Определение глюкозы с помощью реакции восстановления оксида меди в гемиоксид

Кафедра БТ

Лабораторная работа по предмету “Биохимия”.

Углеводы.

Выполнил: студент гр. ТБПиВ-91,

Анохин И. С.

Проверила: доц. Мезенцева Н.И.

Цель работы:Освоить количественные методы определения глюкозы и лактозы в исследуемых веществах.

Теоретическая часть

Определение глюкозы с помощью реакции восстановления оксида меди в гемиоксид

В основе метода лежит способность солей меди (II) в определенных условиях количественно окислять глюкозу по реакции Троммера.

В реакции Троммера происходит образование как альдоновых кислот, так и гидроксида меди (II), что указывает на отсутствие количественной связи между глюкозой и гемиоксидом меди. Однако если к реакционной смеси добавляют сегнетову соль, то образуется комплекс, в котором медь реагирует с глюкозой в стехиометрическом соотношении.

Количество закиси меди (Cu₂O), эквивалентное окисленной глюкозе, определяют йодометрическим методом:

.

Эта реакция в присутствии солей щавелевой или винной кислот протекает практически до конца.

Количество йода в излишке, которое не прореагировало с гемиоксидом меди, можно определить титрованием тиосульфатом натрия (индикатор – раствор крахмала)

Материалы и реактивы:исследуемый раствор глюкозы (1…4 мг/мл), реактив Фелинга I и II (для приготовления раствора I берут 200 г сегнетовой соли и 150 г гидроксида натрия растворяют в дистиллированной воде до объема 1 литр; раствор II готовят из перекристаллизованного сульфата меди растворяют в воде 40 г на 1 литр), насыщенный раствор щавелевой кислоты, 0,05 моль/л раствор йода, 0,05 моль/л раствор тиосульфата натрия, 1%-ный раствор крахмала.

Оборудование:стеклянные палочки, пипетки, конические колбы (объем 50 мл), капельницы, водяная баня, бюретки, часы.

Ход работы. В две колбы помещают по 5 мл реактива Фелинга I и II. В одну из колб (проба) добавляют 10 мл исследуемого раствора глюкозы, а в другую (контроль) – 10 мл дистиллированной воды. Содержимое обеих колб нагревают до кипения, кипятят 5 мин, и затем охлаждают. После этого в обе колбы наливают по 10 мл насыщенного раствора щавелевой кислоты, по 10 мл йода и после перемешивания отстаивают в течении 5 мин. По истечению этого времени в колбы вносят по 5 капель раствора крахмала и титруют раствором тиосульфата до исчезновения окраски, образовавшейся после добавления крахмала.

Массовую концентрацию глюкозы в исследуемом растворе (мг/мл) рассчитывают по формуле:

,

где А и В – объем раствора тиосульфата натрия, затраченного на титрование пробы и контроля соответственно;

f – коэффициент поправки на титр 0,05 моль/л раствора тиосульфата натрия;

Q – масса глюкозы (3,52 мг), эквивалентная 1 мл 0,05 моль/л раствора тиосульфата натрия;

V₀ – общий объем пробы;

V₁ – объем исследуемого раствора, взятого до анализа.