Реакция агглютинации (РА): определение, компоненты, механизм, методика постановки, практическое применение.

Определение: специфическое взаимодействие антигенов и антител, выражающееся в склеивании антигена (агглютиногена) под воздействием антител (агглютининов) сыворотки и выпадении их в осадок (агглютинат) в присутствии электролита.

РА была первой серологической реакцией, открыта в конце ХIХ века (Грубер, Дурхам, 1897г.). в дальнейшем были разработаны различные варианты и модификации РА, многие из которых получили широкое распространение в бактериологических лабораториях.

Компоненты:

1. Агглютиноген – корпускулярный (взвесь живых или убитых организмов, диагностикум).

2. Агглютинины – специфические антитела сыворотки (диагностической или исследуемой).

3. Электролит – физ. раствор.

Диагностические сыворотки, содержащие агглютинины, называют агглютинирующими.

Агглютинирующие диагностические сыворотки получают путем иммунизации животных (кроликов, ослов, лошадей, баранов) полноценными в антигенном отношении штаммами соответствующих видов микробов.

Они могут быть адсорбированными и неадсорбированными. Адсорбция (истощение) применяется для получения более узкоспецифичных сывороток (поли - и монорецепторных) по методу итальянского ученого Кастеллани. Сущность ее заключается в том, что при насыщении иммунной сыворотки гомологической культурой бактерий на них адсорбируются как специфические, так и групповые агглютинины, тогда как насыщение сыворотки гетерологическим штаммом делает возможным удаление из нее групповых и сохранение специфических антител.

Титр агглютинирующей сыворотки – наибольшее ее разведение, при котором еще возможен феномен агглютинации.

Механизм реакции.

Реакция протекает в 2 фазы:

В 1 фазе происходит специфическая адсорбция антител на поверхности клетки или частицы, несущей соответствующие антигены.

Во 2 фазе происходит образование агглютината и выпадение его в осадок в присутствии электролита (р-р NaCl).

Механизм РА описывается теорией «решетки», согласно которой агглютинат образуется при соединении одного активного центра 2-х валентного антитела с детерминантной группой одного антигена, а второго активного центра – с детерминантной группой второго антигена.

Характер и скорость реакции во многом зависит от антигенного строения бактериальной клетки.

Существует:

Ø Мелкозернистая агглютинация (О-агглютинация) у безжгутиковых бактерий она протекает медленно;

Ø Крупнохлопчатая (Н-агглютинация) у бактерий, имеющих жгутики, протекает быстро.

Методики постановки:

1. Реакция агглютинации на стекле;

2. Развернутая реакция агглютинации в пробирках.

РА на стекле применяется чаще как ориентировочная и, в основном, для сероидентификации выделенной культуры при бактериологическом методе диагностики.

Компоненты:

1. корпускулярные антигены, выделенные из исследуемого материала;

2. диагностическая специфическая агглютинирующая сыворотка;

3. физ. раствор.

Реакция ставится на стекле, оценивается через 2-3 минуты по появлению хлопьев или зерен агглютинина в прозрачной жидкости. Для исключения ложноположительных результатов всегда ставят контрольную реакцию с изотоническим раствором.

Развернутая РА в пробирках(синонимы: классическая, пробирочная, линейная, объемная) применяется в основном, для серодиагностики и определения титра антител в исследуемой сыворотке.

Компоненты:

1. диагностикум;

2. сыворотка больного;

3. физ. раствор.

Учет результатов проводится через 2 часа стояния пробирок при 37˚С и через 18-20 часов стояния при комнатной температуре. Результаты учитываются по четырехкрестной системе:

+ + + + - полная агглютинация (хлопья агглютината в абсолютно прозрачной жидкости);

+ + + - неполная агглютинация (хлопья в слабоопалесцирующей жидкости);

+ + - частичная агглютинация (хлопья резко различимы, жидкость слегка мутная);

+ - слабая агглютинация (жидкость очень мутная, хлопьев почти нет);

– - отсутствие агглютинации (жидкость равномерно мутная).

Достоинства РА:

Простота постановки, доступность.

Недостатки РА:

– недостаточная специфичность и чувствительность;

– субъективизм в оценке титра.

Практическое применение:

1. для сероидентификации многих патогенных микроорганизмов;

2. для серодиагностики инфекционных заболеваний бактериальной этиологии, например, для брюшного тифа и паратифов (реакция Видаля), бруцеллеза (реакция Райта) и др.