Самостоятельная работа студентов. 1. Микробиологический диагноз дизентерии

1. Микробиологический диагноз дизентерии.

А. Познакомиться с классификацией шигелл, а также со схемой исследования при дизентерии.

Б. Изучить характер роста шигелл на средах Левина, Плоскирева, Олькеницкого.

В. Знать ход исследования испражнений при диагностике дизентерии:

а) 1-й день – сделать посев на среды Левина и Плоскирева;

б) 2-й день – изучить посевы на чашках, отобрать изолированные колонии, посеять на среду Ресселя или Клиглера;

в) изучить биохимическую активность культуры на среде Ресселя;

г) поставить ориентировочные реакции агглютинации со специфическими монорецепторными дизентерийными сыворотками;

д) полученные данные занести в протокол.

2. Серологическая диагностика дизентерии:

а) изучить серологический метод исследования при дизентерии;

б) полученные данные занести в протокол.

Выполненную работу и полученные результаты оформить в виде протокола по схеме:

Дата	Что сделано	Результаты исследования
1-й день	Посев исследуемого материала
2-й день	Бактериологическое исследование Серологическое исследование
3-й день

Заключение:

ХОЛЕРА

Холера – это острая антропонозная карантинная кишечная инфекция. Высокая заразительность приводит к развитию эпидемии и пандемии. Для их предотвращения проводят специальные санэпидемиологические мероприятия, устанавливают особый режим в очаге. Для холеры характерен тяжелый обезвоживающий понос с испражнениями в виде рисового отвара и нарушением водно-солевого обмена.

Цель занятия: выработать навыки лабораторного анализа холеры.

Знать:

- основных возбудителей холеры;

- биологию возбудителей;

- эпидемиологию заболевания;

- лабораторную диагностику;

- профилактику и терапию заболевания.

Уметь:

- оценить полученные лабораторные данные.

Раздел	Вопросы для изучения
Биология возбудителя холеры	1. Таксономическое положение: Семейство Vibrionaceae, род Vibrio, вид V.cholera, V.eltor 2. Морфологические свойства: Изогнутые палочки в виде запятой, подвижные. 3. Тинкториальные свойства: Гр- палочки. 4. Тип дыхания: аэробы. 5. Элективные питательные среды: а) щелочной агар; б) щелочная пептонная вода; 6. Культуральные свойства. Рост на щелочном агаре через 12 часов в виде голубоватых колоний, рост в пептонной воде через 5 часов в виде пленки. 7. Биохимические свойства: Оксидаза +, глюкоза К, разжижает желатин, на средах триады Хейберга (маннит К, сахарозаК, арабиноза -) относится к 1 группе. 8. Антигенные свойства: Групповой 0-соматический, общий для вида – Н жгутиковый антиген. 9. Определение серогруппы по 0-антигену. Возбудитель относится к 01 серогруппе. 10. Серовары холерного вибриона: Инаба, Огава, Гикошима. 11. Биовары холеровибриона: а) классический; б) Эль-Тор. 12. Факторы вирулентности: Экзотоксин (холероген) вызывает нарушения водно-солевого обмена, цитотоксическое действие, вызывающее гибель эпителия тонкой кишки. Эндотоксин – угнетение фагоцитоза, понижение кровяного давления; инфекционно-токсические явления Пили – адгезия к клеткам слизистой Фибринолизин, гиалуронидаза – ферменты агрессии.
Эпидемио-логия, патогенез	Источник инфекции – больной человек, носитель и реконвалесцент. Пути заражения: водный, алиментарный, контактно-бытовой. Клинические варианты болезни: 1) энтерит; 2) гастроэнтерит; 3) алгид (полное обезвоживание).
Микробио-логическая диагнос- тика	Основные методы диагностики 1. Бактериологическое исследование в лаборатории особо опасных инфекций (36 часов). 2. Иммуноиндикация – РИФ. 3. Генетические методы ДНК – зондирование. 4. Серологическое исследование – р. агглютинации, лизиса – ретроспективная диагностика. При подозрении на холеру от больного берут фекалии и рвотные массы. Из объектов окружающей среды обследуют воду и остатки пищи. 1 этап – первичный посев в пептонную воду и на щелочной агар. 2 этап – просмотр роста в пептонной воде (через 8 часов). При наличии пленки – микроскопия мазка по Граму и фазово-контрастная микроскопия препарата «висячей капли» (для оценки подвижности). Ориентировочная реакция агглютинации с 01-холерной сывороткой – выдача ориентировочного ответа. Если роста нет – повторный высев в щелочную пептонную воду – просмотр посева на щелочном агаре (через 12 часов). Отбор подозрительных колоний, микроскопия мазка по Граму, тест на оксидазу, реакция агглютинации с 01-холерной сывороткой, накопление чистой культуры. Если нет роста на щелочном агаре и в пептонной воде после повторного пересева или отрицательная реакция агглютинации с 01-холерной сывороткой, выдается отрицательный ответ. 3 этап – проверка чистоты накопленной культуры, постановка биохимических тестов и пробы с фагами, полимиксином, тест на гемолизин. 4 этап – окончательный учет результатов, постановка реакции агглютинации с сыворотками Инаба, Огава. Выдача окончательного ответа.

Полная схема идентификации включает дополнительно тесты на определение биоваров: гемагглютинации, чувствительности к лимиксину, гемолиза по Грейгу, реакции Фогеса-Проскауэра. Для подтверждения принадлежности холерных вибрионов к серогруппе 0139 достаточно положительного результата в слайд-агглютинации.

Культуры, имеющие признаки вибрионов по морфологии, тесту на индофенолоксидазу и ферментативной активности на полиуглеводной среде, не агглютинирующиеся на стекле холерными сыворотками 01 и 0139 серогрупп, выделенные от больных острыми кишечными инфекциями, изучают по тестам, определяющим принадлежность к роду Vibrio и виду V. choleiae и в пробе с диагностическими фагами.

Через 36-48 ч от начала исследования учитывают результаты идентифи­кации и выдают окончательный ответ о выделении культуры холерного виб­риона соответствующей серогруппы.. На культуры, имеющие характерные для вибрионов морфологические и культуральные признаки, относящиеся к первой группе по Хейбергу (манноз а +, сахароз а +, арабиноз а -), агглютинирующиеся сывороткой серогруппы 01 и вариантспецифическими сыворотками (Инаба, Огава) не менее чем до ½ титра, лизирующихся и нелизирующихся холерным и эльтор-фагами, а также на культуры, агглютинирующиеся сывороткой 0139, выдают окончательный ответ. Для холерных вибрионов 01 серогруппы указы вают биовар на основании чувствительности к одному из диагностических фагов(эльтор или холеры) и (или) по дополнительным признакам для фагорезистентных культур. Культуры холерных вибрионов 01 и 0139 изуча­ют по гемолитической активности в пробе Грейга и чувствительности к антибиотикам, используемым в клинической практике для лечения холеры. Токсигенные штаммы холерных вибрионов 01 и 0139 серогрупп не лизируют эритроциты барана, в отличие от гемолизпозитивных нетоксигенных штаммов.