Методы индикации и идентификации вирусов

Методы индикации вирусов в к/к

1) Выявление ЦПД (цитопатического действия) – видимых морфологических дегенеративных изменений к/к: симпластобразование (симпласты – гигантские многоядерные клетки), образование в/к включений, трансформация клеток(безудержный рост).

2) Постановка РГА (реакции гемадсорбции) – к/к, зараженная вирусами, имеющими гемагглютинины (вирус гриппа и др.), приобретает способность адсорбировать Эр на своей поверхности.

3) Метод бляшек – окрашивание зараженной к/к «витальным» красителем. Зараженные клетки (нежизнеспособные) не окрашиваются.

4) Постановка цветной пробы.

(индикация вирусов после культивирования на курином эмбрионе и животныхпроводится с помощью РГА).

Идентификация вирусов в к/к

Проводится РН (реакция нейтрализации) с диагностическими сыворотками. Результат реакции оценивается по наличию ЦПД, методом бляшек, постановкой РТГА, цветной пробы.

(идентификация вирусов после культивирования на курином эмбрионе и животных проводится с помощью РН).

Методы диагностики вирусных инфекций

I. Вирусологический метод диагностики.

Конечной целью метода является идентификация вирусов до вида или серологического варианта. Вирусологический метод включает несколько этапов:

Отбор материала для исследования.

В зависимости от характера заболевания, материалом для исследования могут быть: 1) смывы с носовой части глотки и мазок из глотки; 2) спинномозговая жидкость; 3) кал и ректальные мазки; 4) кровь; 5) моча; 6) жидкость из серозных полостей; 7) мазок с конъюнктивы; 8) содержимое везикул; 8) секционный материал.

• материал берут непосредственно из очага инфекции или исследуют соответствующее отделяемое (гной, мочу, желчь и т.п.);

• количество материала должно быть достаточным для проведения исследования и его повторения в случае необходимости;

• материал берут по возможности в начальном периоде болезни, так как именно в этот период возбудители выделяются чаще, их больше, они имеют более типичную локализацию;

• материал берут до начала антимикробной химиотерапии или через определенный промежуток времени после приема антибактериального препарата, необходимый для его выведения из организма;

• следует предупредить возможность попадания в материал антимикробных препаратов (дезинфектанты, антисептики, антибиотики);

2. Обработка вируссодержащего материала. Проводится с целью освобождения материала от сопутствующей бактериальной микрофлоры. Для этого используются физические и химические методы. Физические методы: 1) фильтрование через различные бактериальные фильтры; 2) центрифугирование. Химические методы: 1) обработка материала эфиром в случаях выделения вирусов, не имеющих суперкапсида; 2) добавление к материалу смеси гептана и фреона; 3) внесение антибиотиков

3. Заражение материалом чувствительных живых систем. Поскольку вирусы являются облигатными внутриклеточными паразитами, для их размножения используют следующие живые системы: 1) лабораторные животные; 2) куриные эмбрионы; 3) культуры органов; 4) культуры тканей.

Индикация вирусов в живых системах.

Индикация вирусов – это обнаружение вирусов в исследуемом материале без установления их принадлежности к семейству, роду, виду или сероварианту.

5. Титрование выделенных вирусов -это обязательный этап вирусологического метода диагностики, целью которого является количественное определение содержания вирусных частиц в единице объема исследуемого материала.

6. Идентификация вирусов в иммунных реакциях. Идентификация, или титрование вирусов – это установление их вариантной, видовой, родовой и семейственной принадлежности. Идентификация вирусов проводится по принципу: определение неизвестного по известному. Известным компонентом при идентификации вирусов являются специфические противовирусные сыворотки (противогриппозные, противокоревые и др.), которые используют в серологических реакциях нейтрализации (РН), торможения гемадсорбции (РТГадс), торможения гемагглютинации (РТГА), РПГА, РСК, а также при ИФА и РИА. Эти сыворотки содержат специфические противовирусные антитела и называются диагностическими.

II. Вирусоскопический метод

1) Электронная микроскопия

Цель: детальное изучение строения вируса.

2) Световая микроскопия

Цель: а) обнаружения вирионов размером от 200 нм (серебрение по Морозову –

выявление телец Пашена – вирус натуральной оспы).

б) обнаружение включений:

- в цитоплазме (тельца Бабеша-Негри при бешенстве (окраска по Муромцеву), тельца Гварниери при натуральной оспе);

- в ядре.