Тема: Лабораторная диагностика полиомиелита и заболеваний, вызываемых вирусами полиомиелита, Коксаки, ЕСНО.

Стом. ф-т, 2006

ЗАНЯТИЕ 27

Цель: на основе знаний особенностей биологии вирусов полиомиелита, Коксаки, ЕСНО, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику лабораторной диагностики, профилактику и терапию, вызываемых ими заболеваний.

Знать:

1. Классификацию, морфобиологическую характеристику вирусов полиомиелита, Коксаки, ЕСНО.

2. Экологию, особенности эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при полиомиелите и заболеваниях, вызываемых вирусами Коксаки, ЕСНО.

3. Материал и методы лабораторной диагностики полиомиелита и заболеваний, вызываемых вирусами Коксаки, ЕСНО.

4. Специфическую профилактику полиомиелита, неспецифическую профилактику при полиомиелите и заболеваниях, вызываемых вирусами Коксаки, ЕСНО.

Уметь:

1. Учитывать и оценивать результаты цветной пробы (ЦП), реакции нейтрализации (РН) с целью диагностики полиомиелита.

2. Учитывать и оценивать результаты РГА, РТГА с целью диагностики герпетической ангины.

Контрольные вопросы:

1. Классификация, морфобиологическая характеристика и антигенное строение вирусов полиомиелита, Коксаки, ЕСНО.

2. Программа ВОЗ по глобальной ликвидации полиомиелита; результаты ее реализации в РФ и Красноярском крае.

3. Особенности патогенеза и иммунитета при заболеваниях, вызываемых вирусами полиомиелита, Коксаки, ЕСНО.

4. Лабораторная диагностика полиомиелита и заболеваний, вызываемых вирусами Коксаки, ЕСНО: материал и методы (вирусологический, серологический).

5. Специфическая профилактика полиомиелита.

6. Неспецифическая профилактика заболеваний, вызываемых вирусами полиомиелита, Коксаки, ЕСНО.

Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):

1. Провести вирусологическое исследование с целью диагностики полиомиелита:

1.1. Учесть и оценить результаты заражения культуры ткани исследуемым материалом от обследуемого с диагнозом «полиомиелит» (микроскопически, ЦП).

1.2. Учесть и оценить результаты РН в культуре ткани по ЦП с поливалентной и типовыми полиомиелитными сыворотками и вирусосодержащим материалом.

На основании полученных результатов сделать заключение, заполнить бланк-направление и бланк-ответ из вирусологической лаборатории.

2. Провести вирусологическое исследование с целью диагностики герпетической ангины:

2.1. Учесть и оценить результаты РГА с вирусосодержащим материалом, полученным при заражении культур ткани содержимым везикул обследуемого с клиническим диагнозом «герпетическая ангина».

2.2. Учесть и оценить результаты РТГА с поливалентной, типовыми диагностическими сыворотками Коксаки А и полученной культурой вируса.

3. Изучить и описать биопрепараты: живая полиомиелитная вакцина, диагностические поливалентные и типовые сыворотки полиомиелитные, Коксаки, ЕСНО.

Методические указания к выполнению исследовательского задания:

I. Проведите вирусологическое исследование с целью диагностики полиомиелита:

1.1. Учтите и оцените результаты заражения культуры ткани исследуемым материалом от обследуемого с диагнозом «полиомиелит» (микроскопически, ЦП).

Материалом для вирусологической диагностики полиомиелита являются: фекалии в первые 10 дней заболевания, отделяемое носоглотки – в первые 3 дня заболевания; из СМЖ – полиовирус выделяют редко. После приготовления проб и проверки их на отсутствие бактерий заражают культуры клеток (фибробластов человеческого эмбриона или почек обезьян, HeLa и др.).

Индикацию вируса проводят по ЦПД; для полиовируса – это полная или частичная дегенерация клеток, выявляемая на 2-3 день инкубации.

Учет результатов осуществляется микроскопически или по ЦП (см. занятие №25).

Контролем служит интактная культура клеток ткани.

1.2. Учтите и оцените результаты РН в культуре ткани по ЦП с поливалентной и типовыми полиомиелитными сыворотками и вирусосодержащим материалом.

Идентификацию полученной культуры цитопатогенного вируса осуществляют в РН с поливалентной, а затем с типоспецифическими сыворотками I, II, III.

В качестве культуры вируса используют культуральную жидкость первично зараженной культуры ткани, которую смешивают с равным объемом диагностической сыворотки, разведенной 1:5 или 1:10, оставляют на 1-1,5 ч при комнатной t° и после этого заражают культуру ткани. Для этого в пробирку с культурой ткани вносят 0,2 мл смеси и 0,8 мл питательной среды 199.

Критерием достоверности результатов РН являются контроли:

- контроль тканевых культур (незараженная культура ткани с добавлением 1 мл среды 199) для выявления возможной неспецифической дегенерации клеток;

- контроль токсичности сыворотки (наименьшее разведение сыворотки, используемое в опыте, в объеме 0,1 мл вносят в пробирку с культурой ткани и добавляют 0,9 мл среды 199);

- контроль вируса (0,1 мл культуры вируса вносят в пробирку с культурой ткани и добавляют 0,9 мл среды 199).

Учет результатов РН осуществляется на 5-7 день. При этом следует иметь ввиду, что во флаконах с вирусом культура ткани погибает и цвет среды 199 не меняется (остается красным). Там же, где вирус нейтрализуется, среда 199 становится желтой. Положительный и достоверный результат РН свидетельствует о принадлежности вируса к соответствующему виду и типу.

На основании полученных результатов сделайте заключение, заполните бланк-направление и бланк-ответ из вирусологической лаборатории.

II. Проведите вирусологическое исследование с целью диагностики герпетической ангины:

2.1. Учтите и оцените результаты РГА с вирусосодержащим материалом, полученным при заражении культур ткани содержимым везикул обследуемого с клиническим диагнозом «герпетическая ангина».

Вирусы Коксаки А типов 1-6, 8, 10, 22 вызывают герпангину, характеризующуюся везикулярными высыпаниями на мягком небе, дужках, язычке, миндалинах. Диагноз ставится на основе использования вирусологического метода. Материалом служит содержимое везикул. Для индикации гемагглютинирующего вируса в культуральной жидкости используют РГА с эритроцитарными I (0) группы человека (см. занятие №26).

2.2. Учтите и оцените результаты РТГА с поливалентной, типовыми диагностическими сыворотками Коксаки А и полученной культурой вируса.

Для сероидентификации культуры гемагглютинирующего вируса используют РТГА с диагностическими сыворотками Коксаки А, разведенными 1:5 или 1:10 и культурой вируса в дозе 4 АЕ.

Для проверки достоверности результатов РТГА ставят контроли:

- контроль эритроцитов на отсутствие спонтанной агглютинации;

- контроль сывороток на отсутствие неспецифических факторов агглютинации;

- контроль гемагглютинирующих свойств полученной культуры вируса.