Хроматографического скрининга (ХТС)

Точное установление природы яда невозможно без применения химических и физико-химических методов анализа. Особую актуальность среди них имеют методы скрининга.

Скрининг представляет собой систему поиска в биологических жидкостях неизвестного токсического вещества. Он является ведущим диагностическим тестом в затруднительных случаях клинической диагностики состояний интоксикации, таких, как коматозное состояние, комбинированное применение лекарств, подозрения на отравление.

Скрининг позволяет за минимальное время выявить из большого круга лекарственных средств одно или несколько веществ и в дальнейшем более целенаправленно вести анализ, либо исключить наличие яда.

Для скрининга лекарственных веществ в клинической практике наиболее приемлем метод хроматографии в тонком слое, который в сочетании с детектирующими реагентами и комплексом подтверждающих тестов является достаточно информативным и отличается экспрессностью. Простота выполнения делает метод доступным для большинства клинико-диагностических лабораторий.

Известно, что в живом организме любое лекарственное средство подвергается метаболизму, в результате чего могут появиться более активные в фармакологическом отношении соединения. Однако, большинство лекарственных средств, несмотря на метаболические превращения, обнаруживаются в биологических жидкостях (в основном в моче) в нативном состоянии. Метаболиты, сопутствующие неизмененным ядам, в большинстве случаев не мешают их обнаружению ввиду достаточно четкого разделения при хроматографировании.

В ХТС-скрининг, применительно к анализу мочи. входит:

1. Извлечение ядов.

2. Хроматографическое разделение веществ.

3. Обнаружение и количественное определение ядов.

1. Извлечение ядов из объекта проводят прямой экстракцией органическим растворителем, не смешивающимся с водой. Учитывая, что круг анализируемых веществ представлен соединениями кислотно-основного характера, экстракцию ведут сначала из кислой среды (рН 1) - для веществ кислого, нейтрального и слабоосновного характера, а затем из щелочной среды (рН 11) - для веществ основного характера. Среди экстрагентов отдается предпочтение наиболее универсальным - хлороформу и эфиру. В качестве экстрагента на первой стадии применяется эфир, так как хлороформ способен извлекать некоторые соединения основного характера (например, производные фенотиазина) из кислого раствора. На второй стадии используется хлороформ (или смесь хлороформ- н-бутанол 9:1). Соотношение водной и органической фаз обычно составляет 1:2 (50 мл мочи и 100 мл экстрагента), время экстракции не менее 5 минут.

2. ХТС-разделение ЛВ. В качестве хроматографических систем используют универсальные, такие, как:

- для веществ кислого, нейтрального и слабоосновного характера - CHCl₃ - ацетон (9:1).

- для веществ основного характера - толуол - ацетон - этанол - 25% раствор NH₄OH (47,5:45:7,5:2,5), которая может быть использована и для веществ первой подгруппы. Возможно использование и других универсальных систем.

Для обнаружения на хроматограмме веществ кислотного характера (барбитуратов, салицилатов), а также веществ слабоосновного характера (фенотиазинов, производных пиразолона) проводят последовательное опрыскивание хроматограмм растворами ДФК, HgSO₄ и FeCl₃.

Для обнаружения веществ основного характера хроматограмму обрабатывают реактивом Драгендорфа. Для усиления окраски и проявления некоторых веществ слабоосновного характера (кофеин) пластинку обрабатывают 20% раствором H₂SO₄. Идентификацию веществ проводят по величинам R_f относительно метчиков ( используя таблицы с величинами R_f).

Заключение о присутствии тех или иных веществ делают на основании результатов ХТС-исследования и подтверждающих химических реакций, из которых наиболее чувствительны реакции хромогенные и микрокристаллические.

При обнаружении лекарственных средств проводят их количественное определение, в основном спектрофотометрическим и фотоэлектроколоримет­рическим методами. Количественное определение токсических веществ в биологических жидкостях, в частности в крови, дает возможность установить тяжесть отравления и контролировать эффективность лечения в условиях клиники.

Токсические и смертельные концентрации различных лекарственных веществ в плазме крови человека приведены в справочных таблицах.