Последовательность действий

• Наденьте перчатки.
• Под локоть пациента положите клеенку.
• На нижнюю треть плеча на защищенную тканью кожу наложите жгут, пережимающий вены, петля которого должна быть расположена на задней, а концы на передней поверхности плеча.
• Попросите сжать кулак.
• Стерильной салфеткой, смоченной спиртом, дважды обработайте кожу в области локтевого сгиба.
• Жгут снимите, попросите разжать кулак.

Произведите пункцию вены и наберите необходимое количество крови в подставленную под иглу пробирку или вакуумную систему. Иглу удалите из вены, предварительно положив на место пункции смоченную спиртом стерильную салфетку.

Получение сыворотки крови:

1.В чистую химическую или центрифужную пробирку набирают кровь взятую из локтевой вены, без антикоагулянта.

2.Отстаивание крови, температура комнатная, время – до 30мин(Термостат t=37, 10 – 15мин).

3.Центрифугирование 1000об/мин до 10мин.

4.Отсасывание в чистую пробирку сыворотки.

Для хранения сыворотку разливают по 2г и замораживают.

Завдання № 59

Як готують лабораторних тварин до досліду?Які існують методи зараження лабораторних тварин?

Эталон ответа:

Перед началом эксперимента животных помечают металлическими ярлычками или краской, взвешивают, иногда термометрируют. Перед накожным или внутрикожным зараженим шерсть на месте введения материала удаляют выщипыванием или выбриванием.При работе с животными их фиксируют руками или применяют специальные приспособления (станки, столики).Для заражения животных используют стерильные инструменты.

Методы заражения лаб. животных

Подкожное, накожное,внутрикожное, внутримышечное, внутривенное, внутрибрюшное, пероральное,интраназальное,интрацеребральное,интраокулярное,перректальное.

Завдання № 60

Визначте плазмокоагулазну активність патогенного стафілокока.Яку кров слід використовувати для отримання плазми:дефібриновану чи цитратну?

Эталон ответа:

Основной фактор патогенности стафилокакка – плазмокоагуляция. Для ее выявления можно пользоваться и цельной кровью и плазмой. В плазму добавляется цитрат натрия (чтобы расщепить фибрин). Плазму разводят физ. раствором 1:3, 1:5 и наливают по 0,3 мл в пробирки. С плотной питательной среды петлей вносят исследуемый материал в плазму и перемешивают. Если культуру выращивают в бульене, тогда вливают 0,1 мл в плазму. Здесь важно поставить контроль заведомо “+ “и “- “ коагулазная активность, поставить не засеянную пробирку. Инкубацию проводят в термостате при t=30 С в течении суток. Учет поводят дважды, сначала через 2-3 часа, потом через 24 часа.

Завдання № 67

Что такое эритроцитарный диагностикум? В чем суть РНГА? Как оценивают

Результат?

Эталон ответа:

Это диагностикум,представляющий собой взвесь формалинизированных эритроцитов, сенсибилизированных каким-либо микробным антигеном.

Суть РНГА: эритроциты, если на их поверхности адсорбировать растворимый антиген, приобретают способность агглютинироваться, при взаимодействии с антителами к адсорбированному антителу.

Результат реакции учитывают по наличию гемагглютинации. Положительна, если титр гемагглютинации с опытными эритроцитами в 4 раза превышает титр гемагглютинации с контрольными эритроцитами. Обязателен контроль сенсибилизированных эритроцитов на отсутствие спонтанной агглютинации.

Завдання № 68

Провести микроскопию препарата и охарактеризовать морфологические и тинкториальные признаки M.tuberculosis. Дать характеристику препарата «Вакцина туберкулезная (БЦЖ)». Какая форма иммунитета формируется при введении этой вакцины?

Эталон ответа:

Имеет вид тонких изящных палочек, прямых или немного изогнутых, с утолщением на концах и содержат одно или несколько зерен Муха. Характеризуется полиморфизмом. Окраска по Цилю-Нильсону.

Вакцина БЦЖ (живая ослабленная) обязательного применения. Вводится на 5-7 день после рождения с ревакцинацией в 7, 11-12, 16-17, 22-23, 27-30.

Искусственная активная форма иммунитета.

Завдання № 69-70

На чем основывается серологический метод диагностики? Какие серологические реакции больше всего используют для ЛД бактериальных инфекций?

Эталон ответа:

Серологические реакции применяют при идентификации и количественной оценки Аг и Ат, либо идентификации Аг микроорганизма с помощью диагностических иммунных сывороток. РА, ПЦР, РГА, РСК, РИ.

Завдання № 72

При постановці розгорнутої реакції аглютинації (РА) з метою серологічної діагностики лептоспірозу сироватку розводили від 1:50 до 1:1600.

Визначити який титр сироватки, якщо в пробірці КС – прозора рідина, у КА – мутність, у 1-й і 2-й дослідних пробірках осад має оцінку на ++++, у 3-й і 4-й на +++, у 5-й - ++, у 6-й - +.

Эталон ответа:

+при наличии отчетливой агглютинации

++++ полная агглютинация-хлопья агглютинации при абсолютно прозрачной жидкости.

++ частичная агглютинация- хлопья различны, жидкость очень мутная.

+++ неполная агглютинация хлопья в слабоопалесционной жидкости

+ слабая, сомнительная- жидкость очень мутная, хлопья малоразличны.

РА состоит в том, что под влиянием иммунной сыворотки, содержат антитела происходит склеивание и выпадение в осадок микробов.

Задание № 79

Приготовить мазок из агаровой культуры Bacillussubtilis, зафиксировать и окрасить по методу Грама. Подготовьте микроскоп, рассмотрите препарат, определите форму и цвет бактериальных клеток.

Эталон ответа:

1. Приготовление мазка и его фиксация. Пробирку с культурой Bacillussubtilisдержат между указательным и большим пальцами левой руки. Бактериологическую петлю берут правой рукой и прожигают ее в пламени горелки. Вынимают пробку из пробирки. Прожигают пробку и горло пробирки в пламени горелки. Захватывают бактериальной петлей каплю исследуемого материала и наносят на предметное стекло равномерно распределяя по центру стекла. Закрывают пробирку пробкой над пламенем горелки. Прокаливают бактериальную петлю в пламени горелки. Мазок высушивают при комнатной температуре. После полного высыхания проводят фиксацию препарата в пламени горелки в течение 5-6 секунд.

2. Окраска по методу Грама:

1) На фиксированный мазок нанести полоску фильтровальной бумаги, пропитанной раствором генциановогофиолетового, и несколько капель воды, выдержать 2 минуты.

2) Снять пинцетом бумагу.Не промывая препарат водой, слить краситель и нанести несколько капель раствора Люголя на 2 минуты.

3) Слить раствор Люголя, погрузить мазок в стаканчик с 96˚ спиртом на 20-30 секунд.

4) Мазок тщательно промыть водой.

5) Нанести на препарат несколько капель фуксина Пфейффера на 2 минуты.

6) Смыть краситель водой.

7) Препарат высушить с помощью фильтровальной бумаги.

Микроскопируем с использованием иммерсионной системы светопольного микроскопа. В поле зрения видим окрашенные в сине-фиолетовый цвет (грамположительные) палочковидные клетки, имеющие на всей поверхности жгутики.

Задание № 80

Основным методом лабораторной диагностики СПИД является проведение реакции иммуноферментного анализа (ИФА). Принцип ее проведения.

Эталон ответа:

ИФА-высокочувствительный метод выявления антител к ВИЧ в сыворотке крови больного или носителя. Антитела появляются уже через 2 нед-3 мес., в ряде случаев через 6-9 мес. и даже через год после заражения. Принцип метода заключается в образовании комплекса антиген-антитело при наличии антител к ВИЧ-инфекции у обследуемого.

Для постановки реакции из набора берут полистироловый планшет, на поверхности лунок которого уже адсорбирован рекомбинатный антиген ВИЧ. Затем в 4 лунки ( А1, В1, С1,D1 ) вертикального ряда планшета вносят по 0,1 мл разведенной 1:100 положительной контрольной сыворотки. В следующие 4 лунки ( E1, F1, I1, H1 ) вносят по 0,1 мл разведенной 1:100 отрицательной контрольной сыворотки. В остальные лунки вносят по 0,1 мл разведенных 1:100 исследуемых сывороток. От каждого человека в 4 лунки соответственного вертикального ряда от 1-го А2, B2, C2, D2; от 2-го E2, F2,I2,H2 и т.д. Планшеты ставят в термостат и инкубируют 1 ч при 37˚С. После инкубации содержимое из лунок удаляют сильным встряхиванием и промывают трехкратно фосфатно-солевым буферным раствором. Затем вносят по 0,1 мл конъюгатаантивидовых иммуноглобулинов, меченных пероксидазой. Выдерживают в течение 1 ч или 30 мин при 37˚С. Планшет опять трехкратно промывают фосфатным буферным раствором. Вносят субстратную смесь ОФД-ортофенилендиамин 0,1 мл с 0,1 мл H2O2, оставляют при 20˚С в темноте. Производят учет реакции по изменению окраски ортофенилендиамина в желтый цвет в случае, если исследуемая сыворотка содержит антитела к рекомбинатному антигену ВИЧ. После 2 и 3 стадии промывка фосфатным буфером.

ИФА основан на использовании в качестве метки антител ферментов, способных разлагать субстрат с образованием окрашенных продуктов. Количество образовавшихся комплексов антиген-антитело-фермент соответствует интенсивности окрашивания субстрата. В качестве ферментов чаще всего используют пероксидазу, щелочную фосфатазу, а в качестве субстрата для пероксидазы- 5-аминосалициловую кислоту, ОДФ. В процессе инкубации в присутствии пероксидазы ОДФ окрашивается в желтый цвет, а аминосалициловаяксилота-в коричневый. Для остановки реакции расщепления субстрата в лунку добавляют по 0,1 мл 2М H2SO4 ( или 1 М NaOH ).

Результаты реакции учитывают визуально или на спектрофотометре. При визуальном учете выявляют то наибольшее разведение исследуемого материала, в котором окраска интенсивнее, чем в контроле (бычьим сывороточным альбумином).

Задание № 81

Дайте характеристику препарата «Сыворотка противодифтерийная». Как ее следует вводить, чтобы предотвратить развитие анафилактического шока?

Эталон ответа:

Противодифтерийная сыворотка (очищенная, концентрированная). Препарат готовят из сыворотки крови лошадей, гипериммунизированных дифтерийным анатоксиноми у которых впоследствии развился иммунитет к дифтерии (анатоксины-бактериальные токсины, обезвреженные путем специальной обработки, но сохранившие антигенные свойства). Сыворотку очищают и концентрируют.

По внешнему виду сыворотка прозрачная. Применяют для лечения дифтерии, вводят внутримышечно или подкожно в количестве 5000-50000 МЕ в зависимости от тяжести заболевания и возраста больных. Обычно сыворотку вводят в два этапа -начальное и повторное введение. Самое первое введение сыворотки производят по частям, чтобы избежать возникновения аллергических реакций на нее. Вначале вводят внутрикожноразведенную сыворотку в количестве 0,1мл -это является пробой на чувствительность. Если нет никаких аллергических проявлений, через полчаса подкожно вводят еще немного уже неразведенной сыворотки. Если и в этом случае нет реакции, то еще через полчаса внутримышечно вводят всю оставшуюся часть первоначальной лечебной дозы.

При появлении каких-либо побочных реакций при проведении внутри-кожной пробы сыворотку вводят частями по схеме, которая указана в прилагаемой к сыворотке инструкции.

Второе введение сыворотки при локализованной и распространенной дифтерии зева производят через сутки, если налеты уменьшаются слишком медленно. В случае развития токсической дифтерии зева сыворотку начинают вводить каждые 12 ч до появления выраженного улучшения состояния больного, т. е. когда уменьшаются интоксикация, отек слизистых оболочек зева, налеты и ближайшие лимфатические узлы. Весь курс лечения противодифтерийной сывороткой больной в этом случае получает за 2—2,5 суток.

Для больных дифтерией гортани доза сыворотки подбирается с учетом стадии заболевания. При наличии дифтерийного крупа доза сыворотки увеличивается.

Задание № 82

Приготовить препарат из чистой агаровой культуры грибов Candidaalbicans. Окрасить метиленовым синим. Провести микроскопию препарата и охарактеризовать морфологические признаки микроорганизмов.

Эталон ответа:

В связи с тем, что для заболевания кандидозом характерен полиморфизм клинических проявлений, лабораторному исследованию подлежит разнообразный патологический материал. В зависимости от характера и локализации поражения, для лабораторного анализа берут: мокроту, соскобы с кожи или слизистых оболочек, ногтевые чешуйки, кровь, ликвор, мочу, фекалии, пунктаты из закрытых полостей, отделяемое свищей, биопсированный и секционный материал.

1.Приготовление мазка и его фиксация. Пробирку с культурой Candidaalbicansдержат между указательным и большим пальцем левой руки. Бактериологическую петлю берут правой рукой и прожигают ее в пламени горелки. Не выпуская петли из правой руки, вынимают пробку из пробирки. Прожигают пробку и горло пробирки в пламени горелки. Захватывают бактериальной петлей каплю исследуемого материала, наносят ее на предметное стекло и равномерно распределяют по центру, делая мазок. Держа петлю с культурой, закрывают пробирку пробкой над пламенем горелки. Остатки культуры на петле сжигают в пламени горелки.

Мазок высушивают на воздухе при комнатной температуре. Далее мазок фиксируют в пламени горелки.

2.Окраска метиленовым синим. Наносят на фиксированный мазок несколько капель спиртово-водного раствора метиленового синего. Выдерживают 3-5 минут. Промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой.

Микроскопируют препарат с иммерсионной системой светопольного микроскопа. В поле зрения видим относительно большие, окрашенные в голубой цвет овальные или округлые клетки с наличием псевдомицелия-тонких удлиненных клеток, располагающихся друг за другом в виде нитей.

Задание № 83

Алгоритм бактериологического метода диагностики холеры. Какой материал используют для исследования? Какие питательные среды используют для выделения чистой культуры холерного вибриона? Методы идентификации холерного вибриона.

Эталон ответа:

Материалом для исследования служат испражнения, рвотные массы, секционный материал, а также вода, пищевые продукты.

1-й этап. Из патологического материала готовят мазки, фиксируют спиртом или смесью Никифорова, окрашивают по Грамуи микроскопируют.Из исследуемого материала готовят препарат «висячая капля» для обнаружения подвижного вибриона (фазово-контрастная микроскопия). Обнаружение в мазках большого количества изогнутых грамотрицательных палочек и подвижных вибрионов в «висячей капле» дает возможность дать предварительный положительный ответ.

Одновременно с бактериоскопией исследуемый материал засевают на жидкие и плотные питательные среды для выделения чистой культуры.В качестве жидких сред обогащения рекомендуется 1% щелочная пептонная вода, 1% пептонная вода с теллуритом калия, жидкая среда Монсура и др. В качестве плотных питательных сред используют щелочной МПА и одну из селективных питательных сред: среду Монсура, Аронсона и др. Посевы термостатируют при температуре 37˚ С.

2-й этап.Через 5-6 ч из пленки или поверхности среды делают мазок, окрашивают по Граму, определяют подвижность в препарате «висячая капля». Проводят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с О-холерной сывороткой (0-1), разведенной 1:100, или реакцию иммобилизации холерного вибриона О-холерной сывороткой, результат которой учитывают при фазово-контрастной микроскопии. Ограничение подвижности вибрионов и образование агглютината наступает в течение 1-2 мин. На основании полученных данных выдают второй предварительный результат, в котором отмечают подвижность вибриона и его отношение к агглютинирующей сыворотке. Материал из пленки пересевают в чашки с щелочным агаром или селективной средой и одновременно делают пересев вторично на 1 % пептонную воду, изменения в которой изучают спустя 5-6 ч.

3-й этап.Через 10-15 ч после посева изучают рост на второй среде накопления (пептонной воде), характер колоний на чашках. Проводят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с холерным вибрионом, выросшим на чашках с плотной средой, с О-холерной сывороткой, разведенной 1:100, и ориентировочную реакцию агглютинации с типовыми сыворотками Инаба и Огава в разведении 1:60 для определения серовара.

При положительной реакции и наличии характерных для холерного вибриона признаков выдают третий результат исследования.

Материал из колоний, давших положительную реакцию агглютинации, высевают на: полиуглеводную среду, бульон, лактозо-сахарозную среду Ресселя. С молодой 3-4 ч бульонной культурой проводят развернутую реакцию агглютинации.

4-й этап.Через 12-14 ч учитывают развернутую реакцию агглютинации, изучают характер роста на среде Ресселя. Идентифицируют выделенную чистую культуру по ферментативным свойствам на средах Гисса (отсутствие ферментации арабинозы), на мясо-пептонном желатине (воронкообразное разжижение) и нитрозоиндоловой пробе (розовое окрашивание вследствие появления нитрозоиндола пол влиянием холерного вибриона),по гемолитическим свойствам, по чувствительности к антибиотику полимиксину, по чувствительности к бактериофагу СМукерджи 4 типа и бактериофагу Эль-тор. БиоварVibrioet-torгемолизирует эритроциты, растет в присутствии полимиксина. БиоварVibriocholeraе не вызывает гемолиза эритроцитов, не растет в присутствии полимиксина, чувствителен к бактериофагу СМукерджи 4 типа.

Окончательное заключение о выделении и дифференцировании холерных вибрионов дают через 36-48 ч.

Задание № 84

Дайте характеристику препарата «Сыворотка противостолбнячная». Как ее следует вводить, чтобы предотвратить развитие анафилактического шока?

Эталон ответа:

Противостолбнячная сыворотка (очищенная, концентрированная) -получают из крови лошадей, гипериммунизированных столбнячным анатоксином и у которых впоследствии развился иммунитет к столбняку. Сыворотку очищают и концентрируют. Для профилактики вводят подкожно или внутримышечно 30000 МЕ, для лечения– 100000-200000 МЕ. В зависимости от тяжести заболевания введение сыворотки повторяют до исчезновения рефлекторных судорог.

Перед введением противостолбнячной сыворотки ставят внутрикожную пробу с сывороткой лошадиной очищенной разведенной 1:100 для выявления чувствительности к чужеродному белку. Для постановки проб используют шприцы с ценой деления 0.1 мл и тонкими иглами. Разведенную сыворотку вводят внутрикожно в сгибательную поверхность предплечья в объеме 0.1 мл. Учет реакции проводят через 20 мин.

Пробу считают отрицательной, если диаметр отека или покраснения, появляющегося на месте введения, менее 1 см. Пробу считают положительной, если отек или покраснение достигает в диаметре 1 см и более.

При отрицательной внутрикожной пробе противостолбнячную сыворотку вводят подкожно в количестве 0.1мл. При отсутствии реакции через 30 мин вводят всю назначенную дозу сыворотки подкожно (с профилактической целью), внутривенно или в спинномозговой канал (с лечебной целью).

При положительной внутрикожной пробе или при возникновении анафилактической реакции на подкожную инъекцию 0.1 мл противостолбнячной сыворотки дальнейшее ее введение противопоказано.

Задание № 85

При постановке реакции связывания комплемента (реакции Вассермана) для диагностики сифилиса в исследуемых пробирках наблюдали феномен гемолиза. как оценить результат этой реакции?

Эталон ответа:

Принцип РСК заключается в том, что реагины, находящиеся в сывороткекрови больных сифилисом, обладают свойством вступать в соединенеия сразличными антигенами. Образовавшиеся комплексы сортируют введенный вреакцию комплемент. Для индикации комплекса реагины – антиген – комплементиспользуется гемолитическая система (смесь эритроцитов барана сгемолитической сывороткой). При наличии комплекса эритроциты выпадают в осадок. Что заметно невооруженынм глазом. Выраженность гемолиза обозначается врачом ключами:резко положительная 4+, положительная 3+, слабоположительная 2+ ли 1+ иотрицательная. Кроме качественной оценки этих реакций имеется иколичественная, имеющая значение в диагностике некоторых стадий сифилиса ипри контроле за эффективностью терапии.

Задание № 86

Как готовят лабораторных животных к исследованию? какие существуют методы заражения лабораторных животных?

Эталон ответа:

Перед опытом животное клеймят, взвешивают, определяют, если нужно, его пол, возраст и измеряют температуру тела. Клеймение кроликов и морских свинок производят при помощи готовых металлических бирок с номерами или наложением тавра татуировочными щипцами.

1)Металлические номерки имеют заостренные концы, которыми и прокалывают ушную раковину животных с внутренней стороны; на выпуклой стороне уха концы номерков загибаются. Мышей и крыс метят надрезом ушей или же окрашиванием различных частей тела животного насыщенным раствором пикриновой кислоты.

Взвешивание животных производят, смотря по их величине, или в ящике на обычных столовых весах (Беранже ).

2)В зависимости от цели исследования пользуются различными способами заражения: внутрикожным, подкожным, внутримышечным, внутрибрюшинным, внутривенным, перо-ральным или интраназальным. При перечисленных способах, за исключением перорального и интраназалыюго, заражение осуществляется с помощью шприца.

Задание № 87

На чем основывается серологический метод диагностики? какие серологические реакции больше всего используют для лабораторной диагностики бактериальных инфекций?

Эталон ответа:

Серологические реакции основываются на обнаружение с диагностической целью антител в сыворотке крови обследуемого.Установление родовой и видовой принадлежности микроорганизма или вируса. В этом случае неизвестным компонентом реакции является антиген. Такое исследование требует постановки реакции с заведомо известными иммунными сыворотками.

В настоящее время для серологической диагностики бактериальных инфекций применяют более чувствительные методы, когда антиген бактерий сорбируют на поверхности эритроцитов . Таким образом, были разработаны принципиально новые серологические реакции: прямой (РПГА) и непрямой гемагглютинации (РИГА). Они широко применяются для серологической диагностики многих бактериальных, вирусных и других инфекций. Сохраняет свое диагностическое значение реакция преципитации при некоторых заболеваниях . В серодиагностике особенно широко в настоящее время применяется реакция связывание комплемента (РСК).

Задание № 88

Приготовьте питательную среду кровяной агар (КА). Какие свойства микроорганизмов можно определить при условии их культивирования на КА.

Эталон ответа:

Расплавляют 1л 2% мясо-пептонного стерильного агара, охлаждают его до температуры +45С и прибавляют 5-10мл дефибринированной стерильно взятой крови лошади, кролика или барана. Добавление крови производят, соблюдая правила стерильности. Готовую среду разливают в стерильные чашки Петри (предварительно нагретые в термостате), дают ей застыть и подсушивают в термостате. Слой агара должен быть равномерно окрашен в красный цвет.

Среда содержит кровь, что позволяет определить тип гемолиза – один из основных ориентировочных тестов при идентификации бактерий.

a-гемолиз, зеленоватый ореол вокруг колонии.

b-гемолиз, зона лизиса вокруг или под колонией.

Кровяной агар можно также использовать для пересева (поддержания) культур и выделения чистой культуры.

Завдання № 89

Алгоритм лабораторної діагностики кандидозної інфекцій.Які методи застосовують для дослідження?Які живильні середовища використовують для виділення чистої культури грибів роду Candida?

Эталон ответа:

Дрожжеподобные грибы рода Candida относяться к несовершенным грибам-дейтеромицетам и составляют самостоятельный род.

Материалом для исследования служат:кожные и ногтевые чешуйки,отделяемое пораженных участков слизистых оболочек,гной,кал,моча,кровь,СМЖ.В диагностике выделяют два основных метода:микроскопический и микологический.Применяют также серологический,аллергический и биологический методы.Микроскопический метод:в патологическом материале выявляют морфологические элементы гриба-дрожжевые клетки,псевдомицелий,мицелий.

Для микроскопии используют препараты:

1Нативные(не окрашенные);

2 Окрашенные(по Грамму,Бури-Гинса)

Нативные препараты готовят из пораженных волос,соскобов с ногтей,чешуек кожи.Для микроскопирования необходима полная прозрачность препарата.Поэтому материал,взятий для исследования,помещают на предметном стекле в 2-3 капли 10-20% раствора едкой щелочи(КОН или NaOH),осторожно подогревают на пламени,не доводя до кипения,в течении 1 мин или оставляют на 15-20 мин до полного просветления.

Все жидкие прозрачные экскреты(мочу,СМЖ) предварительно центрифугируют ,сливают надосадочную жидкость,а 2-3 капли осадка помещают на предметное стекло и покрывают покровным.

Окрашенные препараты готовят,как правило,из материала,имеющего вязкую или жидкую консистенцию.В окрашенном материале легче выявить элементы гриба,чем в нативном.Чаще всего используют следующие методы окраски:метиленовым синим,по Грамму,Цилю-Нильсену,Романовскому-Гимза. Candida по Грамму окрашиваються в темно-фиолетовый цвет.

Когда микроскопия не дает ясного результата,используют микологический метод.Микологическое исследование направлено на выделение чистой культуры гриба.Посевы производят на плотные и жидкие питательные среды:Сабуро,кукурузный,рисовый,картофельный агар,агар Чапека-Докса.Культивирование осуществляют при темпер. 22-28 .На плотных питательных средах грибы рода Candida образуют довольно крупные,напоминающие сметану колонии молочно-белого цвета,вначале гладкие,влажные,позднее более выпуклые.

Завдання №90

У хворого з підозрою на менінгіт взяли на бактеріологічне дослідження спинномозкову рідину.Як провести дослідження щодо визначення чутливості мікроорганізмів,які містяться в спинномозковій рідині традиційними методами в найкоротший термін.

Эталон ответа:

Выделенную чистую культуру идентифицируют по морфологическим,культуральным,биохимическим и антигенным свойствам.

Менингококки представляют собой парные кокки бобовыдной формы(в мазке напоминают кофейные зерна),они неподвижные,спор и капсул не образуют.Аэробы или факультативные анаэробы.На обычных питательных средах не растут,используют те,которые содержат сыворотку или СМЖ человека. На плотных средах образуют нежные прозрачные колонии,на сывороточном бульоне- муть и осадок,через 3-4 дня на поверхности среды образуеться пленка.

Ферментативная активность у менингококков выражена крайне слабо,они разлогают глюкозу и мальтозу до кислоты,обладают оксидазной активностью.

Антигенная структура.В антигенной структуре выделяют три фракции:углеводную,общею для всех менигококков;протеиновую,общею с гонококками и пневмококками;полисахаридную,специфическую.

Задание №91

Алгоритм лабораторной диагностики стрептококковых инфекций. Какие методы применяются для исследования? Какие питательные среды используются для выделения чистой культуры стрептококков?

Эталон ответа:

Материал для исследования – спинномозговая жидкость, кровь, смыв с носоглотки, мокрота, гнойное отделяемое, моча, испражнения. Используют бактериоскопический, бактериологический и серологический методы исследования.

Алгоритм:

На первом этапе – микроскопия мазков из патологического материала. Проводят посев на кровяной агар с неомицином (А и В), селективный бульон с нолидиксовой кислотой и гентамицином (рода Агалактио), желточно-экскулированный (для стрептококков bovis)

Второй этап – на плотной питательной среде изучают культуральные свойства, рост колоний, размеры. Устанавливают пренадлежность к типу гемолиза.

Третий этап – Проверка чистоты культуры. Проба на каталазу, на токсичность, чувствительность к антибиотикам, к бацитроцину (патогенный стрептококк чувствителен) Рост в бульоне с 6,5% NaCl – пиогенный не растет, растет Agalactio. Камптест при взаимодействии с b-лизином золотистого стафилококка, продуцируемый экстрацелюлярный протеин. На чашку Петри с кровяным агаром середину засевают золотистым стафилококком, перпендикулярно засевают Streptococcus pyogenes в исследуемою культуру. Спустя 18 часов инкубации зоны гемолиза в местах пересечения золотистого стафилококка и Agalactio – в виде бабочки.

На простых питательных средах стрептококки не растут, требуют добавления глюкозы, сыворотки и крови, так как не способны синтезировать аминокислоты, пурины и витамины. На плотных питательных средах образуют мелкие, полупрозрачные, сероватые колонии; на жидких – наблюдается придонный рост с образованием хлопьевидного осадка без поверхностной пленки.

Задание №92

Как готовят лабораторных животных к исследованию? Какие существуют методы заражения лабораторных животных?

Эталон ответа:

Перед началом эксперимента животных помечают металлическими ярлыками или краской, взвешивают, иногда термометрируют. Перед накожным или внутрикожным способом заражения шерсть на месте введения материала удаляют выщипыванием, выбриванием или с помощью депилятора. При работе с животными их фиксируют руками или применяют специальные приспособления (станки, столики). Для заражения используют стерильные перчатки.

Методы заражения: подкожное заражение, накожное, внутрикожное, внутримышечное, внутривенное, внутрибрюшинное, заражение через пищеварительный тракт (пероральное), заражение через нос (интраназальное), внутричерепное (интрацеребральное), заражение через глаз (интраокулярное), и через прямую кишку (перректальное).

Задание №93

Как проводят взятие крови на серологическое исследование? Как получают нативную сыворотку? Как ее сохраняют?

Эталон ответа:

Кровь берут из вены, натощак.

Сы́воротка кро́ви — плазма крови, лишённая фибриногена. Сыворотки получают либо путём естественного свёртывания плазмы (нативные сыворотки), либо осаждением фибриногена ионами кальция. В сыворотках сохранена большая часть антител, а за счёт отсутствия фибриногена резко увеличивается стабильность.

Хранение при температуре +4+10 градусов.

Задание № 94

Проведите посев материала на среду Китта-Тароцци. Как создают анаэробные условия в среде Китта-Тароцци?

Эталон ответа:

Метод Цейсслера применяется для выделения чистых культур спорообразующих анаэробов. Для этого производят посев на среду Китт-Тароцци, прогревают 20 мин при 80 °C (для уничтожения вегетативной формы), заливают среду вазелиновым маслом и инкубируют 24 ч в термостате. Затем производят посев на сахарно-кровяной агар для получения чистых культур. После 24-часового культивирования интересующие колонии изучаются — их пересеивают на среду Китт-Тароцци (с последующим контролем чистоты выделенной культуры).

Среда Китта — Тароцци состоит из мясопептонного бульона, 0,5% глюкозы и кусочков печени или мясного фарша для поглощения кислорода из среды. Перед посевом среду прогревают на кипящей водяной бане в течение 20 — 30 минут для удаления воздуха из среды. После посева питательную среду сразу заливают слоем парафина или вазелинового масла для изоляции от доступа кислорода.

Используется для определения типа вируса гриппа (A или В) методом реакции торможения гемагглютинации;

Снижение титров противогриппозного антигемагглютинина в 4 и более раз в порции сыворотки, в которой предварительно разрушали иммуноглобулин, свидетельствует об их наличии в исследуемой сыворотке, что лабораторно подтверждает диагноз гриппа.

Завдання № 97

Які методи застосовують для лабораторної діагностики менінгококової інфекції?Який матеріал використовується?Які живильні середовища використовуються для виділення чистої культури Neisseria meningitides?

Эталон ответа:

Для диагностики менингококковых инфекций используют:бактериоскопический,бактериологический и серологический.

Бактериоскопический метод.В качестве материала для исследования берут смыв с носоглотки,СМЖ.Из исследуемого материала готовят мазки,окрашивают по Граму и микроскопируют.Предварительный диагноз основываеться на выявлении грамотрицательных бобовидных кокков,распологающихся попарно вогнутыми сторонами друг к другу,напоминая вид кофейных зерен.

Бактериологический метод.Проводят посев исследуемого материала(ликвор,кровь,смыв носоглотки) на специальные среды,содержащие кровь или сыворотку человека.На плотных средах образуют нежные прозрачные колонии,на сывороточном бульоне- муть и осадок,через 3-4 дня на поверхности среды образуеться пленка.

Задание № 99

Як визначають гемолітичну активність мікроорганізмів?Визначте гемолітичні властивості стрептокока на кров’яному агарі.

Эталон ответа:

Гемолитическую активность микроорганизмов определяют по картине гемолиза на кровяном агаре. Наблюдают наличие лизиса эритроцитов или его отсутствие. Определение гемолитических свойств стрептококка делят на три группы. Бета-гемолитические стрептококки вызывают полный лизис эритроцитов, наблюдаемый в виде полного просветления среды вокруг колонии. Альфа-гемолитические или “зеленящие” стрептококки вызывают частичный гемолиз и образуют колонии, окруженные зоной зеленоватого оттенка, что обусловлено превращением гемоглобина в метгемоглобин. Третью группу составляют гамма-стрептококки, не вызывающие гемолиза на кровяном агаре.

Задание № 100

Провести зараження курячого ембріону матеріалом, одержаним від хворого на грип. Пояснити спосіб одержання вірусутримуючого матеріалу для підтвердження діагнозу захворювання на грип.

Эталон ответа:

Патологический материал полученный от больного и предварительно обработанный вводят в амниотическую полость 10-11-дневных эмбрионов, либо в аллантоисную полость, желточный мешок и инкубируют три дня при t=35C. В качестве вируссодержащего материала можно использовать содержимое желточного мешка, аллантоисную и амниотическую жидкости либо весь эмбрион, нарезанный вместе с окружающими тканями на кусочки. Для выявления характерных поражений на хорион-аллантоисной мембране удаляют скорлупу и наружную оболочку. Затем мембрану извлекают и помещают в стерильную воду. Характер поражений изучают на тёмном фоне. После вскрытия эмбрионов проводят индикацию вируса, т.е. определяют его наличие в аллантоисной и амниотической жидкостях в реакции гемагглютинации.