Тема: лабораторная диагностика простейших, гельминтов и яиц гельминтов.

ЦЕЛЬ: Знать особенности жизненных циклов простейших и гельминтов, пути их проникновения в организм человека, место локализации в организме, способы передачи возбудителей. Знать основные диагностические признаки наиболее распространенных возбудителей протозойных болезней и гельминтов – паразитов человека.

Уметь идентифицировать паразитов, вызывающих протозойные болезни и гельминтозы человека. Уметь диагностировать цисты простейших, яйца гельминтов.

МАТЕРИАЛ ДЛЯ САМОПОДГОТОВКИ к теме

«ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ПРОСТЕЙШИХ, ГЕЛЬМИНТОВ И ЯИЦ ГЕЛЬМИНТОВ»

Паразитарные инвазии во многих странах мира являются причиной высокой заболеваемости и смертности, при этом весьма часто они проявляются неспецифическими симптомами и признаками.

По данным Всемирной организации здравоохранения, основными паразитарными инфекциями на Земле инфицировано почти 4,5 млн человек. Но это только диагностированные случаи, реальная заболеваемость намного выше. Гельминтозы на сегодняшний день остаются наиболее распространенными паразитарными болезнями человека и имеют большое значение, особенно у детей.

Среди всех гельминтных инвазий преобладают аскаридоз, энтеробиоз, лямблиоз, трихинеллез, реже — описторхоз, трихоцефалез, стронгилоидоз, тениаринхоз, тениоз, гименолепидоз, дифиллоботриоз, токсокароз. В последнее время среди гельминтозов большое место занимают так называемые микст-инвазии, диагностика которых особенно трудна.

Большинство паразитарных болезней невозможно диагностировать с помощью одних только физикальных методов исследования, и лабораторные анализы необходимы для того, чтобы решить, имеется ли паразитарная инвазия у больного или нет, и при ее наличии определить, каким видом паразита она вызвана. Лабораторный анализ играет важную роль в постановке диагноза паразитарного заболевания и определяет выбор соответствующего лечебного препарата. Лабораторные анализы могут помочь врачу и принести пользу больному только в том случае, если их результаты будут точными и достоверными.

I. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ПАРАЗИТАРНЫХ БОЛЕЗНЕЙ

В лабораторной диагностике используют макроскопические, микроскопические и иммунологические методы исследования.

С помощью макроскопических методов удается обнаружить паразитов на наружных покровах или в фекалиях больного.

Микроскопическими исследованиями выявляют паразитов в мазках крови, тканевой жидкости, кусочках мышц, полученных с помощью биопсии, а также в экскретах (мокроте, фекалиях).

Среди иммунологических методов в диагностике протозойных болезней и гельминтозов чаще всего используют серологические и аллергические реакции.

1. Пробы фекалий

Пробы фекалий исследуют на наличие простейших и яиц или личинок гельминтов.

В фекалиях обнаруживают такие стадии простейших, как трофозоиты и цисты. В фекалиях также обнаруживают такие стадии гельминтов, как яйца и личинки, а иногда удается наблюдать и взрослых гельминтов или фрагменты последних. Взрослые гельминты и членики ленточных гельминтов обычно можно увидеть невооруженным глазом, однако яйца, личинки, трофозоиты и цисты можно увидеть только под микроскопом.

А) Микроскопическое исследование нативных препаратов

Анализ нативных препаратов является наиболее простым и легким методом исследования фекалий. Нативный препарат можно приготовить непосредственно из фекалий или из обогащенных проб.

Определяют яйца и личинки гельминтов. Материал не окрашивают, так как краски могут затруднить их идентификацию.

В нативных препаратах с физиологическим раствором можно увидеть личинки кишечной угрицы. Личинки анкилостомид обычно не встречаются в свежих пробах фекалий, однако при исследовании несвежих проб может возникнуть необходимость в дифференцировании личинок анкилостом и некаторов.

В препаратах с физиологическим раствором можно наблюдать трофозоиты и цисты амеб и жгутиковых. Цисты выглядят как круглые или овальные светопреломляющие образования; трофозоиты амеб могут иметь округлую или неправильную форму; трофозоиты жгутиковых обычно имеют удлиненную (грушевидную) форму. В свежевыделенных фекалиях, исследуемых не позднее чем через 1 ч после дефекации, можно обнаружить подвижные трофозоиты. Тип движения имеет весьма важное значение при видовой идентификации простейших, особенно из класса жгутиковых.

Обычно исследуют материал при большом увеличении - можно хорошо видеть тип движения, включения в виде эритроцитов и дрожжевых грибков в трофозоитах амеб, хроматиновые тельца в цистах амеб, а также детали формы и строения трофозоитов жгутиковых и цист (например, присасывательный диск, спиралевидные щели, либо филаменты).

Б) Дополнительные методы

Наряду с нативными препаратами имеется ряд дополнительных методов диагностики кишечных паразитов. К наиболее распространенным из них относятся методы обогащения для обнаружения яиц, личинок и цист, а также методы постоянного окрашивания препаратов для выявления трофозоитов и цист.

При использовании последних можно обнаружить яйца и личинки гельминтов и цисты простейших, однако нельзя увидеть трофозоиты простейших, поскольку они разрушаются в процессе обогащения. Поэтому исследование нативных препаратов является обязательным начальным этапом микроскопического исследования.

Использование методов обогащения показано в тех случаях, когда исследование нативных препаратов дает отрицательные результаты.

В качестве способа обогащения рекомендуется формалин-эфирный (или формалин-этилацетатный) метод. Посредством последнего можно обнаружить все типы яиц гельминтов (нематод, цестод и трематод), личинки, а также цисты простейших.

2. Перианальный соскоб на энтеробиоз

Анальные тампоны используются для обнаружения остриц, а также яиц тениид. Энтеробиоз встречается чаще у детей, чем у взрослых. Однако чаще всего, если острицы обнаруживаются хотя бы у одного ребенка в семье, все остальные члены семьи также оказываются инвазированными. Поэтому если у ребенка обнаружены острицы, необходимо подвергнуть обследованию всех членов семьи, особенно детей. Яйца остриц обычно находят в кожных складках перианальной области. Они редко встречаются в фекалиях.

3. Пробы мочи

Пробы мочи обычно исследуют на наличие возбудителей мочеполового шистосомоза. В них также можно наблюдать трофозоиты возбудителей мочеполового трихомоноза.

Иногда после центрифугирования мочи больных из эндемичных по филяриндозам стран, особенно при хилурии, в осадке можно обнаружить микрофилярий возбудителей вухерериоза и онхоцеркоза.

В эндемичных по шистосомозам странах первым косвенным указанием на наличие инвазии является гематурия и/или протеинурия, выявляемые посредством диагностических полосок. Макрогематурия указывает на интенсивную инвазию.

Для обнаружения яиц шистосом используются два метода — осаждение и фильтрация. Осаждение — менее чувствительный, но более дешевый и простой в выполнении метод. Фильтрация применяется в медицинских учреждениях в тех случаях, когда требуется получить количественную оценку интенсивности инвазии.

4. Выделения из влагалища и мочеиспускательного канала

Влагалищные и уретральные выделения исследуют на наличие Trichomonas vaginalis — жгутикового паразита мочеполовой системы. Он паразитирует как у мужчин, так и у женщин, однако у мужчин инвазия обычно протекает бессимптомно. Возбудителя обычно обнаруживают в нативных препаратах, приготовленных из влагалищных и уретральных выделений. (В окрашенных препаратах эти паразиты сильно деформируются и не всегда могут быть идентифицированы.)

В нативных препаратах жгутиковые могут быть идентифицированы по характеру их движения. Трофозоиты трихомонад передвигаются нервными, дергающими или прыгающими движениями. Поскольку Т. vaginalis является единственным видом трихомонад, обитающих в мочеполовой системе, нет необходимости изучать их морфологические признаки или дифференцировать их от кишечных трихомонад (Т.hominis), паразитирующих в кишечнике. В редких случаях за паразитов могут быть ошибочно приняты имеющие микроворсннки эпителиальные клетки половых путей.

5. Пробы крови и других биологических материалов

Кровь исследуют на наличие нижеперечисленных возбудителей паразитарных болезней:

— малярийных паразитов,

— микрофилярий,

— трипаносом,

— лейшманий.

Наиболее распространенным способом исследования крови является метод окрашенных препаратов крови. Для окрашивания препаратов крови обычно используется краска Гимзы (одна из разновидностей краски Романовского). Для окрашивания микрофилярий применяется гематоксилин Делафильда.

В зависимости от обстоятельств могут использоваться как толстые капли, так и тонкие мазки.

Исследование толстой капли является более чувствительным методом обнаружения паразитов, при этом сокращается также время на проведение исследования. В тонком мазке паразиты подвергаются лишь незначительной деформации, что позволяет установить их видовую принадлежность в тех случаях, когда это не удается сделать в толстой капле, но при этом может потребоваться исследовать намного больше полей зрения для обнаружения паразитов, если численность последних будет низкой. Поэтому при исследовании на малярийные паразиты и трипаносомы необходимо исследовать как толстые капли, так и тонкие мазки крови; при невозможности точной видовой диагностики по толстой капле это позволит установить вид паразита по тонкому мазку.

Для исследования на микрофилярий нужно использовать толстые капли.