Лабораторная диагностика парэнтеральных вирусных гепатитов

Возбудителями вирусных гепатитов с парентеральным путем заражения вяляются: HBV — Hepatitis B virus, относящийся к семейству гепадновирусов (ДНК-содержащий, локализуется в ядрах гепатоцитов); HCV — Hepatitis C virus, относящийся к семейству флавовирусов (РНК-содержащий, локализуется в цитоплазме гепатоцита); HDV — Hepatitis D virus, таксономическое положение уточняется (РНК-содержащий, локализуется в ядре гепатоцита). Вирусные гепатиты могут быть вызваны и другими вирусами как в монро-, так и в микстинфекции с вышеназванными вирусами (EBV — Virus Epstein-Barr; СMV — цитомегаловирус; HSV — Virus Herpes simplex и др.).

Лабораторные и инструментальные методы обследования

Основные методы:

∙ общий анализ крови (лейкопения или нормоцитоз с лимфоцитозом и

нормальной СОЭ);

. общий анализ мочи с определением уровня уробилина и желчных пигментов

(наличие уробилина в моче в преджелтушном и раннем периоде

реконвалесценции и желчных пигментов в желтушном периоде);

. биохимический анализ крови с определением содержания билирубина (при

желтушных формах увеличено за счет связанной фракции), активности

аланинаминотрансферазы (повышена не менее чем в 5 раз), тимоловой пробы

(увеличены показатели), протромбинового индекса (снижен, особенно при

острой печеночной энцефалопатии III-IV ст.):

. при наличии эпидемиологических данных серологическое определение

антигенов и антител к ВГВ, ВГС с использованием

высокочувствительных методов (ИФА, РИА) во фракциях IgM и IgG.

Определение маркеров вирусного гепатита В осуществляется методами иммуноферментного анализа, PCR, ISH, Саутерн-блот, которые позволяют интерпретировать клинические ситуации при наличии в крови основных маркеров HBV-инфекции.

Диагностика HСV осуществляется методами иммуноферментного анализа, рекомбинантного иммуноблотинга, PCR, ISH.

Дополнительные методы:

. определение содержания стеркобилина в кале;

. определение уровня холестерина, ?-липопротеидов, развернутой

коагулограммы, активности щелочной фосфатазы,

фруктозомонофосфатальдолазы;

. определение содержания ретикулоцитов в крови, осмотической

резистентности эритроцитов;

. обследование на герпесвирусную инфекцию (вирус простого герпеса,

цитомегаловирус, вирус Эпстайна-Барра);

. УЗИ печени и при необходимости компьютерная томография органов брюшной

полости;

. электроэнцефалография;

. определение уровня гемоглобина в плазме крови и моче при подозрении на

ВГЕ.

При субклиническом течении диагноз вирусного гепатита устанавливается

только на основании лабораторного обследования больных. По данным многих

исследователей, вирусные гепатиты в большинстве случаев протекают без

желтухи, т. е. при отсутствии кардинального признака для диагностики

вирусных гепатитов. Это наиболее часто наблюдается при вирусном гепатите С.

Безжелтушные варианты вирусных гепатитов протекают с симптомами

интоксикации, увеличением размеров печени, но без желтухи. При стертых

формах все клинические признаки минимально выражены. Субклинический

(инаппарантный) вариант клинически не проявляется, но увеличена активность

АлАТ в крови.

тяжести состояния. В оценке тяжести состояния больных вирусными

гепатитами имеет значение мере степень выраженности биохимических нарушений, из которых наиболее важно содержание общего билирубина, особенно его свободной фракции, и протромбиновый индекс.

Так, при легком течении заболевания уровень общего билирубина не превышает

85 мкмоль/л, свободного - 25 мкмоль/л, при среднетяжелом - соответственно

85-150 мкмоль/л и до 51 мкмоль/л, при тяжелой форме содержание общего

билирубина превышает 150 мкмоль/л, при этом 1/3 общего составляет свободная

фракция. У детей первого года жизни, даже при самых тяжелых поражениях

печени, т. е. при фульминантном течении, содержание общего билирубина может

не превышать 90 мкмоль/л.

Протромбиновый индекс при легком течении заболевания в норме (0,8-1,1),

при среднетяжелом - 0,6-0,7, при тяжелом – меньше 0,6, а при фульминантной

форме снижается до 0,15-0,2, что свидетельствует о неблагоприятном прогнозе

заболевания.

Маркерами HDV является HD-Ag, обнаруживаемый в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа, PCR, ISH, Нортен-блот. Длительное присутствие PHK-HDV в сыворотке крови свидетельствует о хронизации процесса. Анти-HDV Ig М определяется с 10– 15 дней заболевания до 2,5–3 месяцев, длительное сохранение титра lgA анти-HDV Ig М характерно для хронического процесса. Анти-HDV lg G появляются на 5–9-й неделе заболевания и циркулируют в течение нескольких месяцев. При коинфекции титр анти-HDV lg (суммарных) не более lg 3, а при суперинфекции он обнаруживается в титре lg A и выше.

Маркерами HGV являются: обнаружение Ag HGV методами амплификации с предварительным этапом обратной транскрипции (RT-PCR), обнаружение HGV Ab методами иммуноферментного анализа. Многообразие клинических проявлений от бессимптомного носительства до фульминантных форм гепатита связано с двумя уровнями геномной вариабельности: на уровне индивидуальной инфекции и уровне изолята. Коинфекция HGV с гепатитами В, С, D выявляется значительно чаще, чем моноинфекция.

На сегодняшний день наиболее совершенным методом ПЦРдиагностики является REAL-TIME ПЦР, исключающая контаминацию образцов и дающую заключение о наличии и количестве РНК ВГС через 5-7 дней после предполагаемого инфицирования и генотип вируса с вирусной нагрузкой за одно исследование.

Основным достоинством метода ПЦРявляется чрезвычайно высокая чувствительность анализа – до 1 копии геномной ДНК возбудителя инфекции в исследуемой пробе в nested-варианте ПЦР(с внутренней и внешней парами олигонуклеотидов-праймеров).

Возможности, заложенные в методе ПЦР, позволяют, с одной стороны, достигать максимальной специфичности анализа, т. е. отсутствия перекрестных реакций и способности выявлять ДНК конкретного инфекционного агента в присутствии ДНК других микроорганизмов и ДНК организма-хозяина, а также проводить генотипирование. С другой стороны, соответствующий выбор олигонуклеотидов-праймеров, в основном определяющих специфичность анализа, позволяет одновременно выявлять ДНК близкородственных микроорганизмов.

Другим достоинством метода является то, что для ПЦР-диагностики практически всех инфекционных заболеваний может быть использован один набор оборудования, универсальные процедуры подготовки пробы и постановки анализа, а также незначительно отличающиеся наборы реактивов.