Качественная и количественная характеристика микроорганизмов
воздуха в ____________________________________
(место взятия пробы)
| Состав микрофлоры воздуха | Рисунок препарата доминирующей формы микроорганизмов | Расчет степени загрязнения воздуха (клеток/ м3) |
| Всего выявлено колоний – из них: Грибы- Актиномицеты – Бактерии – в том числе цветные - | ____________________ ____________________ |
Заключение:
Определение чувствительности микроорганизмов
к антибиотикам
Цель– определить чувствительность выделенной чистой культуры микроорганизма к различным антибиотикам.
Задача. Освоить методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
Студенты работают бригадами.
Постановка опыта. Для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам часто используют метод диффузии антибиотика в агар с применением бумажных дисков. Для большинства антибиотиков содержание их в дисках колеблется от 1 до 50 мкг. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводится на мясопептонной среде.
Одну петлю чистой культуры микроорганизмов, выращенной на cкошенном агаре, внести в пробирку со стерильной водой. Перемешать, вращая пробирку между ладонями. Затем стерильной пипеткой нанести на поверхность МПА в чашке Петри каплю суспензии культуры и равномерно распределить ее шпателем по поверхности агара для получения равномерного и обильного роста бактериальной культуры – «газона»,
На поверхность засеянного агара стерильным пинцетом, соблюдая правила асептики, разложить бумажные диски (по 3-4 шт.), пропитанные различными антибиотиками.
Чашки поместить в термостат при 28оС на 16...18 ч. Во избежание размывания зон задержки роста микроорганизмов конденсационной водой, чашку следует поставить вверх донышком.
Результаты опыта. Измерить диаметр зон задержки роста микроорганизмов вокруг дисков с антибиотиками, включая диаметр самого диска. Мельчайшие единичные колонии и рост микроорганизмов в виде тонкой пленки внутри зоны задержки роста микроорганизмов не учитывать. Отсутствие зоны задержки роста указывает на то, что испытуемая культура устойчива к данному антибиотику. Зоны диаметром до 10 мм указывают на малую чувствительность, зоны диаметром более 10 мм – на чувствительность микроорганизма к исследуемым антибиотикам. Результаты измерений занести в таблицу 7.
Таблица 7
Влияние антибиотиков на рост микроорганизмов
| Исследуемые культуры | Зоны подавления роста чистых культур микроорганизмов антибиотиками, мм | |||||
Заключение об устойчивости исследуемых культур микроорганизмов к антибиотикам:
Физиолого-биохимические свойства выделенной чистой культуры. Образование внеклеточных ферментов
Выявление амилолитической активности
Теория вопроса:
Цель работы:выявить микроорганизмы-продуценты ферментов – гидролаз.
Задача: определить амилолитическую активность выделенной чистой культуры.
Постановка опыта.Крахмал подвергается гидролитическому расщеплению под действием амилаз, активными продуцентами которых являются различные виды бактерий из родов Bacillus, Clostridium, Pseudomonas, а также актиномицеты и мицелиальные грибы.
1. Для определения амилолитической активности выделенной чистой культуры используют питательную среду следующего состава (г/мл):
пептон – 1;
КH2PO4 – 0,5;
крахмал – 0,2;
агар – 1,5;
дистиллированная вода – 100 мл, pH 6,8–7,0
2. На поверхность питательной среды в чашку Петри параллельными штрихами произвести посев из пробирки с выделенной чистой культурой.
Чашки поместить в термостат при t 28оС. Во избежание размывания конденсационной водой зон задержки роста микроорганизмов, чашку следует поставить донышками вверх
Результаты опыта:Агаровую пластину обработать раствором Люголя. Для этого на поверхность среды налить 3–5 мл раствора Люголя. Среда, содержащая крахмал, окрасится в синий цвет, а зона гидролиза останется бесцветной или приобретёт красно-бурую окраску, если крахмал гидролизовался до декстринов. Зону гидролиза крахмала измерить (мм) от края штриха до границы светлой зоны. Чем больше диаметр светлой зоны, тем выше амилолитическая активность. Сделать вывод о способности микроорганизмов использовать крахмал в качестве источника углерода. Данные анализа занесите в табл. 8
Таблица 8