Общие закономерности серологических реакций

Реакции проявляются при иммунологическом соответствии антигена и антитело в соответствующих оптимальных условиях температуры и кислотности среды.

Иммунные диагностические сыворотки получают от крупных животных, путем многократного заражения или введения токсинов.

К диагностическим антигенам относятся взвеси живых и убитых микроорганизмов или их токсины.

Выявления специфических антител с помощью известного антигена.

Методы очень широко распространены и применяются с большим успехом уже более 100 лет. Но, к сожалению, оценка серологического исследования в ряде случаев представляет определенную трудность.

Во-первых, в большинстве случаев антитела начинают синтезироваться только на 5-7 день болезни, во-вторых – для большинства методов необходимо исследование парных сывороток и наконец, сам иммунный ответ может быть не достаточно напряженным, что очень часто наблюдается у маленьких детей и у пациентов с иммунной депрессией.

Необходимо также учитывать, что реакции не являются абсолютно специфическими ввиду наличия общих антигенов у возбудителей, относящихся к одному и даже разным видам. Специфичность серологических тестов зависит

также от качества диагностикумов, правильности получения, хранения, транспортировки и обработки сыворотки. Нельзя использовать кровь, имеющую бактериальное загрязнение, гемолиз, посторонние примеси и длительно хранящуюся при комнатной температуре.

Для диагностики чаще используются РА, РНГА, РСК, РТГА и РЛ.

Реакция агглютинации. (РА).

При использовании берут 5 мл. крови пациента и получают сыворотку, которую разводят в изотоническом растворе от 1:50 до 1:1600 так как в концентрированном растворе могут быть нормальные антигены у здоровых людей или больных со схожими болезнями и выдерживают в термостате в течение 20 минут для инактивации посторонних белковых примесей.

В качестве антигена используют взвесь известных убитых микроорганизмов (диагностикум) с которыми безопасно работать. Реакцию ставят в пробирках.

Диагностическое значение имеют разведения титра 1:200-1:400 и более. Чем больше разведение, тем реакция более достоверна. Обычно используют, метод парных сывороток, – проводя, идентичную реакцию спустя 5-7 дней и сравнивают, полученные результаты. Титр агглютинации должен повышаться и реакция должна происходить в больших разведениях, чем предыдущая, т.к. происходит накопление антител.

РА используется для лабораторной диагностики многих инфекционных болезней.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

Для РНГА готовят в НИИ эритроцитарные антигенные диагностикумы.

Для этого на эритроциты барана, после предварительной их обработки, искусственно насаждают антигены. Для проведения реакций используют специальные луночковые пластмассовые пеналы. Сыворотку больного разводят от 1:10 до 1:1280 и далее, разливают по луночкам, туда же добавляют по 0,25 мл диагностикума. Результаты читают через 2 часа и оценивают в +.

Реакции связывания комплемента. (РСК)

Сложная двухэтапная реакция. Используют 5 ингредиентов, составляющих 2 системы.

РСК, несмотря на её сложность, очень чувствительная специфическая реакция и широко применяется для диагностики вирусных, микоплазмозных, риккетсиозных инфекций, а также цитомегалии, токсоплазмоза, бруцеллеза, гонореи и сифилиса.

Реакция торможения гемагглютинации

Метод основан на способности некоторых вирусов (грипп и др.) вызывать агглютинацию эритроцитов. Сущностью реакции является феномен предотвращения гемагглютинации эритроцитов вирусами под действием иммунной сыворотки.

Реакции лизиса (растворения)

Антиген – лизис обладает способностью растворять соответствующие микробные клетки. Лизисы способны на это только в присутствии комплемента.

Радиоиммунологический метод (РИМ)

Метод высокочувствителен, основан на применении меченных радиоактивным йодом антигенов. Чаще используют метод, при котором, меченые антигены адсорбированы на твердом носителе (твердофазовый вариант). Сущность метода заключается в определении количестве связанного антителами сыворотки крови пациента, меченного радиоактивным йодом антигена.

Выявления антигенов возбудителей, с помощью диагностических сывороток

Выявления антигенов возбудителей – это нахождение в сыворотке крови токсинов возбудителей. Методы выявления антигенов возбудителей очень информативны и из-за легкости проведения и скорости получения конечного результата и относятся к быстрым методам (экспресс - методам) лабораторной диагностики.

Для диагностики чаще используются: РИФ; РНИФ; РА; РП; ПЦР; ИФА:

Реакция иммунофлюоресценции и реакция непрямой иммунофлюоресценции.

Прямая РИФ

На обезжиренном предметном стекле из сыворотки крови делают тонкие мазки-отпечатки, подсушивают и фиксируют, затем наносят диагностическую сыворотку и помещают во влажную камеру на 20-30 минут при температуре 37 градусов. Вынимают, уделяют избыток диагностической сыворотки, промывают 10-15 минут физиологическим раствором, прополаскивают дисцилированной водой и сушат, после чего исследуется в люминесцентном микроскопе.

Оценку производят в +.

РНИФ

При РНИФ с целью выявления антигенов мазок-отпечаток обрабатывают специфической не меченой сывороткой. Затем наносят люминесцирующую сыворотку и помещают во влажную камеру на 20-30 минут при температуре 37 градусов. Вынимают, уделяют избыток диагностической сыворотки, промывают 10-15 минут физиологическим раствором, ополаскивают дисцилированной водой и сушат, после чего исследуется в люминесцентном микроскопе.

Оценку производят также в +.

Методы просты, высокочувствительны и позволяют получить результат через 1-2 часа в даже условиях поликлиники.