Насыщенный спиртовый раствор метиленового синего

Метиленовый синий 10 г

Спирт 96^° до 100 мл

Водно-спиртовый раствор метиленового синего

Насыщенный спиртовый раствор метиленового синего 10 мл

Дистиллированная вода 100 мл

Метиленовый щелочной синий Лёффлера

Насыщенный спиртовый раствор метиленового синего 30 мл

Едкий натр или едкое кали 1%-ный раствор I мл

Дистиллированная вода до 100 мл

З А Н Я Т И Е4

Дата ______________

Тема: Физиология бактерий. Питательные среды. Методы стерилизации и дезинфекции. Влияние на микробы физических и химических факторов. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний Выделение чистых культур бактерий: аэробов и анаэробов (1 день).

План занятия:

1. Питательные среды, применяемые для выращивания бактерий.

2. Знакомство с термостатами, их устройством, терморегуляцией. Знакомство с бактериологической посудой.

3. Методы стерилизации. Знакомство с устройством и работой сухожарового аппарата и автоклава.

4. Знакомство с характером роста бактерий на плотных и жидких питательных средах (культуры бактерий на МПА в чашках Петри и в пробирках, а также на МПБ).

5. Пигменты бактерий, демонстрация пигментных культур.

6. Изучение колоний бактерий на пластинках МПА.

7. Техника пересева бактериальных культур с пластинок МПА на косячок МПА, с косячков МПА на косячок и пластинки МПА с помощью бактериальной петли и шпателя.

8. Исследование смеси бактерий. Бактериоскопия смеси и посев ее на пластинки МПА для выделения изолированных колоний.

Методические указания

1. Питательные среды (ПС).По назначению делятся на: Универсальные среды – (мясопептонный агар - МПА, мясопептонный бульон - МПБ) – растут многие вида бактерий. Специальные среды – (кровяные, сахарные, сывороточные) – для культивирования бактерий, плохо растущих или не растущих на универсальных средах. Избирательные ( элективные) среды – (желчь, желчный бульон, пептонная вода, солевой агар) – хорошо растут (избирательно) лишь нужные виды бактерий, рост сопутствующих подавлен. Дифференциально-диагностические среда – (Эндо, Левина, Плоскирева и др.) – различные виды бактерий растут в виде окрашенных или неокрашенных колоний (дифференциация по внешнему виду колоний).

ПС по консистенции: жидкие, полужидкие, плотные (твёрдые).

ПС должны обязательно отвечать следующим требованиям: 1) они должны содержать все необходимые питательные вещества, витамины и соли; 2) иметь оптимальную рН; 3) обладать буферной ёмкостью; 4) иметь дос­таточную влажность (особенно плотные среды); 5) должны быть стерильными; 6) должны быть прозрачными (особенно жидкие ПС).

2. Демонстрация термостатов, бактериологической посуды.

3. Демонстрация сухожарового шкафа, автоклава. Разбор методов стерилизации и дезинфекции.

4-6. Обратить внимание на внешний вид культуры: муть, плен­ка, осадок (для жидких культур). Описать внешний вид колоний на пластинках МПА: размеры; края колонии (ровные, фестончатые, лопастные); поверхность колонии (влажная или сухая, гладкая или шероховатая, складчатая или ровная, плоская или выпуклая и т.д.); прозрачность колонии (прозрачная, полупрозрачная, непрозрачная); на­личие пигмента и цвет его; консистенция колонии (плотная, рыхлая, слизистая).

Из описанной колонии приготовить препарат-мазок, окрасить фуксином Пфейффера, зарисовать препарат и записать морфологию бактерий, а затем при помощи бактериальной петли сделать посев на косячок МПА. Для этого необходимо простерилизовать петлю, приподнять крышку чашки Петри и стерильной холодной петлёй прикоснуться к колонии. После этого в левую руку берется пробирка с косячком МПА (между большим и указательным пальцами) так, чтобы поверхность скошенного агара была перед глазами. Пробирка открывается над пламенем горелки, обжигается ее край, а затем петля вводится в пробирку до дна ее, где имеется небольшое количество конденсационной влаги. Плоской поверхностью петли прикасаются к поверхности косячка агара и делают посев штрихообразными движениями, постепенно продвигаясь снизу вверх. Обжигают на пламени спиртовки край пробирки и пробку и закрывают пробирку над пламенем спиртовки. На пробирке восковым карандашом (маркером) надписывают название культуры, дату посева, фамилию и группу студента и ставят посев до следующего занятия в термостат. Результаты работы оформляют в виде протокола по следующей форме.