее в банку со спиртом

- Перемешать полученный раствор

Таблица 1