Микробиологическое исследование воды
В воде различных источников водоснабжения содержится значительное количество микроорганизмов. Наряду с постоянными обитателями – микробами-сапрофитами – в загрязненной воде могут длительно выживать и размножаться различные патогенные микроорганизмы, особенно возбудители кишечных заболеваний – тифа, паратифа, дизентерии, холеры и т.д.
В связи с этим вода хозяйственно-питьевого назначения подлежит строгому санитарно-микробиологическому контролю. Санитарно-микробиологический кон- троль воды на пищевых предприятиях проводят согласно графику, один-два раза в месяц, определяя при этом:
1) микробное число – общее количество микроорганизмов в 1 см3 воды;
2) количество санитарно-показательных микроорганизмов – кишечных палочек (Escherichia coli), которые являются прямым показателем фекального загрязнения воды и косвенным санитано-бактериологическим показателем возможности загрязнения ее патогенными микробами. Результаты определения количества кишечных палочек в воде выражают в виде коли-титра и коли-индекса.
Коли-титр – это наименьший объем воды, в котором обнаруживается одна кишечная палочка (выражается в см3).
Коли-индекс – это количество кишечных палочек, содержащихся в 1000 см3 воды.
К питьевой воде, прошедшей очистку, предъявляются следующие санитарно-микробиологические требования: микробное число должно быть не более 100 микробных клеток; коли-титр – не менее 300 см3; коли-индекс – не более трех кишечных палочек.
Пересчет коли-титра по коли-индексу и наоборот производят по следующим формулам:
1000 1000
коли-индекс = ¾¾¾¾¾; коли-титр = ¾¾¾¾¾ .
коли-титр коли-индекс
6.2.1 Определение микробного числа
При исследовании водопроводной воды стерильными градуированными пипетками отбирают 1см3 неразведенной воды, вносят в две параллельные чашки Петри и заливают расплавленным и охлажденным до 45-50оС МПА, быстро перемешивают, вращая чашку по поверхности стола. После застывания среды чашки переворачивают крышками вниз, делают на дне крышки надписи, указывающие номер или название пробы, разведение, дату посева. Посевы культивируют в термостате при 37оС в течение 24-48ч, а затем подсчитывают выросшие колонии с помощью лупы, учитывая в случае надобности посеянный объем или разведение.
За окончательный результат принимают среднее арифметическое число, полученное при подсчете колоний на двух параллельных чашках одного из разведений.
6.2.2 Определение бактерий группы кишечной палочки –
показателей фекального загрязнения воды (коли-титра, коли-индекса)
Бактерии группы кишечной палочки (БГКП) в зависимости от качества воды определяют двумя методами:
а) метод мембранных фильтров (исследуют прозрачную воду – центральных водопроводов, артезианских скважин);
б) метод бродильных проб (исследуют воду, содержащую коллоидные вещества, посторонние примеси, затрудняющие фильтрование, - воду открытых водоемов, питьевую воду на этапах очистки).
6.2.2.1 Метод мембранных фильтров
Сущность метода мембранных фильтров заключается в концентрации бактерий из определенного объема воды на специальных ультрафильтрах – пористых нитроцеллюлозных пленках, подращивание их на среде Эндо (фуксин-сульфитном агаре) в течение 24 часов при 37 оС, дифференцировании выросших колоний и последующим подсчетом количества БГКП в 1000 см3 воды. Результат выражают в виде коли-индекса.
При наличии на фильтрах колоний, типичных для БГКП (темно-красных, с металлическим блеском и без него), из нескольких колоний готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При обнаружении в мазках грамотрицательных коротких полиморфных палочек ставят оксидазный тест для дифференциации БГКП от водных сапрофитов, имеющих сходную морфологию. В отличие от кишечной палочки рода Escherichia, они обладают ферментом оксидазой и окисляют фенилендиаминовые соединения до индофенола ярко-синего цвета (оксидазоположительные микроорганизмы). БГКП не обладают этим ферментом и считается оксидазоотрицательными.
Материал из колоний, выросших на среде Эндо, снимают бактериологической петлей и наносят на фильтровальную бумагу, пропитанную реактивом с фенилендиаминовым соединением. При положительном оксидазном тесте бумага синеет, что свидетельствует о наличии в воде бактерий, относящихся к семейству Pseudomonadaceae, которые при анализе не учитываются. Отсутствие изменения цвета бумаги в месте нанесения бактериальной массы свидетельствует о присутствии в воде оксидазоотрицательных БГКП, по которым и рассчитывают коли-титр и коли-индекс.
6.2.2.2 Метод бродильных проб
Сущность метода заключается в посеве определенных объемов анализируемой воды, подращиванием при температуре 37оС в средах накопления (глюкозо- или лактозопептонной средой с индикатором и поплавками для улавливания газообразования) с последующим высевом на среду Эндо, дифференцированием выросших колоний и определением наиболее вероятного числа БГКП в 1000 см3 воды по специальным таблицам.
При отсутствии роста на среде Эндо, а также при наличии пленчатых, рубчатых, с неровными краями и поверхностью и других не характерных для кишечных палочек колоний получают отрицательный результат.
Если при засеве из флаконов и пробирок, где отмечено помутнение, кислота и газообразование, на среду Эндо выросли темно-красные с металлическим блеском и без него колонии, то их принадлежность к БГКП подтверждается микроскопированием и постановкой оксидазного теста. Наличие в мазках грамотрицательных палочек и отрицательный оксидазный тест позволяет немедленно дать положительный ответ о наличии кишечной палочки в анализируемом объеме воды.