Характеристика роста исследуемых культур

Признаки колоний	колония 1	колония 2
Макроскопические: прозрачность размер форма характер поверхности цвет
Микроскопические: характер края структура
Консистенция

Приготовление мазков из колоний, окраска по Граму

Колония 1

Колония 2

Оставшуюся часть колонии пересевают на скошенный агар для выделения чистой культуры. Посевы на сутки в термостат при 37°С.

Методика пересева из колоний на скошенный агар и МПБ

а) Пересев из колоний на скошенный агар

Приоткрывают крышку чашки, прокаленной остуженной петлей снимают часть отдельной колонии. Открывают пробирку со стерильным скошенным агаром, держа ее в левой руке в наклонном положении, так, чтобы можно было наблюдать поверхность среды. Переносят петлю с культурой в пробирку, не прикасаясь к стенкам, растирают по питательной среде, скользя по поверхности от одного края пробирки к другому, поднимая штрихи до верхушки среды – посев штрихом. Пробирку закрывают и, не выпуская из рук, подписывают название посеянного микроба и дату посева.

б) Пересев из колонии на мясо-пептонный бульон

Техника пересева на МПБ в основном такая же, как и при посеве на плотную среду. При посеве на МПБ петлю с находящимся на ней материалом погружают в среду. Если материал вязкий и с петли не снимается, его растирают на стенку сосуда, а затем смывают жидкой средой. Жидкий материал, набираемый стерильной пастеровской или градуированной пипеткой, вливают в питательную среду.

5. Подведение итогов занятия – 5 минут

ЗАНЯТИЕ 8

ТЕМА. Методы выделения чистых культур (продолжение). Ферментативная активность бактерий и методы ее изучения

Цель занятия. Ознакомить студентов с характеристикой бактериальных ферментов, использованием их для идентификации возбудителя, а также в практической деятельности человека

Методические указания к практической работе

Продолжительность занятия: 3 академических часа (135 минут)

Место проведения занятия: учебная аудитория

Материально-техническое оснащение – таблицы, стенды, микроскопы, микропрепараты

Хронометраж практического занятия:

1. Вводное слово преподавателя – 5 мин

2. Проверка исходного уровня знаний (тест-контроль) – 15 мин

3. Разбор теоретических вопросов по теме – 80 мин

a. Классификация ферментов, образуемых микробами: по химическому составу, по механизму действия, по месту действия

b. Роль ферментов в идентификации патогенных микробов

c. Изучение ферментов микробов:

- при посеве на среды Гисса;

- при посеве на желатину, молоко, свернутую сыворотку, пептонную воду;

- при посеве на «жировой» агар

d. Определение ферментов патогенных микробов (гемолизина, лецитиназы, плазмокоагулазы, фибринолизина)

e. Углеводы в средах «пестрого ряда»

f. Цвет углеводной среды с индикатором Андреде в случае ферментации углевода

g. Цвета углеводной среды с индикатором ВР, если бактерии потребляют углевод

h. Определение способности бактерий ферментировать углеводы с образование газа

i. Определение индола в среде

j. Определение уреазной активности бактерий

k. Определение способности бактерий образовывать Н₂S

4. Выполнение практической работы – 35 мин

Практическая работа

1. Изучение чистой культуры на скошенном агаре (продолжение протокола):

а) макро- и микроскопическое изучение чистой культуры;

б) пересев культуры на пестрый ряд.

Третий этап

Идентификация выделенной культуры. Идентификация микробов – определение систематического поло­жения выделенной из материала культуры до вида и варианта. Первым условием надежности идентификации является безусловная чистота культуры. Для идентификации микробов используют комплекс признаков: морфологические (форма, размеры, наличие жгутиков, капсулы, спор, взаим­ное расположение в мазке), тинкториальные (отношение к окраске по Граму или другим методам), химические (соотношение гуанина+цитозина вмолекуле ДНК), культуральные (питательные потребности, условия куль­тивирования, темп и характер роста на различных питательных средах), ферментативные (расщепление различных веществ с образованием про­межуточных и конечных продуктов), серологические (антигенная структура, специфичность), биологические (вирулентность для животных, токсигенность, аллергенность, влияние антибиотиков и др.).

Пробирки с посевами вынимают из термостата, изучают характер роста на скошенном агаре, убеждаются, что в пробирках получен рост одной культуры, отмечают характер налета по цвету, прозрачности.

Рост на скошенном агаре может быть сухим, влажным, ползучим, складчатым, пигментированным. Чтобы убедиться в чистоте культуры из культуры готовят мазок и окрашивают по Граму.

Пересев культуры на пестрый ряд

Для биохимической дифференциации изучают способность бактерий сбраживать углеводы с образованием промежуточных иконечных продуктов, способность разлагать белки и окислительно-восстановительные ферменты.

Для изучения сахаролитических ферментов выделенные культуры засевают в пробирки с полужидкими средами, содержащими лактозу, глюкозу. На полужидкие среды посев делают уколом в глубину среды. При посеве уколом пробирку со средой держат под наклоном, вынимают проб­ку, обжигают край пробирки. Материал забирают стерильной петлей и прокалывают ею столбик питательной среды почти до дна.

Для определения протеолитических ферментов выделенную культуру засевают на пептонную воду или МПБ. Для этого в руку берут про­бирку с посевом ближе к себе, а пробирку со средой - дальше от себя. Обе пробирки открывают одномоментно, захватив их пробки мизинцем и краем ладони, обжигают края пробирок, прокаленной охлажденной петлей захватывают немного культуры и переносят во вторую пробирку, растирают в жидкой среде на стенке пробирки и смывают ее средой.

При посевах и пересевах внимание должно быть обращено на соблюдение правил стерильности для того, чтобы не загрязнять свои посевы посторонней микрофлорой, а также не загрязнять окружающую среду. Пробирки маркируют и помещают в термостат 37^о для инкубирования на сутки.

2. Изучение пестрых рядов с посевом и без посева микробов (зарисовать)