Методика испытания противомикробной активности антисептика профилактического назначения. Хирургическая антисептика

Цель:освоить методику испытания противомикробной активности антисептика профилактического назначения.

Материалы:

Стерильные чашки Петри – 8 шт., пробирки с 10 мл 1% пептонной воды – 8 шт., пробирки с 4,5 мл 1% пептонной воды – 24 шт., чашки с МПА – 8 шт., стерильные пипетки на 1-2 мл – 24 шт., пастеровские пипетки – 8 шт.

I этап:

1. Вымыть руки теплой водой с туалетным мылом (2 минуты).

2. Высушить руки на воздухе.

3. Провести смывы с кожи 2-х дистальных фаланг указательного, среднего и безымянного пальцев одной руки в чашке с 10 мл 1% пептонной воды путем втирания в дно чашки (контроль).

4. Выполнить обработку кожи рук антисептиком путем тщательного втирания препарата в кожу дважды по 5 мл в течение 5 минут.

5. Провести смывы с кожи дистальных фаланг пальцев другой руки в чашке с 10 мл 1% пептонной воды путем втирания в дно чашки (опыт).

6. Выполнить посевы смывов (рис.9).

0,5 мл смывной жидкости из чашки Петри перенести в пробирку с 4,5 мл 1% пептонной воды и далее приготовить разведения от 10^-1 до 10^-3.

Все разведения смывов посеять по 0,05 мл на соответствующие сектора чашек Петри с МПА.

II этап:

9. Подсчитать количество колоний на секторах чашек.

10.Определить концентрацию жизнеспособных бактерий (КОЕ/мл) в контрольных и опытных высевах и десятичные логарифмы числа выживших микробов.

Формула для определения концентрации жизнеспособных бактерий (КОЕ/мл):

N=n×20 ×10^x,

где: n – число колоний на питательной среде; 20 – коэффициент перерасчета посевного объема; 10^х – фактор разведения.

11.Рассчитать фактор редукции (разница между десятичными логарифмами КОЕ/мл в контроле и опыте).

Примеры расчета показателей:

Число колоний на секторе «10^-3» в контроле 5 шт., КОЕ/мл – N_к=5×20×10³=1 ×10⁵; десятичный логарифм – ln_к=5,0.

Число колоний на секторе «10^-1» в опыте 4 шт., КОЕ/мл – N_о=4×20×10¹=0,8×10³

десятичный логарифм – ln_о=3,9.

RF (фактор редукции) = ln_к- ln_о= 6,0-3,9=2,1 ln

Значения десятичных логарифмов чисел определяются по таблицам или с помощью калькулятора.

По отношению к собственной микрофлоре рук фактор редукции должен быть > 2,0 ln.

Чашка Петри со 0,5 мл 0,5 мл

смывной жидкостью

0,5 мл 10^-1 10^-2 10^-3

по 0,05 мл

МПА

Рис. 9. Схема выполнения посевов при испытании противомикробной активности антисептика профилактического назначения