Токсикологические свойства озонированного льняного масла

Бледных Л.В., Николаев С.В., Конопельцев И.Г.

ФГБОУ ВО Вятская ГСХА, г. Киров, Россия

Поступательное развитие сельскохозяйственных предприятий, основной деятельностью которых является разведение пород молочного скота, зависит от количества произведенной продукции с минимальными затратами. Однако с ростом молочной продуктивности коров отмечается и высокая заболеваемость их акушерско-гинекологическими болезнями [1,2,3], что приводит к удорожанию продукции. В связи с вышеизложенным, представляется важной научная работа по оценке антимикробных свойств и токсичности у растительных масел после различного режима барботирования озоно-кислородной смесью [4]. Как известно, появление у них способности подавлять жизнедеятельность различных микроорганизмов объясняется синтезом в них озонидов, которые активно провоцируют окисление липидного слоя микробной стенки, нарушая метаболические процессы [2].

Цель исследований - изучение антимикробных и токсикологических свойств у озонированного льняного масла.

Материалы и методы исследования. Экспериментальные исследования проводились в 2016 году в лаборатории кафедры хирургии, акушерства и заразных болезней Вятской ГСХА.

Озон получали с помощью сертифицированного медицинского генератора озона «А-с-ГОКСф-5-02-ОЗОН» (МАЮИ 941714.004 ТУ) производства АО «Электромашиностроительный завод им. ЛЕПСЕ» (г. Киров) из химически чистого кислорода. Для исследований использовали льняное озонированное масло.

Доклиническое исследование озонированного льняного масла проводили согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [5]. Раздражающее действие исследовали на кроликах породы шиншилла путем аппликации на конъюнктиву глаза. Учет результатов проводили через 5 и 60 минут, 3, 24,48 часов и 7 суток.

Исследование острой токсичности проводили на здоровых половозрелых белых мышах-самцах, живой массой 22-26 граммов, полученных из вивария Вятской ГСХА. Животные во время опыта находились в одинаковых условиях, получали идентичный корм и имели свободный доступ к воде. Для эксперимента сформировали 4 группы по 10 мышей в каждой. Предварительно готовили эмульсию, состоящую из 10,0 мл физиологического раствора, 10,0 мл льняного озонированного масла и 0,2 мл эмульгатора полисорбат 80, которую разводили на стерильном физиологическом растворе натрия хлорида в убывающей концентрации – 1:1, 1:2 и 1:4. Первой, второй и третьей опытной группе мышей вводили однократно внутрибрюшинно 1,0 мл соответствующего разведения препарата. Мышам контрольной группы в таком же объеме вводили физиологический раствор. Максимальная доза озонированного льняного масла при этом составила 0,25 мл или в пересчете на массу тела мыши – 10000 мг/кг, минимальная доза – 0,1 мл или 4000 мг/кг. За животными наблюдали в течение 14 суток, первые 6 часов мыши находились под постоянным наблюдением.

Взвешивание мышей проводили до кормления через 1, 3, 7 и 14 суток от начала опыта. Острую интоксикацию организма экспериментальных животных в результате применения озонированной эмульсии оценивали по клинической картине и выживаемости в зависимости от дозы препарата. При этом учитывали изменение поведения и двигательной активности, массы тела, аппетита и жажды, характер фекальных масс, состояние волосяного и кожного покрова, окраску слизистых оболочек, частоту дыхательных движений, изменение массы тела. Павших в ходе опыта животных, а также вынужденно убитых вскрывали и проводили макроскопическую оценку состояния внутренних органов.

Для изучения реакции замедленного типа было сформировано две группы животных – опытная и контрольная (n=6). Сенсибилизацию мышей опытной группы проводили путем двукратного внутрибрюшинного введения озонированного льняного масла в переносимой дозе 0,1 мл, предварительно разведенной физиологическим раствором в соотношении 1:4 с суточным интервалом. Мышам контрольной группы двукратно внутрибрюшинно вводили 0,5 мл физиологического раствора натрия хлорида с интервалом 24 часа.

Через пять суток после последней инъекции животным обеих групп в плюсну одной лапы вводили разрешающую дозу озонированной эмульсии в объеме 0,01 мл, а другой лапы 0,01 мл физиологического раствора.

Спустя 24 часа измеряли толщину задних лап в области плюсны при помощи инженерного микрометра МК-25. Индекс отека у мышей каждой группы рассчитывали по формуле: И = (V_о - V_к) / V_к х 100, где V_о - толщина опытной лапы, V_к - толщина контрольной лапы.

Полученный материал обработан методом вариационной статистики на достоверность различия сравниваемых показателей с использованием критерия Стьюдента с применением программного комплекса Microsoft Excel.

Результаты исследований. Озонированное льняное масло предполагается нами использовать как этиотропное средство при акушерской и гинекологической патологии у коров.

В ходе исследований раздражающего действия озонированного льняного масла на конъюнктиву глаза кролика нами было установлено, что оно обладает кратковременным и незначительным раздражающим действием, которое исчезает через 5 минут после его нанесения.

Результаты исследований по определению острой токсичности озонированного льняного масла представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1 - Проявления острого токсического действия озонированного льняного масла (n=10)

Груп-па	Количество эмульсии (озон. масла)	Количество животных с проявлениями клинической картины интоксикации	Погибло животных
снижение массы тела и аппетита	изменение по- ведения	кратковременное учащение дыхания, возбуждение	цианоз кожи и слизистых оболочек	отечность век
	0,25 мл (10000 мг/кг)
	0,165мл (6600мг/кг)
	0,1мл (4000мг/кг)
	Контрольная группа (физ. раствор, 0,5 мл)

Таблица 2 - Изменение массы тела мышей при однократном введении озонированного льняного масла

Груп-па	Количество озонированного масла	Масса тела, г
исходная	через 1 сутки	через 3 суток	через 7 суток	через 14 суток
	0,25 мл (10000 мг/кг)	23,16±0,71	22,74±1,12	24,26±0,48	27,84±0,43	27,97±1,92
	0,165мл (6600мг/кг)	25,09±0,85	24,90±0,73	24,89±0,79	26,14±1,38	26,98±2,04
	0,1мл (4000мг/кг)	23,71±0,46	24,28±0,56	24,75±0,26	25,56±1,56	27,18±2,09
	Контрольная группа (физ. раствор, 0,5)	24,61±1,38	25,42±1,37	25,93±1,43	27,22±2,38	27,44±1,75

Цифровой материал таблиц 1 и 2 показывает, что после введения озонированного льняного масла животным второй опытной группы в дозе 0,165 мл (6600 мг/кг) наблюдали следующую картину интоксикации: сразу после введения препарата у всех мышей отмечалось возбуждение, учащение дыхания, проявлялись рефлексы умывания и почесывания, затем наступало незначительное угнетение, снижение аппетита. Спустя час состояние животных нормализовалось, аппетит восстановился. Снижения массы тела на следующий день и в последующем не происходило. Погибших животных в данной группе не было.

Аналогичную картину наблюдали у мышей первой опытной группы, которым было введено масло в максимальной дозе 0,25 мл (10000 мг/кг). Но вышеперечисленные симптомы проявились значительно позже, через 1-1,5 часа после введения препарата. Возможно, это связано с более медленной резорбцией препарата в разведении 1:1, чем при разведении 1:2. При этом у четырех мышей из группы отмечали признаки прогрессирующего ухудшения общего состояния: мыши сидели, сгорбившись, отказывались от корма и воды, в последующем развился блефароспазм, отек век, цианоз кожи и слизистых оболочек. На следующий день произошла их гибель. При внешнем осмотре трупов отмечали следующее: сильную отечность век, увеличение живота, цианоз кожи и слизистых оболочек, при взвешивании – снижение массы. При вскрытии у всех павших мышей наблюдали следующую патологоанатомическую картину: желудок и кишечник не содержал кормовых масс, сердце было увеличено в размере, его верхушка притуплена, миокард истончен, в печени и почках острая застойная гиперемия.

У остальных мышей первой опытной группы общее состояние нормализовалось на вторые сутки наблюдения, аппетит постепенно восстановился. В целом по группе наблюдалось недостоверное снижение массы тела на вторые сутки, которая через три дня вернулась к исходной, а через 14 суток не отличалась от массы тела мышей других опытных и контрольной групп.

При введении животным третьей опытной группы препарата в дозе 0,1 мл (4000 мг/кг) гибель не наблюдалась, общее состояние и патологоанатомическая картина вынужденно убитых мышей без изменений.

Таким образом, на основании результатов по определению острой токсичности озонированной эмульсии на основе льняного масла было установлено, что при парентеральном введении препарата переносимая доза для мышей составила 4000 мг/кг, токсическая доза - 6600 мг/кг, а ЛД₄₀ - 10000 мг/кг. В соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 данный препарат относится к 4 классу токсичности (ЛД₅₀ более 1000 мг/кг) и характеризуется как малотоксичный. С учетом коэффициентов межвидового пересчета доз лекарственных препаратов в зависимости от массы тела рекомендуемая разовая доза коровам для клинических испытаний составляет не более 624 мг/кг, что соответствует 187,2 мл масла для коровы с живой массой 600 кг.

В дальнейшем провели исследование аллергизирующего действия озонированного льняного масла. Результаты исследований представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Проявление аллергизирующего действия озонированной эмульсии на белых мышах

Группа мышей	Толщина контрольной лапы, мкм (физиологический раствор)	Толщина опытной лапы, мкм (озонированное масло)	Индекс отека в группе
Опытная	230,67±9,28	335,67±6,33	45,77±3,42
Контрольная	217,33±8,64	308,0±5,69	42,15±5,99

Как показывают результаты исследований (таблица 3), индекс отека в опытной группе недостоверно отличается от индекса отека в контрольной группе, соответственно озонированное льняное масло не вызывает реакции замедленного типа.

Таким образом, доклинические исследования озонированного льняного масла показали, что оно оказывает незначительный и кратковременный раздражающий эффект, относится к 4 классу токсичности (малотоксичный) и не вызывает реакции гиперчувствительности замедленного типа.

Литература

1. Конопельцев, И.Г. Применение озонированной эмульсии при послеродовом остром эндометрите у коров-первотелок/И.Г. Конопельцев, С.В. Николаев // Ветеринария. – 2016.- № 6. - С.36-41.

2. Конопельцев, И.Г. Озонотерапия и озонопрофилактика воспалительных заболеваний и функциональных расстройств матки у коров: Автореф. дис. ... д-ра вет. наук.- Воронеж, 2004. - 40 с.

3. Муравина, Е.С. Разработка и эффективность способа терапии больных послеродовым эндометритом коров с применением озонированной эмульсии: дис…. канд. вет. наук /Е.С. Муравина. - Воронеж, 2013. – 149 с.

4. Николаев, С.В. Заболеваемость коров разного возраста послеродовым эндометритом в условиях привязного содержания и его профилактика с применением озонированной эмульсии /С.В. Николаев, И.Г. Конопельцев // Пермский аграрный вестник. – 2016. - №2. - С.133-140.

5. Хабриев, Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ /Р.У. Хабриев. – М.: Медицина, 2005. - 832 с.

УДК 5578.835.3