Определение размеров клеток.

Размеры микробных клеток варьируют в широких пределах: от сотых долей микрометров (1 мкм = 1·10^-3 мм) у некоторых бактерий до нескольких десятков и сотен микрометров у микроскопических простейших и водорослей.

Определение размеров клеток осуществляют с помощью винтового окуляр-микрометра, в котором имеется перекрестие и биштрих, перемещающийся вдоль шкалы с помощью градуированного барабана (рис. 7, 8).

Рис. 7 Шкала винтового окуляр-микрометра Рис. 8 Винтовой окуляр-микрометр

Для проведения измерений препарат помещают на предметный столик. Изображение объекта совмещают со шкалой окуляр-микрометра. Определяют размеры объекта, отсчитывая результаты измерений на барабане. Чтобы результаты были достоверными, измеряют обычно не менее 10-20 клеток. У кокков измеряют диаметр, у других форм – длину и поперечник.

Для измерения размеров объекта необходимо предварительно определить поправку на оптическую систему микроскопа – β. Определение ведется с помощью объект-микрометра, представляющего собой металлическую пластинку с отверстием в центре, в которое вставлено стекло. На стекло нанесена линейка длиной 1 мм, одно деление которой соответствует 0,01 мм или 10 мкм (микрон) (рис. 10).

Рис. 9 Объективный микрометр

Рис. 10 Определение цены деления

Для определения цены деления окулярной линейки на столик микроскопа вместо препарата помещают объект-микрометр (рис. 9) и определяют скольким делениям объект-микрометра соответствует определенное количество делений окуляр-микрометра. После этого определяют β по следующей формуле:

β = (t_к - t_н)/(n · 0,01)

где β –поправка на оптическую систему микроскопа, t_к и t_н – конечное и начальное значения измеряемой величины, n – количество делений объект-микрометра (10, 15, 20 и т. д.), 0,01 – цена деления объект-микрометр.

Для сухих объективов 8^х и 40^х значение β находится в пределах 9,45-9,60 и 46,5-47,0 соответственно.

Зная β, измеренные параметры изучаемого объекта (t_к и t_н), истинные размеры объекта определяют по формуле:

N = ((t_к - t_н)/β) · 1000,

где N –истинные размеры клетки, мкм, t_к и t_н – конечное и начальное значения измеряемой величины, β – поправка на оптическую систему микроскопа, 1000 – коэффициент перевода мм в мкм.

Задание:

1. Ознакомиться с устройством и работой окуляр-микрометра и объект-микрометра.

2. Для данного микроскопа, используя эти приборы, определить поправку на оптическую систему – β для сухих объективов 8^х и 40^х.

3. Определить характерные размеры изучаемой грибной культуры (диаметр гиф, спор и т.п.).

Дрожжи.

Дрожжи отличаются от бактерий относительно большими размерами, отсутствием подвижности и наличием дифференцированного ядра – типичные эукариоты. В фазе роста они представляют собой одноклеточные эукариотические организмы, вегетативно размножающиеся почкованием или делением. Вместе с тем известны дрожжи, которые в определенных условиях образуют мицелиальные структуры (псевдомицелий). Они широко распространенны в природе: встречаются в почве, на листьях, стеблях и плодах растений, в разнообразных пищевых субстратах растительного и животного происхождения.

Широкое использование дрожжей в промышленности основано на их способности вызывать спиртовое брожение. В практической деятельности человека они используются для получения вина, пива, хлеба, кваса, белка, аминокислот, витаминов, ферментов и др. продуктов.

Из аспорогенных (не образующих спор) наибольшее значение имеют роды Candida и Torulopsis. Многочисленные представители их широко распространены в природе, большинство не способно к спиртовому брожению, многие вызывают порчу пищевых продуктов. Дрожжи рода Torulopsis имеют клетки округлой или овальной формы, по размеру значительно мельче дрожжей рода Saccharomyces. Дрожжи рода Candida, клетки которых имеют вытянутую форму, способны к образованию примитивного мицелия (псевдомицелий), размножаются почкованием. Аэробы, многие из них не способны к спиртовому брожению. Среди аспорогенных дрожжей имеются окрашенные в желтый, розовый, красный цвета, что обусловлено наличием в клетках пигментов – каротиноидов. Некоторые из этих дрожжей (виды рода Rhodotorula) используют для получения каротиноидных препаратов, которые являются источником витамина А.

Задание:

1. Приготовить агаризованную ПС типа Сабуро (глюкоза – 4%, пептон – 1%, агар – 2%) для посева дрожжевых культур в чашки Петри и в пробирки на скошенную ПС (по 1 чашке Петри и 1 пробирке на каждого студента).

2. Приготовить для стерилизации чашки Петри, пробирки, закрыть их ватно-марлевыми пробками и простерилизовать.

4. Произвести посев штрихом дрожжевых культур на скошенную агаризованную среду и в чашки Петри.