Сыворотки крови по фриденталю
Эта работа позволяет наглядно убедиться в буферных свойствах сыворотки крови. Равные объемы сыворотки и воды (для контроля) титруют кислотой и щелочью до сдвига реакции соответственно в кислую и щелочную сторону.
Кровь высших животных и особенно человека отличается большим постоянством активной реакции. Величина рН в среднем составляет 7,36 и колеблется в очень узких границах, не выходя за пределы 7,3–7,4, т. е. слабощелочной реакции. Постоянство рН крови сохраняется, несмотря на непрерывное поступление в кровь кислых и щелочных продуктов обмена. Особенно много в тканях образуется кислых веществ (угольная кислота, молочная кислота и др.). Известно, что для того, чтобы сделать реакцию сыворотки щелочной (по фенолфталеину), к ней приходится прибавить в несколько десятков раз (40–70) больше, чем к дистиллированной воде. А чтобы сделать реакцию кислой (по метилоранжу), к сыворотке нужно прибавить в несколько сотен раз (300–400) больше соляной кислоты, чем к дистиллированной воде.
Постоянство рН крови обеспечивается целым рядом регуляторных механизмов, и в первую очередь следующими буферными системами:
1) гемоглобина (оксигемоглобин и восстановленный гемоглобин);
2) угольной кислоты – гидрокарбоната натрия (карбонатный буфер);
3) NaH2P04 и Na2HP04 (фосфатный буфер);
4) белков плазмы (белковый буфер).
Для работы необходимы:4 стаканчика, 2 пипетки объемом 10 мл, 4 бюретки: сыворотка крови, разведенная в 10 раз, 0,01 н. раствор NaОН, 0,1 н. раствор НСl, дистиллированная вода, индикаторы – метилоранж и фенолфталеин. едкого натра
Проведение работы. Для изучения буферных свойств крови берут два чистых стаканчика и наливают из бюреток в один 5 мл сыворотки крови, в другой – 5 мл воды. Прибавляют в оба стаканчика по капле метилоранжа и титруют (считая капли) 0,1 н. НСl до появления не исчезающего при взбалтывании красного (алого) окрашивания. Титрование необходимо начинать с воды, которая не обладает буферными свойствами. Для простоты отсчет титрования ведут в каплях. Записывают, во сколько раз больше капель кислоты понадобится на титрование сыворотки, чем воды, чтобы в обоих стаканчиках получился одинаковый красный (алый) цвет.
Затем берут еще два стаканчика и снова наливают в один 5 мл сыворотки крови, а в другой – 5 мл воды. Прибавляют в каждый стаканчик по капле фенолфталеина и (считая капли) титруют 0,01 н. NaОН до не исчезающего в течение 1 мин слабого фиолетового окрашивания (для более точного сравнения нужно поставить оба стаканчика рядом на белую бумагу). Считают капли раствора щелочи при титровании воды и сыворотки. Устанавливают, во сколько раз больше NaОН понадобилось на титрование сыворотки, чем воды.
Результаты работы и их оформление.Запишите результаты. Сравните данные, полученные при титровании сыворотки кислотой и щелочью. Отметьте, во сколько раз буферные способности сыворотки нейтрализовать кислоту отличаются от ее способности нейтрализовать щелочь. Сформулируйте в виде вывода, что доказывает проведенный опыт.
Р а б о т а 11
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ
В эритроцитах крови человека содержатся специфические антигены, называемые агглютиногенами. Различают агглютиногены А и В.
В плазме находятся антитела, называемые агглютининами a и b. В крови одного человека никогда не сочетаются А и a или В и b – так называемые одноименные тела. Сочетание одноименных тел может произойти лишь при переливании крови. При этом возможны опасные осложнения вследствие реакции агглютинации крови (склеивание эритроцитов одноименными агглютининами плазмы). Для предотвращения несовместимых сочетаний при переливании крови необходимо предварительно определять группу крови.
Для работы необходимы:стерильный скарификатор, две стеклянные палочки, стандартные сыворотки групп I, II, III; кафельная белая плитка, вата, спирт, йод, эфир.
Объект исследования – человек.
Проведение работы. Группы крови определяют по свойствам эритроцитов, которые устанавливают с помощью стандартных сывороток, содержащих известные агглютинины.
На кафельную плитку наносят, не смешивая, по одной капле стандартных сывороток I, II и III групп, содержащих соответственно агглютинины: I – a, b, II – b и III – a. Затем, получив каплю крови из пальца, первой стеклянной палочкой переносят небольшое количество ее в каплю сыворотки I группы, вторым чистым концом этой же палочки такое же количество крови переносят в сыворотку II группы. При помощи второй стеклянной палочки третью каплю исследуемой крови переносят в сыворотку III группы. Каждый раз кровь тщательно размешивают в капле сыворотки, пока смесь не станет равномерно розоватого цвета. Реакция агглютинации наступает через 1–5 мин. При наличии агглютинации капля утрачивает гомогенность и становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков. Группу крови устанавливают в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации.
1. Если агглютинации нет во всех трех каплях, это свидетельствует об отсутствии агглютиногенов в эритроцитах исследуемой крови и, следовательно, она принадлежит I (0) группе.
2. Если агглютинация произошла с сыворотками I и III групп, содержащими соответственно агглютинины a b и a, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиногены А и эта кровь принадлежит II (А) группе.
3. Если агглютинация произошла с сыворотками I и II групп, содержащими агглютинины a b и b, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и она принадлежит III группе (В).
4. Если агглютинация произошла с сыворотками I, II и III групп, содержащими соответственно агглютинины a b, b и a, то эритроциты исследуемой крови содержат как агглютиноген А, так и агглютиноген В. Следовательно, исследуемая кровь принадлежит IV группе (АВ).
Результаты работы и их оформление.Запишите, к какой группе крови принадлежит ваша кровь. Определите:
1) реципиентам с какими группами крови можно переливать вашу кровь;
2) кровь какой группы можно переливать вам.
Р а б о т а 12
ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ФАКТОРА
В эритроцитах кроме агглютиногенов А и В может содержаться агглютиноген резус-фактор (Rh-фактор). Кровь, в которой имеется Rh-фактор, называют резус-положительной. В крови людей не бывает готовых антител к резус-фактору. Они вырабатываются лишь при введении Rh-отрицательным реципиентам Rh-положительной крови; rh-антитела сохраняются в организме, и поэтому при повторном введении Rh-положи-тельной крови возникает реакция агглютинации, сопровождаемая развитием патологического состояния. К Rh-положи-тельным относится 85% людей. Определение Rh-фактора так же необходимо, как и определение группы крови людей.
Наиболее удобным способом определения Rh-фактора является методика с использованием специфической антирезусной сыворотки.
Для работы необходимы:стерильный скарификатор, белая кафельная плитка, стеклянная палочка, антирезусная и контрольная сыворотки, пипетки, вата, спирт, йод.
Объект исследования – человек.
Проведение работы. На кафельную плитку пипеткой наносят раздельно по одной капле антирезусной и контрольной сывороток. Прокалывают палец и стеклянной палочкой вносят в обе капли кровь испытуемого. Через 5 мин наблюдают результат.
Результаты работы и их оформление.Отметьте, в какой капле происходит агглютинация. На основании результата эксперимента сделайте вывод о том, является ли данная кровь Rh-положительной или Rh-отрицательной.
Р а б о т а 13