Модификация окраски Грам—Муха

Мазок сначала окрашивают смесью из 3 частей карболового раствора фуксина с 1 частью мстилвиолета по Муху (см. выше), затем продолжают окраску по оригинальной прописи.

Микроскопическая картина: палочки—красного цвета, зерна—темно-фиолетовые.

Способ Нейссера

(для окраски метахроматических зерен—волютина).

Раствор А
Метиленовой синьки	0,1 г
Этилового спирта 95°	2 мл
Ледяной уксусной кислоты	5 мл
Дистиллированной воды	100 мл
Раствор Б
Кристаллвиолета	1 г
Этилового спирта 95°	10 мл
Дистиллированной воды	300 мл

Для окраски смешивают 2 части раствора А с 1 частью раствора Б.

Техника окраски. На фиксированный мазок наливают смесь растворов А и Б, через минуту краску сливают и мазок обрабатывают раствором Люголя в течение минуты, затем промывают водой, докрашивают в течение 2—3 минут раствором хризоидина (1 г краски в 300 мл дистиллированной горячей воды), промывают водой и высушивают.

Микроскопическая картина: зернистость—темно-синяя, тела бактерий—светло-желтые.

Метод Пью (окраска метахроматических зерен)

К 2 мл этилового спирта добавляют 0,2 г толуидиновой синьки, а затем 100 мл 5% раствора уксусной кислоты (5 мл ледяной уксусной кислоты + 95 мл воды). Раствор хорошо сохраняется. На фиксированный мазок наливают краску и нагревают 1—2 минуты, до появления паров. Дают остыть, смывают водой, высушивают и иссле­дуют. При микроскопии с искусственным освещением метахромазия заметна особенно резко.

Микроскопическая картина: тела палочек—синего цвета, метахроматические зерна—красновато-фиолетовые.

Модификация Саватеева

Приготовление красящих бумажек: 0,2 г толуидиновой синьки растирают в ступке с 5,8 г кристаллической лимонной кислоты (предварительно растертой в порошок) до получения равномерной синевато-сиреневой окраски всего порошка; затем, продолжая растирать, постепенно добавляют 10 мл дистиллированной воды; когда вся смесь растворится, прибавляют 1 мл чистого глицерина и, хорошо размешав смесь пестиком, добав­ляют еще 10 мл дистиллированной воды; содержимое выливают в чашку и смачивают им узкие полоски (5 см длиной) фильтровальной бумаги, высуши­вают их при комнатной температуре, режут и хранят в темноте.

Техника окраски. На фиксированный мазок наносят 8—10 капель воды, кладут бумажку и нагревают 1 минуту до появления паров, что повто­ряют 3—4 раза с добавлением воды. Дают мазку остыть, смывают водой бумажку с краской, сушат и исследуют. Результат тот же, что и при оригинальном методе Пью.

Окраска по Романовскому-Гимза

Лучше применять краску фабричного изготовления. Перед самой окраской готовят рабочий раствор из расчета 1 капля краски на 1 мл дистиллированной воды нейтральной реакции (испыта­ние воды см. ниже).

Разведенную краску наливают в чашку, на дно которой положены кусоч­ки предметного стекла (подставка). Мазок, фиксированный химически чистым метиловым спиртом, кладут намазанной стороной вниз на поверхность слоя краски, опирая концы препарата на кусочки стекла (подставки), и остав­ляют в таком положении от получаса до 2 часов, в зависимости от каче­ства краски, затем промывают водой и высушивают на воздухе в вертикаль­ном положении.

Указанный способ особенно хорош для окраски спирохет, биполяров и мазков крови.

Простой способ нейтрализации дистиллированной воды. В два химических стакана (колбы) наливают по 200 мл исследуемой воды и добавляют в каждый по 1—2 капли 1% раствора нейтральрота в дистиллированной воде (индикатор). При рН воды 5,4—5,5 (кислая реакция) получается свекловично-красная (рубиновая) окраска. Тогда в один из стаканов, тщательно размешивая, прибавляют по каплям 1% раствор угле­кислой соды до получения ясной разницы в окраске по сравнению с водой в другом (контрольном) стакане. Моментом нейтрализации считается появле­ние заметного оранжевого оттенка; если через 10—30 секунд цвет не изменится до первоначального—нейтрализация считается достигнутой. Нельзя добавлять соду до получения ясно оранжевого или, тем более, желтого цвета; в таких случаях вода окажется сильно щелочной. Зная, сколько капель раствора соды пошло на усреднение 200 мл исследуемой пробы, легко подсчитать, сколько надо взять капель для нейтрализации любого количества той же порции воды. Для окраски лучше применять воду рН 6,8 – 7,0.

Окраска капсул

Капсулы микробов состоят главным образом из полисахаридов и глюкопротеидов. Капсульными можно считать тех микробов, у которых капсула обнаруживается при окраске каким-либо методом на капсулы. Капсулы и слои слизи образуются некоторыми бактериями в специфических культуральных условиях. Луч­ше всего они видны во влажных препаратах, поскольку составляющие их сильно гидратированные коллоидные полимеры легко разрушаются и сокращаются в разме­рах при высушивании и фиксации. Самым простым и наиболее эффективным из трех методов окраски капсул, описанных ниже, является ме­тод Дюгида.