Культуральные и морфологические признаки актиномицетов.

Актиномицеты (порядок Actinomycetales) - прокариотная группа одноклеточных микроорганизмов, имеющая некоторое сходство с грибами. Несмотря на морфологические отличия, актиномицеты отнесены к бактериям, так как для них характерно отсутствие ядерной мембраны, малый диаметр гиф, равный поперечнику бактериальной клетки, идентичная химическая природа клеточных стенок, бактериальный тип жгутиков у подвижных форм. Сходство с грибами проявляется в способности гиф ветвиться в виде мицелия и образовывать споры в гифах воздушного мицелия.

Ценным свойством актиномицетов является способность образовывать разнообразные биологически активные вещества, многие из которых имеют большое практическое значение. Актиномицеты способны продуцировать антибиотики, витамины, гормоны, ферменты, токсины, ростовые вещества, аминокислоты. Важную роль актиномицеты играют в процессах почвообразования, формировании плодородия почв и их оздоровлении.

Актиномицеты обнаруживаются в водоемах, на растительных и животных остатках, но больше всего в почве. В почве они участвую в превращениях широкого круга органических и минеральных веществ. Все актиномицеты условно делят на 2 группы: высшие; низшие.

К высшим относят актиномицеты со стойким мицелием, способных формировать в гифах споры. Среди высших актиномицетов нет патогенных форм. Они являются продуцентами антибиотиков. В отличие от бактерий спора у актиномицетов служит для размножения.

Низшие актиномицеты формируют слаборазвитый мицелий, который со временем распадается. Формирование спор не происходит. Среди низших актиномицетов есть патогенные формы, вызывающие актиномикозы у человека и животных.

Культуральные признаки.

Представители разных групп актиномицетов обычно хорошо растут на синтетических питательных средах, как на плотных агаризованных, так и на жидких. В лабораторных условиях актиномицеты часто поддерживают на овсяном агаре. Хорошими средами для культивирования актиномицетов являются крахмало-аммиачная, среда Гаузе. Развитие микроорганизмов зависит от состава и реакции питательной среды, температурного и воздушного режимов, света, количества и качества посевного материала и других факторов. Из культуральных показателей для разделения актиномицетов на группы наиболее значима окраска культур — пигментация. По этому признаку актиномицеты делятся на две группы — бесцветные и пигментированные. Первые при росте на питательных средах не образуют никаких красящих веществ. Воздушный мицелий таких актиномицетов может быть белым, светло-серым, кремовым, нижняя сторона колонии бесцветная. Актиномицеты второй группы образуют красящие вещества — пигменты. Колонии их при росте на питательных средах приобретают различную окраску: синюю, фиолетовую, красную, розовую, желтую, оранжевую, зеленую, черную, коричневую. Часто колонии окрашены в смешанные тона.

При росте на агаризованных ПС актиномицеты формируют три типа мицелия: субстратный; надсубстратный (стелется по субстрату) и воздушный.

Пигмент как правило обнаруживается в воздушном, реже в надсубстратном мицелии.

На агаризованных средах актиномицеты рода Streptomyces образуют плотные, компактные, кожистые колонии различной структуры и внешнего строения - гладкие, бархатистые, бугристые, складчатые, бородавчатые, мучнистые, плоские, пленчато-морщинистые.

Пигменты и запах (почвенный) – внешние культуральные признаки, отличающие актиномицетов.

Морфологические признаки.

Тип ветвления актиномицетов: моноподиальное, симподиальное; дихотомическое, мутовчатое.

Виды спороносцев: прямые, закрученные, спиральные.

Количество спор в спороносцах: моноспоровые (род Micromonospora), биспоровые (род Microbispora), полиспоровые (род Streptomyces).

Характерные морфологические признаки выявляют непосредственно на плотной питательной среде в чашках Петри. При этом можно обнаружить субстратный мицелий, развивающийся в толще агаризованиой среды, и воздушный, разрастающийся над его поверхностью. Для этого делают вырез ПС и засевают штрихом, в том числе и вырезанный участок. Инкубируют при t = 28-30 ºC. После инкубирования микроскопирование ведут прямо на чашках Петри на тонком участке ПС, где был вырез (позволяет более четко рассмотреть).

Для изучения типа спорообразования (спороносцев), формы и размера спор готовят препарат "отпечаток". Для приготовления такого препарата покровное стекло плотно прижимают к поверхности колонии, а затем помещают его на предметное стекло в каплю воды (или метиленовой сини) отпечатком вниз и микроскопируют с увеличением 8^х и 40^х. Можно микроскопировать и «в сухую», но тогда надо смочить края покровного стеклышка для его прилипания. Также можно просматривать с иммерсией.

Задание:

1. Приготовить агаризованную ПС типа овсяного агара (овсяная мука – 5-10%, агар – 2%) для посева актиномицетов в чашки Петри и в пробирки на скошенную ПС (по 1 чашке Петри и 1 пробирке на каждого студента).

2. Приготовить для стерилизации чашки Петри, пробирки, закрыть их ватно-марлевыми пробками и простерилизовать.

3. Произвести посев актиномицетов штрихом на скошенную агаризованную среду и в чашки Петри на поверхность агаризованной среды с вырезом.

4. Изучить на следующем занятии культуральные и морфологические признаки актиномицетов. Результаты представить в виде таблицы (табл.1).