Схема постановки реакции непрямой Vi-гемагглютинации

Разведение сыворотки Компоненты реакции, мл
1:10	1:20	1:40	1:80	1:160	Контроль сыворотки	Контроль антигена
Физ. раствор	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	-	0,5
Сыворотка больного 1:5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5 0,5 мл. в дез. р-вор	0,5Ви сыворотки	-
Эритроцитарный диагностикум	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25

7. Изучение этапов ранней диагностики брюшного тифа (метод гемокультуры)(оформить в тетради протокол)

10–20 мл стерильно взятой из локтевой вены крови засевают на 100–200 мл 10% желчного бульона или среды Рапопорт. Среда Ра­попорт позволяет уже на второй день дифференцировать тифозные бак­терии от паратифозных. Паратифозные бактерии разлагают глюкозу, входящую в состав среды Рапопорт с образованием кислоты и газа, которые обнаруживают при помощи «поплавков». Тифозные бактерии разлагают глюкозу только до кислоты.

7.1. Изучить характер роста на 10% желчном бульоне, в который на­кануне была засеяна кровь больного. Позже описания посевов из фла­кона сделать высев петлей на среду Эндо. Посевы поместить в термо­стат на сутки.

7.2. Изучить посевы на среде Эндо, описать выросшие колонии. Из бесцветных круглых выпуклых прозрачных колоний сделать пересев на среду Олькеницкого штрихом по скошенной поверхности и уколом в глубину столбика. Посевы поместить в термостат на 18–20 часов.

7.3. Изучить посевы на среде Олькеницкого. Для дальнейшего исследования отобрать только те пробирки, в которых среда посинела в столбике (ферментация глюкозы). Пробирки, в которых вся среда посинела (ферментация лактозы или сахарозы) или стала оранжевой (ферментация мочевины) из исследования исключить. Культуры, ферментирующие глюкозу до кислоты и не ферментирующие лактозу и сахарозу, подозрительны на сальмонеллы тифа. Культуры, ферментирующие глюкозу до кислоты и газа и не фер­ментирующие лактозу и сахарозу,подозрительны на паратифозные бак­терии.

7.4. У подозрительных, как патогенные культуры, изучают антигенные свойства в реакции агглютинации с сальмонеллезными сыворотками.

а) для определения родовой принадлежности поставить реакцию агглютинации на стекле с поливалентной сальмонеллезной сывороткой АВСДЕ, содержащей антитела к антигенам наиболее часто встречающих­ся сальмонелл.

Для этого на предметное стекло нанести каплю сыворотки, рядом для контроля – каплю физиологического раствора. В обеих каплях, начиная с контрольной, размешать небольшое количество изучаемой культуры. Если в опытной капле наступает агглютинация, исследова­ние продолжить дальше;

б) определение серогруппы. Определение серогруппы проводят в реакции агглютинации на стекле с монорецепторными сыворотками 0–2, 0–4, 0–6, 0–9, содержащими антитела к групповым О-антигенам. Для постановки реакции на предметное стекло нанести по капле монорецепторных сывороток 0–2, 0–4, 0–6, 0–9 и каплю физиологического раствора для контроля. Во всех каплях размешать петлей небольшое количество изучаемой культуры, прожигая петлю после каждой сыворотки.

Если в одной из капель (отметить в какой) наступит реакция агглютинации, исследования продолжить дальше.

в) определение серовара. Определение серовара проводят по жгутиковому антигену в пер­вой фазе в пределах установленной серогруппы. На предметное стекло нанести каплю монорецепторной Н-сыворотки, для контроля – каплю физиологического раствора. В обеих кап­лях размешать немного культуры и наблюдать реакцию. Если реакция положительна, то по совокупности выявленных антигенов определить вид выделенной культуры по таблице и выдать ответ:

1. Если выделенная культура соответствует сальмонеллам по
биологическим и антигенным свойствам, выдать положительный ответ с указанием вида.

2. Если культура не агглютинируется ни видовыми, ни монорецепторными сыворотками, выдать отрицательный результат.

8. Изучение реакции Видаля(по выполненной работе оформить в тетради протокол)

Серодиагностика брюшного тифа может осуществляться через реакцию Видаля. Для постановки реакции Видаля получить сыворотку больного в основном разведении (1:50), из которого приготовить три ряда ра­бочих разведений от 1:100 до 1:800. В рабочие разведения первого ряда внести капли брюшнотифозного диагностикума, в рабочие разведения второго ряда внести по 2 капли паратифозного А диагностикума и в рабочие разведения третьего ряда внести по 2 капли паратифозного В диагностикума (см. схему постановки реакции Видаля, табл.8). Пробирки встряхнуть, поставить на 2 часа в термостат и до суток при комнатной температуре, после чего учесть результат (табл.9).

Результат: если агглютинация положительна, значит, в сыворотке есть антитела, а возбудителем считается тот микроорганизм, диагностикум из которого агглютинируется антителами сыворотки больного.

9. Знакомство с препаратами для специфической диагностики, профилактики и лечения брюшного тифа (записать в тетрадь)

Химическая сорбирования тифо-паратифозно-столбнячная вакцина (ТАВte) содержит выделенные из брюшнотифозной, паратифозных А и В бактерий, антигены и очищенный столбнячный анатоксин, адсорбированные на гидроокиси алюминия. Вакцина применяется для профилактики брюшного тифа, паратифов и столбняка лицам в возрасте от 15 до 50 лет, вводят ее строго подкожно.

Таблица 8