Молекулярно-биологические методы исследований
В КЛИНИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ
Цель занятия:изучить строение и свойства вирулентных и умеренных бактериофагов, их взаимодействие с бактериальной клеткой, освоить качественные и количественные методы определения фагов.
Изучить фенотипическую и генотипическую изменчивость микроорганизмов, познакомиться с классификацией мутаций бактерий, оценить последствия изменчивости для бактериальных клеток. Познакомиться с процессами обмена генетической информацией у бактерий; изучить явления трансформации, коньюгации и трансдукции в бактериальных клетках; оценить роль умеренного бактериофага в переносе генетической информации, определить роль внехромосомных генетических элементов для бактерий, познакомиться с молекулярно-генетическими исследованиями
План занятия
1. Строение и свойства бактериофага.
2. Вирулентные и умеренные фаги. Их отличия, типы взаимодействия с микробной клеткой.
3. Взаимодействие вирулентного фага с бактериальной клеткой.
4. Умеренный бактериофаг. Явление лизогении и фаговой конверсии.
5. Применение бактериофага в практической медицине.
6. Качественные и количественные методы определения фагов. Методы выделения фага из объектов окружающей среды.
7. Фаготипирование бактерий.
8. Организация генетического материала бактерий. Репликация ДНК. Генотип и фенотип.
9. Изменчивость микроорганизмов и ее виды.
10. Модификации у бактерий.
11. Мутации у бактерий. Отличие мутаций от других видов изменчивости микроорганизмов. Классификация мутаций по происхождению, молекулярным механизмам и последствиям для бактериальной клетки.
12. Практическое использование учения о мутациях.
13. Рекомбинация – обмен генетической информацией.
14. Трансформация, ее механизм, основные этапы.
15. Коньюгация. Роль полового фактора. F+, F־, Hfr-клетки.
16. Трансдукция, ее механизм. Роль умеренного бактериофага.
17. Внехромосомные генетические структуры: строение, классификация, функции (плазмиды, транспозаны, Is-последовательности).
18. Молекулярно-биологические методы исследований в клинической практике (ПЦР, иммуноблотинг и др.)
19. Медицинская биотехнология.
20. Генетическая инженерия. Препараты медицинского и ветеринарного назначения полеченные методом генной инженерии.
Оформление протокола лабораторного занятия (выполнить дома)
1.Нарисовать бактериофаги, виды б/фагов, взаимодействие с бактериальной клеткой (рис. 13.1, 13.2)
2.Записать методику постановки фаготипирования, титрования фага по Аппельману, Грациа, метод Отто (принцип) и оставить место для фото демонстрационного посева и записи учета результата; для записи учета результата титрования фага по Аппельману нарисовать таблицу 13.2
3.Вклеить или нарисовать рис 5.4 из учебника А.А. Воробьева отражающий процессы трансформации, трансдукции и конъюгации (на схемах имеются 2 ошибки, попробовать их определить!!!) стр. 111
4.Записать после схемы понятия:
- конъюгация;
- трансдукция;
- трансформация;
5.Кратко законспектировать методику ПЦР. Применение (См Атлас Воробьёва и доп. материал).
Задания для выполнения лабораторной работы.
1. Изучить демонстрационные посевы, зафиксировать их (сфотографировать или нарисовать).
2. По качественным методам сделать вывод. По количественному методу Аппельмана дать заключение.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЙ МАТЕРИАЛ
БАКТЕРИОФАГИ.
Рис 13.1 Взаимодействие бактериофага с оболочкой бактерии
Рис 13.2. Развитие умеренного фага