Вирусологических исследований

Любые пробы (в том числе нестерильные, например, фекалии) для вирусологического исследования берут, соблюдая правила асептики, с целью предотвращения его дополнительного загрязнения посторонней микрофлорой. Взятые для исследования материалы рекомендуется помещать в стеклянные флаконы или посуду из нетоксичной пластмассы с завинчивающейся пробкой. Пробы следует сохранять влажными и на холоду, не замораживая, поскольку ряд вирусов (в частности, возбудители респираторных вирусных инфекций) характеризуется низкой выживаемостью во внешней среде. Для сохранения жизнеспособности вирусов некоторые про­бы (мазки из носоглотки, соскобы кожных поражений) погружа­ют в стабилизирующую среду, состоящую из нейтрального изотонического раствора, белка и антибиотиков. Можно также пользоваться раствором Хенкса или средами для тканевых культур (гидролизат лактальбумина, среды 199, Игла и т.д., содержащие 10% про­гретой сыворотки крупного рогатого скота или бычьего альбумина) с антибиотиками (200-1000 ЕД пенициллина, 200-1000 мг стрептомицина и 50-100 ЕД нистатина), подавляющими рост бактерий и грибов, которые приводят к аутолизу белков и разрушению вирусов.

КРОВЬ.

Для выделения вирусов и сероло­гического исследования берут 10 мл крови. Сыворотку крови, взятую для серологических исследований, в случае ее возможной нестерильности, можно заморозить, что предотвращает бактери­альный рост и сохраняет ранние макроглобулиновые антитела. Первую пробу крови для серологического исследования берут на 3-4 дни болезни, вторую – на 10-15. Так как при некоторых вирусных инфекциях антитела накапливаются медленно, целесообразно взять третью пробу на 25-30-й день.

МАТЕРИАЛ ИЗ ВЕРХНИХ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ.

Мазки из глотки берут ватным тампоном, не касаясь языка и щек, тщательно протирая заднюю стенку глотки, после чего опускают тампон в стаби­лизирующую среду. У детей в возрасте до 2 лет вирусы можно выделять из носоглоточного секрета. Из него де­лают также мазки для исследования методом иммунофлюоресценции.

СПИННОМОЗГОВАЯ ЖИДКОСТЬ.

Вирусы из спин­номозговой жидкости выделяют при при менингитах, реже при энцефалитах.

ФЕКАЛИИ.

Кусочки кала, массой 4-8 г, помещают в сухой стериль­ный флакон. Можно также исследовать ректальные мазки, однако частота выделения вируса из них ниже, чем из кала.

СОСКОБЫ И МАЗКИ С КОНЪЮНКТИВЫ.

Соскобс конъюнктивы снимают тонким стерильным шпателем после локальной легкой анестезии и делают мазок на предметном стекле. Для выделения ви­руса производят смыв с конъюнктивы стабилизирующей средой или берут пробу тампоном, помещая его затем во флакон со средой.

КОЖНЫЕ ПОРАЖЕНИЯ.

Исследованию подвергают поврежденные участки (везикулярная жидкость, корочки, кусочки опухоли и т.п.).

ТРУПНЫЙ МАТЕРИАЛ.

Желательно брать как можно скорее, так как содержание вируса в тканях после смерти резко снижается в результате их аутолиза, вызванного размножением бактерий. Образцы для выделения виру­са берут, соблюдая правила асептики, одновременно помещая их в формалин для выполнения гистологических исследований.

ТРАНСПОРТИРОВКА.

Доставка проб в лабораторию должна осу­ществляться в максимально короткий срок, так как содержание вируса в отсутствие живых клеток быстро снижается. Повторное замораживание и оттаивание губительны для ряда вирусов (особенно возбудителей респираторных вирусных инфекций), поэтому при транспортировании образцы помещают в контейнеры с температурой 2-4⁰ С. Если время доставки превышает 30-40 мин и пробы не могут быть тотчас исследованы, материал замораживают при -80°С в сухом льду или помещают в жидкий азот при –180⁰ С.

а	б
Рис. 1. Стафилококк - Staphylococcus aureus. а –мазок из исследуемого материала, б - мазок из чистой культуры. Окраска по Граму. Скопления кокков в виде гроздьев винограда. х900

а	б
Рис. 2. Стрептококк (Streptococcus pyogenes). а –мазок из исследуемого материала, б - мазок из чистой культуры.Окраска по Граму. Грамположительные кокки, расположенные в виде цепочек. х900

Схема 3. Микробиологическая диагностика анаэробных инфекций