Способы получения и характер материала для цитологической диагностики заболеваний женской половой системы. Оценка результатов исследований.
МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ЦИТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
Результат исследования на цитологию напрямую зависит от техники забора материала для цитологического исследования. У женщин рекомендуется проводить забор материала на цитологию с поверхности вульвы, влагалища, шейки матки при помощи шпателя, ложечки Фолькмана или универсального пластикового зонда. Чтобы получить соскоб эпителия из цервикального канала, существует множество цервикальных щеток. Также существуют зонды, при помощи которых можно одновременно получить соскоб как из эндоцервикса, так и из экзоцервикса Анализ на цитологию можно выполнять в любой день менструального цикла за исключением периовуляторного периода и менструации.
Чаще всего женщины сталкиваются с понятием «мазок на цитологию» , когда проходят диагностику заболеваний шейки матки. Цитология шейки матки бывает эксфолиативной (поверхностной), когда материал собирается с поверхности шейки матки, опухоли, а также — пункционной (опухолевое образование прокалывается тонкой иглой).
Целью анализа на цитологию является определение характера и интенсивности пролиферации (разрастания) эпителия. Проведя анализ на цитологию шейки матки, гинеколог определяет степень дисплазии (перерождения клеток) и степень риска развития рака.
Основным анализом в гинекологии является цитология мазка из цервикального канала. Шейка матки имеет два вида эпителия (слизистой оболочки): плоский и многослойный покрывает ее влагалищную часть и цилиндрический однослойный — часть цервикального канала, соединяющего шейку с маткой. Клетки, как известно, постоянно обновляются и потому отшелушиваются. Потому цитология мазка из цервикального канала позволяет определить состояние слизистой оболочки. Проводится анализ на цитологию под мощным микроскопом, способным отличить нормальные клетки от атипичных.
Известно, что предвестниками рака шейки матки является дисплазия — перерождение эпителия. Зачастую изменения слизистой шейки связывают с разрушительной работой вирусов герпеса и папилломы человека в клетках.
Однако клиническая цитология используется не только в гинекологии. Так, методы цитологии распространяются на:
— пункционный материал, взятый из опухолей любой локализации. Например, при цитологии молочной железы, лимфатических узлов, кожи, легких;
— эксфолиативный материал: соскобы с эрозий, язв, различных ран, мокроты;
— эндоскопический материал, полученный при любых видах эндоскопического обследования (желудка, кишечника, бронхов);
— операционный материал — здесь гистология и цитология идут рядом, обнаруживая измененные ткани или риск их перерождения в рак.
Что говорят результаты цитологии?
Мазок на цитологию нельзя сдавать во время менструации, любых других кровотечений и воспалительных процессов, связанных с обильными выделениями. Анализ на цитологию шейки матки проводится после двухдневного воздержания от половых актов, а также спустя двое суток после кольпоскопии, поскольку она предполагает использование растворов йода.
Зачастую мазок на цитологию носит называние мазок по Папаниколау. По сей день результаты цитологии определяются по классификации этого ученого. Первая стадия характерна для здоровых женщин, когда клетки имеют нормальное строение. На второй стадии наблюдаются незначительные изменения, связанные с воспалительными процессами. Третья стадия присваивается при небольшом количестве клеток с увеличенными ядрами. Чаще всего рекомендуется повторный мазок на цитологию. Четвертая стадия затрагивает не только изменения ядер, но отличия видны в хромосомах и цитоплазме. Результат цитологии в данном случае трактуется как подозрение на рак. Пятая стадия — обнаружение типично раковых клеток в анализе на цитологию.
Отрицательный мазок на цитологию — полное отсутствие аномальных клеток. Причиной положительного мазка на цитологию могут быть герпес, хламидиоз, гонорея, трихомониаз. Такие результаты цитологии называются дисплазия 2 степени. Об инфекции также говорит повышение уровня лейкоцитов в мазке на цитологию и воспалительные процессы на шейке матки.
Билет № 6
Вопрос 18. Серологические реакции: реакция преципитации, реакция агглютинации, реакция связывания комплемента, реакция пассивной гемагглютинации: принципы методов, аналитические характеристики, клиническое применение.
В основе иммунологических методов лежат серологические реакции, для постановки которых используют сыворотку (serum), содержащую антитела (основаны на взаимодействии антигенов и антител) и клеточные реакции, базирующиеся на взаимодействии антигенов (аллергенов) с Т-клетками. Серологические реакции могут быть прямыми (двухкомпонентными) — агглютинация, пассивная гемагглютинация, преципитация и др., и косвенными (трёхкомпонентными) — реакция нейтрализации (например, микроба), реакция торможения гемагглютинации. Из нескольких «простых» складываются сложные серологические реакции: бактериолиз, реакция связывания комплемента и др. Распространены также иммунофлюоресцентные методы, основанные на окраске антител (антигенами) флюорохромами. Особый вид серологических реакций — выявление иммобилизации подвижных форм микроорганизмов (например, реакция иммобилизации бледных трепонем при сифилисе). Некоторые серологические исследования проводят не в пробирке, а непосредственно в организме экспериментальных животных.
Реакции aгглютинации - простые по постановке реакции склеивания корпускулярных антигенов (микробов, эритроцитов и других клеток, а также индифферентных корпускулярных частиц с адсорбированными на них антигенами) с помощью антител. Их используют для определения антител в сыворотке крови больных, напр. при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), бруцеллезе (реакция Райта, Хаддлсона), туляремии и других инф. болезнях, а также для определения возбудителя, выделенного от больного. Для выявления антител к разведениям сыворотки крови больного добавляют взвесь убитых микробов (диагностикум) и через определенное время при t° 35е отмечают наибольшее разведение (т. е. титр) сыворотки, при к-ром произошла агглютинация.
Реакция пассивной, или непрямой, гемагглютинации основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие к-рых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает выпадение эритроцитов на дне пробирки в виде фестончатого осадка. Реакция применяется в диагностике инф. болезней, для определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам.
Реакции преципитации - осаждение комплекса антиген-антитело, образующегося в результате соединения растворимого антигена со специфическими антителами. Осадок комплекса антиген-антитело называется преципитатом. Реакцию ставят в пробирке путем нанесения (наслоения) раствора антигена на иммунную сыворотку. При оптимальном соотношении антиген-антитело на границе этих растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата (реакция кольцепреципитации). Широкое распространение получила реакция преципитации в полужидком геле агара или агарозы - двойная иммунодиффузия по Оухтерлоню, радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др. Для постановки иммунодиффузии по Оухтерлоню растопленный агаровый гель выливают тонким слоем на стеклянную пластинку и после затвердевания геля в нем вырезают лунки размером 2-3 мм. В противоположные лунки раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, к-рые, диффундируя в агар, образуют в месте встречи преципитат в виде белой полосы. В реакции радиальной иммунодиффузии иммунную сыворотку вносят в агаровый гель. В лунки геля помещают раствор антигена, к-рый, диффундируя в гель, образует кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют, в частности, для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента. Иммуноэлектрофорез сочетает электрофорез и иммунопреципитацию: смесь антигенов разделяется в геле с помощью электрофореза, затем параллельно зонам электрофореза вносится иммунная сыворотка, антитела к-рой диффундируют в гель и образуют в месте встречи с антигеном линии преципитации. При радиальной иммунодиффузии (по методу Манчини) иммунную сыворотку вносят в агар. Антиген, помещенный в лунки, диффундирует через агар, и в результате преципитации с иммунной сывороткой вокруг лунок образуются непрозрачные кольца, внешний диаметр которых пропорционален концентрации антигена. Метод используют для определения классов иммуноглобулинов, а модификации метода можно применять для определения противомикробных антител, относящихся к различным классам иммуноглобулинов.
Разновидностью иммуноэлектрофореза является радиоиммунофорез В этом случае после электрофоретического разделения антигенов в канавку, вырезанную параллельно движению антигенов в геле, наливают сначала меченную радиоактивным йодом иммунную сыворотку против определяемых антигенов, а затем иммунную сыворотку против lgG-антител, которая преципитирует образовавшиеся комплексы антитела с антигеном. Все несвязавшиеся реагенты вымывают, а комплекс антиген — антитело обнаруживают методом авторадиографии.
Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента в результате присоединения его к антителам, находящимся в комплексе с антигеном (реакции связывания комплемента, радиального гемолиза и др.). Реакция связывания комплемента двухфазная; первая фаза - инкубация смеси искомого антигена (или антитела) с диагностической сывороткой (или антигеном-диагностикумом) и комплементом; вторая фаза - индикаторная - определение наличия в смеси свободного комплемента путем добавления гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела против эритроцитов барана. В первой фазе реакции при образовании комплекса антиген-антитело происходит связывание им комплемента, во второй фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов отсутствует (реакция положительная). При отрицательной реакции, если антиген и антитело не соответствуют друг другу, комплемент остается свободным и во второй фазе реакции присоединяется к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело гемолитической сыворотки, вызывая гемолиз. Реакция связывания комплемента применяется для диагностики инф. болезней, в частности сифилиса (см. Вассермана реакция).
2) 40. Лаб мды оценки запас Fe в орг и диагн нарй обм Fe. Ф ж:трт О2. взросл чел – 4-5 гр, 60-70%-Нв, 5-10% - миоглоб,>20% в ферритине и гемосидер,0,2% - ок-восст ферм митохй, 0,1% -трансферрина-трт ж по кров руслу.Выдел Нвй, запасной, транспортй, тканй фонды ж. Запас– ж феррна и гемосидна- в печ, селез, кост м, мыш- 30-40%. Ферн – водораств кс трехвал ж и б апоферна, содй 20% же, - лабил фракц запасго фон ж. исп д\нужд эритропоэза. Гемосид – нераств в воде б,содт большее кво ж,чем ферр – 25-30%-стабил, прочно фиксир фракц запасов ж в орг.Трансп фонд – ж, связ с трансп б трансферрм, сост1% от содержя ж в орг.Ж поступ в оргм с пищ (говяд, печ, яйц, яблоки, курага, бобовые). Всасю ж способ аскорб кта, орг кты (лимон, яблоч), ингибир всасе ж танин, высок содерж жира. За сут всасся 2-2,5 мг ж, кратковрно после сильн кровотеч м всас до 3 мг, осн колво всас в 12-перст киш и в нач части тощ киш, мал колво ж м всас во всех отд тонк киш. 2 этапа: слиз обол киш захват ж-в кр, нагружся на трансфер и дост к местам использ и в депо. Трансфер также перен ж из фондов и кл сист фагоцх мононуклв, в кх происх дестр эр, в кост м, где оно частно исп д\сза Нв, а част отклад.Наибольш колво ж, ке м присоед трансфер до полного насыщ- общ железосвяз спость сывки кр – ОЖСС. Она склад из связй, насыщй жм части («сыворот ж») и своб- ненасыщ ЖСС(ЛЖСС,НЖСС) кр.Отнош связ в трансфер ж (сывор ж) к поклю ОЖСС-коэфт (процт) насыщя трансфер жм (НЖСС). сыв ж-7,16-26,85 мкмоль/л, у муж – 8,95-28,64; НЖСС – 26,8 – 41,2; ОЖСС – 53,2 – 71,6; К(%) – около 30% (20 – 55%).Сниж колва ж наблюд при:недост поступл с пищ(длит молочно-растит диеты);плох усвоен в ЖКТ (при анацидх и гипацидх гастр, резекц жел и киш, глист инваз, профуз понос у дет);усил утили оргми и тк (берем, быстр рост оргма, повыш физ актти);потере ж (кровотеч, дисфункц метроррагх, фибромиомах,актив клетх элемв смы фагоц мононуклв);врем перераспред ж в орг (сист забол соед тк, злокач оп, хр. геп, циррозе, о. и хр. нагноит забол лег, септич сост, уремии, ИМ).Дефт ж: скрыт – содерж феррит сниж, сыворот ж – в норм; относительным – обусл врем распредм ж при воспх процх, инф забх, некрозах и опх (содерже сыворот ж сниж, резервного – не измен); абсолютным – отсут резерв ж, сниже ур сыв ж, гипогемоглобинемией.При железодефицитной анемии – сыв жо в норме или снижено, ОЖСС в норме, либо выше нормы за счет компенсаторного усиления биосза трансфер, НЖСС резко увелич вследствие уменьшя содержя сыворот ж, процент насыщя ж трансферрина уменьшен.Высок содерж ж наблюдся либо при недостат использ его в кроветвор оргх, либо при повыш поступл в оргм. У больных, страдающих сидероахрестическими анемиями, железо, поступающее в костный мозг, не используется в должной мере для эритропоэза. Недостаточное использование железа для образования ферритина наблюдается при заболеваниях печени (хр. гепатите, всех формах желтух), при которых обычно увеличено содержание сывороточного железа.Повышенное поступление железа в организм характерно для гемохроматоза. Излишки железа отклад в паренхиматозных орх в виде гемосидерина: отложение железа в печени приводит к ее циррозу, в поджелудочной железе – к сахарному диабету, в коже – к пигментации. Увеличение содержания железа в сыворотке крови (вместе с некоторым снижением ОЖСС и значительным уменьшением НЖСС) наблюдается при пернициозной анемии, апластической и гемолит анемии, повторных трансфузиях, талассемиях, дефиците вит. В12 (гиперхромная анемия); нефрите, избыточной терапии препаратами железа, остром отравлении железом у детей.