Лабораторно-практические занятия. Изготовление и бактериоскопия мазков из патологического материала

Изготовление и бактериоскопия мазков из патологического материала.

Для подтверждения результатов клинического, аллергическо­го, серологического и патоморфологического методов диагности­ки туберкулеза необходимо бактериологическое исследование. Его результаты особенно важны, когда при постановке первич­ного диагноза у убитых животных не обнаруживают изменений, свойственных туберкулезу, или они нечетко выражены. Мико­бактерии можно обнаружить в различном материале, полученном от животных, а также в пробах из объектов внешней среды. От убитых или павших животных в лабораторию направляют лим­фоузлы, кусочки органов с подозрительными на туберкулез из­менениями. От живых животных в случае необходимости берут пробы молока, мокроты, мочи, фекалий, спермы, истечений из влагалища. Пробы доставляют в лабораторию в свежем виде в стерильной посуде. Кусочки органов можно консервировать в 30%-ном стерильном глицериновом растворе.

При подозрении на туберкулез легких у крупного рогатого скота берут пробы мокроты, собирая ее в кювету или на марле­вую салфетку во время искусственно вызванного кашля. При подозрении на туберкулез вымени берут для исследования 150-250 мл молока из всех четвертей вымени (из пораженной четвер­ти — побольше). Учитывают, что первые порции молока непри­годны для исследования. Их сдаивают в отдельную посуду. Мочу (200-500 мл) берут с помощью катетера или собирают при мо­чеиспускании. Фекалии (30-50 г) берут из прямой кишки; исте­чения из влагалища — с помощью стерильных ватных тампонов или влагалищной ложки.

Первый этап лабораторного исследования доставленного биоматериала — бактериоскопия мазков. Из каждого органа и лим­фатического узла готовят по два мазка путем тщательного расти­рания материала между двумя стеклами. Мазки высушивают на воздухе и фиксируют над пламенем. Из мокроты, гноя, слизи выбирают буроватые или желтоватые комочки и раздавливают их между двумя предметными стеклами, размазывая материал. Для концентрации микобактерии мокроту можно подвергнуть обога­щению. Биоматериал в специальной баночке гомогенизируют встряхиванием. Затем добавляют тройной объем 3-6%-ного рас­твора серной кислоты и вновь встряхивают баночку. После этого материал центрифугируют (10-15 мин при 2000 об/мин). Мазки делают из осадка.

Молоко центрифугируют при 3000 об/мин 30 мин. Мазки го­товят из верхнего слоя и осадка молока. После высушивания мазки для удаления жира 20-30 мин обрабатывают хлорофор­мом или спиртом-эфиром. Обнаружение микобактерии облегча­ется при использовании специального метода подготовки мате­риала. Из молока после его центрифугирования удаляют средний слой, а верхний и нижний — смешивают. К 5 мл такой смеси добавляют 5 мл спирта-ректификата, 5 мл эфира и 10 мл 25%-ного раствора антиформина. Полученную смесь взбалтывают и выдерживают в термостате до приобретения гомогенности (одно­родности). После этого добавляют 25 мл физраствора и центри­фугируют смесь при 3000 об/мин 30 мин. Мазки готовят из осадка, промытого физраствором.

Мочу многократно центрифугируют, каждый раз сливая верх­ний слой и добавляя новую порцию мочи. Затем к осадку добав­ляют 3-5 мл 3-6%-ного раствора серной кислоты. Смесь встря­хивают 5-10 мин и центрифугируют 10 мин при 2000 об/мин. Мазки для бактериоскопии готовят из осадка.

Пробы фекалий растирают в ступке, добавляя 25%-ный рас­твор хлористого натрия, пока материал не станет жидким. Сле­дующий этап — фильтрация через марлю. Затем к 5 мл фильтра­та добавляют 2 мл эфира или бензина и центрифугируют смесь 20 мин при 3000 об/мин. Мазки готовят из осадка.

Во всех случаях мазки после фиксации окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопируют с иммерсионной систе­мой. Микобактерии туберкулеза чаще всего имеют вид неболь­ших тонких или слегка изогнутых палочек и выглядят красными на синем фоне. Для люминесцентной микроскопии мазки окра­шивают смесью флуорохромов и просматривают под люмине­сцентным микроскопом при среднем увеличении. Микобактерии в мазках видны в виде светящихся золотисто-оранжевого цвета палочек. Положительные результаты бактериоскопии не дают полного основания для постановки диагноза на туберкулез у животных (кроме птиц) и должны быть подтверждены культуральным и биологическим методами исследования. Но у птиц, в органах которых выявлены типичные для туберкулеза изменения, при положительном результате бактериоскопии диагноз считают установленным. Бактериоскопия позволяет также оценить сте­пень загрязненности биоматериала посторонней микрофлорой. Это учитывают при выборе метода обработки материала на пос­ледующих этапах бактериологического исследования.

Туберкулинизация животных разных видов. Для аллергической диагностики туберкулеза применяют очищенный туберкулин для млекопитающих, выпускаемый в жидком или сухом виде, и очи­щенный туберкулин для птиц, который выпускают только сухим. Перед применением сухой туберкулин растворяют, а жидкий — разводят в специальном растворителе, прилагаемом к каждому флакону с туберкулином. Для диагностики туберкулеза у рогато­го скота и птиц при первичной постановке диагноза и для кон­троля за благополучием в хозяйствах, где реакции на туберкулин обусловлены сенсибилизацией животных (в том числе кур) ати­пичными микобактериями, применяют симультанную аллерги­ческую пробу. Она заключается в одновременном введении двух аллергенов: очищенного туберкулина для млекопитающих (или птиц) и сухого очищенного комплексного аллергена из атипич­ных микобактерии (КАМ).

Туберкулинизации подвергают крупный. рогатый скот, яков, лошадей, буйволов, свиней, овец, коз, собак, кошек — с 2-ме­сячного возраста; верблюдов — с 12 мес; маралов, оленей, пуш­ных зверей и птиц — с 6 мес.

Коров (нетелей), буйволиц, ячих, верблюдиц исследуют неза­висимо от периода беременности; коз, овец, свиноматок, кобы­лиц, ослиц, сук, самок пушных зверей — не ранее месяца после родов. Не разрешается исследовать животных в течение 3 нед после вакцинации или обработки против гельминтов.

Для внутрикожного введения туберкулина используют безы­гольные инъекторы или шприцы вместимостью 1-2 мл с бегун­ком и иглами для внутрикожных инъекций (отдельная игла для каждого животного).Собакам, пушным зверям, кошкам и пти­цам туберкулин вводят только шприцем с иглой. Для нанесения туберкулина на конъюнктиву применяют глазные пипетки. Все эти инструменты используют только для туберкулинизации. До и после использования шприцы, иглы, пипетки стерилизуют кипя­чением в течение 10 мин в дистиллированной или кипяченой воде (без добавления дезсредств).

Однократная внутрикожная туберкулиновая проба. Ее применяют у крупного рогатого скота благополуч­ных хозяйств, а также у свиней, верблюдов, оленей, маралов, буйволов, собак, кошек, пушных зверей (кроме норок), птиц (кроме фазанов).

Туберкулин вводят в дозе 0,2 мл крупному рогатому скоту (кроме быков-производителей), буйволам, зебувидным в области средней трети шеи; быкам-производителям в подхвостовую складку; верблюдам в кожу брюшной стенки в области паха на уровне горизонтальной линии от седалищного бугра; свиньям с наружной поверхности уха, отступя 2 см от его основания (2-3-месячным поросятам можно вводить аллерген безыгольным инъектором в кожу поясницы в 5-8 см от позвоночника); овцам и козам под кожу нижнего века; собакам и пушным зверям (кроме норок) в области внутренней поверхности бедра; норкам интрапальпебрально (в верхнее веко); кошкам в области внутренней поверхности уха; курам в кожу бородки; индейкам в подчелюст­ную сережку; гусям и уткам в подчелюстную складку.

Перед введением туберкулина волосы на месте инъекции вы­стригают (перья выщипывают), кожу обрабатывают 70%-ным этиловым спиртом.

Учитывают и оценивают реакцию у крупного рогатого скота, буйволов, зебувидных, яков, верблюдов, маралов и пятнистых оленей через 72 ч; у коз, овец, свиней, собак, кошек, пушных зверей через 48 ч; у птиц через 30-36 ч.

У животных, инфицированных микобактериями, реакция на туберкулин выражается возникновением разлитой припухлос­ти — тестоватой или мягкой и обычно не имеющей четких гра­ниц. Это сопровождается гиперемией и болезненностью кожи. Но в некоторых случаях образовавшаяся припухлость плотная, безболезненная, отчетливо контурированная.

При обнаружении указанных изменений у крупного рогатого скота (кроме быков-производителей), буйволов, зебувидных, яков, верблюдов, пятнистых оленей и маралов измеряют кутиметром толщину кожной складки и сравнивают ее с толщиной складки неизмененной кожи вблизи места введения туберкулина. Животных перечисленных видов считают реагирующими на ту­беркулин при утолщении кожной складки на 3 мм. Быков-про­изводителей, овец, коз, свиней, собак, кошек, пушных зверей и птиц считают реагирующими при образовании припухлости в месте введения туберкулина.

Двукратная туберкулиновая проба. Приме­няют крупному рогатому скоту, буйволам, зебувидным, якам, верблюдам, маралам, пятнистым оленям в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах. В день учета реакции животным, не реа­гировавшим на первое введение аллергена в дозе
10 000 ME в 0,2 мл, вводят туберкулин повторно — в той же дозе и в то же место. Реакцию учитывают через 24 ч. Животных считают реаги­рующими при утолщении кожной складки на 5 мм и более.

Офтальмопроба. Применяют при исследовании лоша­дей и крупного рогатого скота. 3-5 капель туберкулина наносят на конъюнктиву глаза при оттянутом нижнем веке. Через 5-6 дней вводят туберкулин повторно. Реакцию учитывают через 3, 6, 9 и 12 ч после второго введения аллергена. Животных считают реагирующими при образовании слизисто-гнойного или гнойно­го секрета, накапливающегося в конъюнктивальном мешке или вытекающего в виде шнура из внутреннего угла глаза. Конъюнк­тива при этом гиперемирована и отечна.

Внутривенная туберкулиновая проба. Ее разрешается проводить только у взрослого крупного рогатого скота, за исключением коров (нетелей) за месяц до отела и месяц после него. Нельзя исследовать животных с температурой тела выше 39,5 °С. Туберкулин для млекопитающих в стандарт­ном разведении вводят внутривенно в дозе 1 мл на 100 кг живой массы. Через 3, 6, 9 ч проводят термометрию. Реагирующими считают животных с повышением температуры тела на ГС и более максимальной нормальной, т.е. 40,5 °С и выше. На каж­дую туберкулинизацию составляют акт, в котором указывают время и место проведения работы (хозяйство, населенный пункт, отделение, ферма), виды исследованных животных и их количе­ство по половозрастным и технологическим группам. Указывают метод исследования, характеристику использованного аллергена, обобщают результаты исследования и формулируют предложения в отношении дальнейших действий владельцев животных и вете­ринарных специалистов. К акту прилагают опись реагировавших животных с указанием их инвентарных номеров или кличек, пола, возраста, величины утолщения кожной складки.

Составление плана оздоровительных мероприятий в хозяйствах, неблагополучных по туберкулезу.Конкретная основа разработки плана оздоровительных мероприятий — данные предварительно­го эпизоотологического обследования неблагополучного хозяйст­ва (населенного пункта). Это обследование должно выявить пути заноса возбудителя туберкулеза, определить границы возникшего эпизоотического очага, оценить характер и степень угрозы для других животноводческих хозяйств и ферм. Не менее важны данные о характере течения эпизоотического процесса в обследу­емом стаде, степени распространенности болезни, условиях, спо­собствовавших перезаражению животных.

Учитывают, что одним из наиболее частых путей заноса воз­будителя туберкулеза является ввод в благополучное стадо зара­женного скота. Необходимо иметь в виду и возможность заноса возбудителя животными других видов: свиньями, собаками, кош­ками, птицей (курами). Нередко он заносится с кормами, осо­бенно с молочной сывороткой и обратом, получаемыми с молокоперерабатывающих предприятий. Заражение животных может произойти при выпасе на инфицированных пастбищах, при кон­такте с больным скотом личных подворий местных жителей. Следует иметь в виду возможность повторных вспышек туберку­леза через 2-3 или даже 4 года после оздоровления стада за счет молодняка, полученного в период неблагополучия и оставленно­го в хозяйстве. Источниками возбудителя могут быть люди, больные туберкулезом. Очень опасно скармливать животным необезвреженные пищевые отходы из больниц, туберкулезных са­наториев и диспансеров.

Цели планируемых оздоровительных мероприятий — быстрая локализация эпизоотического очага, выявление и изъятие живот­ных — источников возбудителя, обеззараживание инфицирован­ных объектов внешней среды, предупреждение новых случаев заражения животных. Характер мероприятий определяют с уче­том положений действующих инструкций и особенностей природно-хозяйственных условий и эпизоотической обстановки, сложившейся в данном районе, в данном хозяйстве.

В плане перечисляют необходимые ограничительные и оздо­ровительные мероприятия, указывают срок их исполнения, опре­деляют ответственных лиц и непосредственных исполнителей.

В целях быстрой локализации эпизоотического очага преду­сматривают категорический запрет вывода животных неблагопо­лучной группы в другие стада, вывоз кормов, подозреваемых в инфицировании микобактериями туберкулеза. Планируют меро­приятия по приведению в должный порядок всех санитарных объектов (ограждения фермы, санпропускник, дезбарьеры, ро­дильное отделение, карантинное помещение, навозохранилище). Предусматривают немедленную организацию обеззараживания молока, получаемого от коров неблагополучного стада.

Комплекс мероприятий, направленных на выявление и устра­нение источников возбудителя болезни, должен включать прове­дение систематических исследований скота, немедленную изоля­цию и последующую сдачу на убой всех выявляемых больных животных. Соответственно определяют порядок диагностических исследований скота, их масштабы, сроки туберкулинизации. Обязательно указывают, как поступить с реагирующими на ту­беркулин животными (место изоляции, сроки отправки на мясо­комбинат).

Важное мероприятие, направленное на предупреждение даль­нейшего перезаражения животных, — текущая дезинфекция. Ее проводят систематически и обязательно после каждого очередно­го обследования неблагополучного поголовья. В плане оздорови­тельных мероприятий определяют порядок проведения дезин­фекции, которая должна включать не только обработку помеще­ний и инвентаря, но и обеззараживание навоза, а также обуви и одежды обслуживающего персонала. Обязательно и обеззаражи­вание территории, прилегающей к животноводческим помеще­ниям. Также в целях профилактики новых случаев заражения животных определяют порядок использования пастбищ, исклю­чая выпас на инфицированных участках.

Обязательно учитывают важность проблемы получения здоро­вого молодняка. Предусматривают сдачу на убой всех телят, родившихся от больных коров. Заранее обеспечивают возмож­ность изолированного выращивания молодняка, который будет получен после постановки стада на контрольное наблюдение.

Сдача больных животных не гарантирует благополучия остав­шегося поголовья без проведения санитарного ремонта животно­водческих помещений и других санитарных мер. Соответственно в плане оздоровительных мероприятий предусматривают вывод скота в летние лагеря и санитарный ремонт всех помещений фермы. Освободившиеся помещения очищают от навоза, снима­ют в стойлах старый деревянный настил, убирают 15-20 см грунта под полом и настилают новый пол. Очищают стены, инвентарь, оборудование. Весь скопившийся на ферме навоз вывозят в специально отведенное огражденное место и складиру­ют в бурты. Очищают от мусора и навоза территорию фермы, выгульные площадки. Все эти виды работ отражают в плане. Предусматривают и проведение заключительной дезинфекции во всех помещениях на территории фермы с обязательной лабора­торной проверкой качества дезинфекции.

* * *

Бруцеллез(Brucellosis) — хроническая инфекционная бо­лезнь животных, опасная и для человека. Проявляется у самок абортами, задержанием последа, эндометритами, у самцов — орхитами, но преимущественно протекает без симптомов.

Распространенность.Болезнь регистрируют во многих странах мира. Неблагополучен и ряд регионов нашей страны.

Экономический ущерб, причиняемый этой болезнью неблаго­получным хозяйствам, весьма значителен. Он обусловливается снижением сроков хозяйственного использования животных из-за вынужденного убоя в случаях заражения, снижением произ­водства молока, недополучением приплода, большими затратами на оздоровительные мероприятия.

Возбудитель. Известны 6 видов бруцелл, подразделяемых на ряд биологичес­ких вариантов (биоваров). Вид В. melitensis — возбудитель болезни у овец, коз и наиболее опасный для человека — включает 3 биовара; В. abortus — возбудитель бруцеллеза крупного рогатого скота, яков, буйволов, верблюдов, лошадей — 7 биоваров. Вид В. suis — возбудитель болезни у свиней и оленей — включает 5 биоваров. Носителями 2-го биовара В. suis являются не только свиньи, но и зайцы, 4-го — олени, 5-го — мышевидные грызуны. В род бруцелл входят также В. ovis — возбудитель инфекционного эпидидимита баранов и не циркуллирую-щие на территории нашей страны В. canis, выделенная от собак, В. neotomae, выделенная от пустынной кустарниковой крысы в США. Определение видов и биоваров имеет значение при уточнении характера резервуара, источника возбу­дителя и путей распространения болезни.

Бруцеллы — очень мелкие полиморфные бактерии. Даже в одном препарате можно обнаружить кокковидные, овоидные, палочковидные формы этих микро­бов. Они неподвижны, хорошо красятся всеми анилиновыми красками, грамотрицательны. Хорошо растут на сывороточных средах, печеночных средах с добав­лением глицерина и глюкозы, на среде Д из рыбного и дрожжевого гидролизата.

Бруцеллы термолабильны. В жидкой среде при 60 °C они погибают за 30 мин, при кипячении — моментально. Но низкие температуры фактически кон­сервируют бруцелл. В замороженном мясе они остаются жизнеспособными более 5 мес, в сырах и масле — более 2, в почве, воде, навозе — до 4; в овечьей и козьей шерсти — до 3-4 мес. В охлажденном молоке бруцеллы сохраняются 6-8 дней. Устойчивость к дезсредствам невелика: 1%-ные растворы формальдегида, фенола убивают бруцелл за 30 мин.

Эпизоотологические данные.Восприимчивы к болезни сельско­хозяйственные и домашние животные всех видов. Доказана и вос­приимчивость многих видов диких животных — прежде всего ко­пытных. Основной хозяин В. abortus — крупный рогатый скот, В. melitensis — овцы и козы, В. suis — свиньи. Однако доказана возможность миграции В. melitensis от коз и овец к коровам и свиньям, В. suis — от свиней к козам и овцам. Главный резервуар возбудителя бруцеллеза — больные сельскохозяйственные живот­ные; роль диких животных в распространении болезни невелика.

Источники возбудителей бруцеллеза — больные животные. Они особенно опасны при клинических проявлениях болезни. С маточными истечениями, околоплодными водами, плодными оболочками, абортированными плодами во внешнюю среду вы­деляется огромное количество бруцелл. Локализуясь в молочной железе, бруцеллы длительное время (до 3лет у овец, до 9 лет у коров) выделяются с молоком. Не исключается возможность вы­деления возбудителей болезни с мочой и калом. Больные самцы выделяют бруцелл главным образом со спермой.

Факторами передачи возбудителя могут стать молоко и обрат, полученные от больных животных, инфицированные раститель­ные корма, подстилка, вода, контаминированная бруцеллами сперма при искусственном осеменении животных. Молодняк чаще всего заражается алиментарным путем, но не исключается и внутриутробное заражение. У взросдых животных также преоб­ладает алиментарный путь заражения, но возможна и передача возбудителя при случке.

В благополучные стада болезнь чаще заносят вновь поступив­шие животные — невыявленные носители и выделители бруцелл. Особенно опасно приобретение молодняка из неблагополучных или недавно оздоровленных хозяйств. Нередко заражение живот­ных происходит при контактах с неблагополучным поголовьем на пастбище или водопое, при использовании сена, соломы и других кормов, заготовленных в неблагополучных хозяйствах.

В недавно возникших (свежих) эпизоотических очагах в тече­ние нескольких месяцев может заразиться до 50-60% поголовья животных. Особенно быстро болезнь распространяется в период стойлового содержания скота. В стаде возникают единичные, а затем массовые аборты. Перезаражению животных способствуют нарушения санитарного режима: несвоевременная уборка абор­тированных плодов и последов, нерегулярная дезинфекция поме­щений.

Патогенез. Проникшие в организм бруцеллы по лимфатичес­ким путям попадают в регионарные лимфатические узлы, а затем в другие лимфоузлы и паренхиматозные органы. В развитии инфекционного процесса выделяют 3 фазы: регионарную инфек­цию (первичная латенция), генерализацию, вторичную латенцию.

Фаза регионарной инфекции характеризуется адаптацией воз­будителя к определенным тканям и его размножением в регио­нарных лимфатических узлах. Показатели серологических реак­ций еще отрицательны, но животные уже могут быть выделите­лями бруцелл.

Фаза генерализации процесса развивается при снижении ре­зистентности животного, чаще — во второй половине беремен­ности. Для нее характерны бактериемия и развитие явных кли­нических признаков болезни. У беременных животных бруцеллы проникают в слизистые оболочки матки, в плодные оболочки и плод, вызывая воспалительно-некротические изменения, часто приводящие к гибели плода и аборту. Воспалительно-некроти­ческие изменения могут развиться и в других органах и тканях, что проявляется возникновением маститов, бурситов, артритов, орхитов. В большинстве случаев становится высоким уровень специфических сывороточных антител.

В фазе вторичной латенции происходит клиническое выздо­ровление животного, но носительство возбудителя и опасность его выделения сохраняются. Хорошо выражены аллергические реакции, но антитела в крови зачастую уже не выявляются.

Клиническая картина.Инкубационный период при бруцеллезе продолжается 2-4 нед. У беременных животных всех видов ос­новной симптом бруцеллеза — аборт. В некоторых случаях рож­дается слаборазвитый приплод. У коров, овец, коз аборты обыч­но возникают во второй половине беременности, у свиней — в разные сроки супоросности с нередкой мумификацией плодов. За 1-2 дня до аборта у самок набухает вымя, припухают срам­ные губы, из влагалища выделяется незначительное количество буровато-красной слизи. Абортам обычно сопутствуют задержа­ние последа, развитие эндометрита. Нередко эндометрит сочета­ется с маститом, поражением яичников, сальпингитом, что обу­словливает длительное бесплодие. Повторные аборты у крупного рогатого скота и овец бывают очень редко, но вполне возможны у свиней.

У некоторых животных инфекция может проявиться серозны­ми бурситами, гигромами, артритами, тендовагинитами, а у сам­цов (очень редко) — орхитами и эпидидимитами. У свиней могут образоваться абсцессы в подкожной клетчатке, в мышцах скелета и даже в паренхиматозных органах. У лошадей аборты на почве бруцеллеза чрезвычайно редки, чаще воспалительно-некротичес­кие процессы развиваются в тканях области затылка и холки. У северных оленей, маралов характерным проявлением бруцеллеза, считают бурситы конечностей.

У многих зараженных животных бруцеллез протекает бес­симптомно, латентно. Выявить таких животных, являющихся ис­точниками возбудителей болезни, можно лишь с помощью серо­логического или аллергического исследования.

Патологоанатомические изменения.У абортировавших живот­ных плодные оболочки утолщены, студенисто инфильтрированы, покрыты хлопьями фибрина и гноем, местами — с кровоизлия­ниями. У абортированных плодов устанавливают отечность под­кожной клетчатки и пупочного канатика (серозно-геморрагическая инфильтрация). В брюшной и грудной полостях плода обна­руживают буровато-красную жидкость с хлопьями фибрина, в сычуге — белую или желтоватую слизистую массу. В некоторых случаях устанавливают изменения легких, свойственные серозно­катаральной пневмонии, изменения кишечника, свойственные катарально-геморрагическому энтериту. В печени плода могут быть очажки некроза.

У абортировавших маток устанавливают гнойно-некротичес­кий эндометрит, иногда — интерстициальный мастит. У самцов обнаруживают гнойно-некротические очаги в семенниках и при­датках.

Диагноз ставят на основании результатов бактериологических, серологических и аллергических исследований с учетом эпизоо­тологических данных и клинических признаков болезни. На ос­нове клинических проявлений болезни (аборты, чаще во второй половине беременности, задержания последа и т.д.) можно только заподозрить бруцеллез. При эпизоотологическом обследо­вании учитывают эпизоотическую обстановку в соседних хозяй­ствах, анализируют результаты исследований животных данного стада в прошлом, изучают хозяйственные связи и порядок ком­плектования стада, в том числе соблюдение правил профилакти­ческого карантинирования приобретенных животных. Анализи­руют причины недополучения приплода.

При наличии клинических проявлений болезни обязательно бактериологическое исследование соответствующего биоматериала. В лабораторию направляют абортированный плод с плодными оболочками (от свиноматок берут не менее 3 пло­дов) или желудок плода с содержимым, кусочки печени и селе­зенки. Одновременно направляют на исследование кровь аборти­ровавшего животного.

При появлении у животных других признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и пр.), также обязательна отправка соответствующего пато­логического материала на бактериологическое исследование. У абортировавших животных берут на исследование и пробы моло­ка.

Бактериологическая диагностика бруцеллеза включает бакте­риоскопию мазков из патологического материала, выделение культур бруцелл на питательных средах и (при необходимости) постановку биологической пробы на морских свинках. Результат исследования считают положительным при выделении культуры возбудителя или положительном результате биопробы.

Серологическая диагностика бруцеллеза заклю­чается в обнаружении специфических антител в сыворотке крови животных с помощью реакции агглютинации в пробирках (РА), реакции связывания комплемента (РСК), реакции длительного связывания комплемента (РДСК), пластинчатой реакции агглю­тинации с роз бенгал антигеном (роз бенгал проба — РБП), ре­акции иммунодиффузии с О-ПС-антигеном (РИД). Специфичес­кие антитела в молоке коров выявляют с помощью кольцевой реакции (КР).

Аллергический метод с использованием бруцеллина ВИЭВ применяют при исследовании свиней.

Крупный рогатый скот, яков, зебу и буйволов исследуют с помощью РА, РСК или РДСК, РБП, КР, РИД; овец, коз, оле­ней, маралов, лошадей, верблюдов, — с помощью РА, РСК или РДСК, РБП; свиней-с помощью РСК или РДСК, РБП, а также аллергическим методом; собак и животных других видов (кроме перечисленных выше) — с помощью РА и РСК.

Дифференциальный диагноз. Бруцеллез дифферен­цируют от других инфекций, проявляющихся абортами. У круп­ного рогатого скота необходимо исключать кампилобактериоз и хламидиоз, а также трихомоноз. У овец и коз исключают кампи­лобактериоз, листериоз, хламидиоз, у свиней — лептоспироз. Клиническая картина этих болезней не позволяет провести точ­ную дифференциацию. Необходимы лабораторные исследования. При серологической диагностике следует учитывать возможность перекрестных реакций, обусловленных одним из серовариантов иерсиний. У овец исключают инфекционный эпидидимит бара­нов.

Лечение.Больные бруцеллезом животные подлежат убою. Их не лечат.

Иммунитет и средства специфической профилактики.Иммуни­тет при бруцеллезе недостаточно прочный, относительный. Его называют фагоцитарным — связанным в основном со специфи­чески сенсибилизированными (иммунными) фагоцитами. Одна­ко фагоцитоз, как и при туберкулезе, часто имеет незавершен­ный характер. Синтез сывороточных антител отстает во времени от специфических изменений иммунокомпетентных клеток. За­щитная роль антител невелика. При латентной инфекции серо­логические реакции часто отрицательны. Полное выздоровление заразившегося животного с освобождением организма от бруцелл представляется сомнительным.

В комплексе мероприятий по борьбе с болезнью у крупного скота важное место занимает профилактическая вакцинация жи­выми вакцинами из слабовирулентных, но иммуногенных штам­мов возбудителей бруцеллеза. Наиболее широко используется вакцина из слабоагглютиногенного штамма Br. abortus 82. Вак­цинируют крупный рогатый скот в неблагополучных и угрожае­мых по бруцеллезу стадах. В этих же целях, но в меньших масштабах используются вакцины из штаммов Br. abortus 19 и 104-М.

Для профилактической иммунизации мелкого рогатого скота в неблагополучных районах страны используют вакцину из штамма Br. abortus 19 и Br. melitensis Rev-1.

Профилактика и меры борьбы.Основа профилактики бруцел­леза — выполнение комплекса ветеринарно-санитарных правил, направленных на охрану хозяйств и ферм от заноса возбудителей инфекции. Соответственно на каждой ферме должны быть обо­рудованы необходимые объекты ветеринарного и санитарного назначения.

Без разрешения ветеринарных специалистов нельзя вводить в благополучные стада животных из других хозяйств и населенных пунктов. Не допускаются и бесконтрольные внутрихозяйствен­ные перемещения животных. Весь скот, поступающий в хозяйст­во по разрешению, в течение 30 дней содержат изолированно в карантинном помещении и исследуют на бруцеллез. В общие стада этих животных вводят только после получения у каждого из них отрицательных результатов исследований. Исключают возможность контактов со скотом неблагополучных хозяйств и населенных пунктов на пастбищах и в местах водопоев. Корма за пределами хозяйства заготавливают только в благополучной местности. Обязательны систематические (плановые) контроль­ные исследования скота, а в необходимых случаях и профилак­тическая вакцинация. В случае аборта, преждевременных родов и появления других признаков, вызывающих подозрение на бру­целлез, немедленно изолируют таких животных и принимают меры для срочного уточнения диагноза.

При выявлении бруцеллеза хозяйства (фермы, отделения), а также населенные пункты объявляют неблагополучными и вво­дят соответствующие ограничения. Запрещают ввод и вывод жи­вотных из неблагополучных стад. На всей территории, объявлен­ной неблагополучной, запрещают заготовку кормов для вывоза в другие хозяйства, а также прогон и провоз животных через эту территорию.

Больной скот немедленно изолируют и в течение 15 дней сдают на убой. Предупреждают всякие контакты животных не­благополучных стад (отар) со здоровыми животными. Вводят систему гарантированного обеззараживания продуктов животно­водства. В частности, немедленно прекращается вывоз необеззараженного молока, полученного от коров неблагополучного стада. Обеспечивают обеззараживание навоза и сточных вод, проведение текущей дезинфекции. Трупы животных, абортиро­ванные плоды подлежат немедленному уничтожению или утили­зации.

Оздоровительные мероприятия проводят на основе комплекс­ных планов, учитывающих общие инструктивные положения, эпизоотическую обстановку и местные природно-хозяйственные условия. Конкретные пути оздоровления зависят от широты рас­пространения болезни в районе, области, республике, уровня заболеваемости и характера течения бруцеллеза в оздоравливаемом хозяйстве.

При выявлении бруцеллеза крупного рогатого скота в благо­получных областях (краях, республиках) или в благополучных, не проводящих иммунизацию скота районах неблагополучных об­ластей используют метод полной замены неблагополучного пого­ловья. Так же поступают в случаях острого течения бруцеллеза с массовыми абортами и в случаях, когда в течение 2-5 лет не достигается оздоровление хозяйства с применением противобруцеллезных вакцин. Хозяйства признают оздоровленными при полной ликвидации неблагополучного поголовья и проведении комплекса мероприятий по санации помещений и территории ферм, пастбищ и мест водопоя животных. Кроме того, должно быть получено два (с интервалом 30 дней) отрицательных резуль­тата серологических исследований других видов животных (включая собак), имевших контакты с поголовьем неблагополуч­ного стада (фермы). Это требование распространяется и на скот, принадлежащий жителям соответствующего населенного пункта.

В районах и областях (краях, республиках) с широким распро­странением бруцеллеза может быть разрешено оздоровление не­благополучных хозяйств с использованием противобруцеллезных вакцин. В таком случае ограничения снимают при получении двукратных (с интервалом 30 дней) отрицательных результатов серологических исследований всего поголовья крупного рогатого скота в оздоравливаемом хозяйстве, всех других видов животных, имевших контакты с этим поголовьем, и скота, принадлежащего жителям данного населенного пункта. Обязательным условием остается и выполнение мер по санации помещений, территории ферм, пастбищ и мест водопоя.

При выявлении бруцеллеза овец (коз) в благополучных райо­нах, областях (краях, республиках) все неблагополучное поголо­вье овец и коз любого хозяйства независимо от форм собствен­ности вместе с приплодом подлежит немедленному убою. Огра­ничения снимают при получении отрицательного результата двукратных (с интервалом 30 дней) серологических исследований остального поголовья овец (коз), контактировавшего с неблаго­получной отарой, и проведения санитарных мероприятий. При выявлении бруцеллеза в стационарно неблагополучных областях (краях, республиках) все неблагополучное поголовье овец и коз с приплодом подлежит убою на мясо. Остальное поголовье хозяй­ства, давшее отрицательные результаты серологического исследо­вания, иммунизируют противобруцеллезной вакциной.

При выявлении бруцеллеза у буйволов, яков, зебу и верблю­дов оздоровительные мероприятия проводят в таком же порядке, как и в стадах крупного рогатого скота.

На фермах и комплексах с поголовьем до 12 тыс. свиней при выявлении бруцеллеза сдают на убой все поголовье (супоросных маток — после опороса и отъема поросят). На более крупных комплексах убою подвергают все поголовье неблагополучных технологических групп, секторов (блоков) или свинарников.

Неблагополучные стада северных оленей признают оздоров­ленными, если в течение последних двух лет в них не были выявлены животные с клиническими признаками бруцеллеза (аборты, орхиты, эпидидимиты, бурситы), а при серологическом исследовании получены отрицательные результаты.

В неблагополучных звероводческих хозяйствах ежемесячно до получения отрицательных результатов проводят серологические исследования зверей. Реагирующих (самок вместе с пометом) содержат в изоляторе до убоя на мех.

При выявлении бруцеллеза у крупного рогатого скота (буйво­лов, верблюдов) личных подворий граждан проводят системати­ческие серологические исследования имеющихся животных до получения двукратных (подряд) отрицательных результатов. Если животные содержались в общем стаде, исследуют все поголовье скота неблагополучного населенного пункта. В случае выявления больных бруцеллезом овец или коз немедленно подвергают убою всех имеющихся в хозяйстве животных этих видов. Овец и коз, принадлежащих другим жителям данного населенного пункта, исследуют серологическим методом до получения двукратного (подряд) отрицательного результата. При выявлении бруцеллеза у свиней подвергают убою все свинопоголовье, имеющееся у дан­ного владельца. В зонах значительного распространения бруцел­леза крупный и мелкий рогатый скот, принадлежащий населе­нию, в целях профилактики разрешается иммунизировать противобруцеллезными вакцинами.