Спорообразование у микробов. Назвать спорообразующие микробы. Методы окраски на выявление спор в мазках.

Споры бактерий – особое состояние покоящихся репродуктивных клеток, характеризующееся резко сниженным уровнем метаболизма и высокой резистентностью. Переход бактерий к спорообразованию наблюдается при истощении питательного субстрата, недостатке углерода, азота, фосфора. Споры могут располагаться центрально (B. anthracis), субтерминально – ближе к концу (Cl. botulinum), терминально (Cl. tetani).

Cпорообразование (споруляция) - один из сложнейших процессов дифференцировки бактериальной клетки под контролем комплекса специальных генов.

Стадии спорообразования:

1.Подготовительная - изменяется метаболизм, завершается репликация ДНК и происходит её конденсация. Клетка содержит 2 или более нуклеоида. Один локализуется в спорогенной зоне, остальные в цитоплазме спорангия. Синтезируется дипиколиновая кислота.

2.Стадия предспоры - со стороны ЦПМ вегетативной клетки происходит врастание двойной мембраны, или септы, в результате образуется проспора, окруженная 2-мя мембранами.

3.Образование оболочек - между мембранами образуется зачаточный пептидогликановый слой, над ним толстый слой кортекса, и вокруг наружной мембраны формируется споровая оболочка.

4.Созревание споры - завершение обазования всех структур споры, она приобретает термоуст-ть, характерную форму и занимает определенное положение в клетке.

Споры образуют бациллы (сенная пал, сиб. язва), клостридии (ботулизм, столбняк) и единичные виды шаровидных.

Метод Мюллера: 1)фикс.мазок+хром.к-та 5 мин; 2)промыть, высушить; 3)карб.фуксин Циля 3 мин.до паров; 4)серн.к-та 5 сек; 5)промыть; 6)метил.синий 1-2 мин; 7)промыть, высушить. Картина: споры-красные, клетки-синие.

Метод Трухильо: 1)фикс.мазок+фильтр.бумажка+малах.зеленьпо+греть 3 мин.до паров; 2)промыть водой; 3)осн.фуксин 1 мин; 4)промыть, высушить. Картина: споры–зеленые, вегет.клетки – красные.

Метод Пешкова: 1)фикс.мазок+метил.синий Леффлера+греть 30 сек.до паров; 2)промыть водой; 3)нейтрал.красный 30 сек; 4)промыть, высушить. Картина: споры–синие, клетки – красные. Метод Дунаева: 1)фикс.мазок+хлористо-водор.к-та+греть 1-2 мин.до паров; 2)промыть водой; 3)карболовый аурамин+греть 3 мин.до паров; 4)серн.к-та на 5 сек; 5)промыть; 6)р-р родамина «G» на 5 мин; 7)промыть, высушить, в люмин. микроск. Картина: споры светятся золотисто-зеленым, клетки – оранжевые.

Капсула у микробов, капсулообразующие микробы. Окраска мазков.

Капсула – слизистый слой из гомо- и гетерополисах-ов, реже из полипептида. Микро-, макрокапсулы. Содержат капсульный АГ, защищают от механ. повреждений, высыхания, токсинов, фагоцитоза АТ. Является фактором вирулентности. Наличие-важный диагностический признак. Обр. капсулу возбудители пастерелеза, сиб. язвы, тулеремии, бруцеллеза. Капсула слабо воспринимает красящие растворы т.к. сост. из мукополисахаридов и пептидов. Мазки готовят из свежего материала, фиксируют химич. способом, применяют метахроматические красители.

Метод Ольта: 1) фикс.мазок+вод. р-р сафранина+греть 2-3 мин; 2)промыть, высушить. Картина: капсулы бледно-желтые, клетки-красные.

Метод Романовского-Гимза 1)краску Романовского-Гимза разводят водой 1:10; 2)препарат кладут в чашку Петри мазком вниз, залив. краску до мазка на 10-15 мин; 3)промыть, высушить. Картина: капсулы розовые, клетки-фиолетовые/синие.

Метод Михина: 1)фикс.мазок+метил.синий Леффлера+греть 2-3 мин.до паров; 2)промыть, высушить. Картина: капсулы розовые, клетки–синие.

Метод Ребигера: 1)нефикс.мазок+формалиниз.генцианвиолет на 15-20 сек; 2)промыть, высушить. Картина: капсулы-розовые, клетки-фиолетовые.

Метод Бури-Гинса: 1)на предметное стекло наносят каплю канцеряской туши черного цвета; 2)в неё вносят взвесь микробов; 3)шлифованным стеклом растирают каплю; 4)высышивают, химически фиксируют; 5)фуксин Циля 3-5 мин. Картина: капсула-не окрашена, клетки-красные.