Ориентировочная основа деятельности студентов для проведения лабораторной работы

Работа 1.«Определение общего белка сыворотки крови рефрактометрическим методом»

Принцип метода. В основе рефрактометрии лежит неодинаковая способность различных сред преломлять проходящие через них лучи света. Отношение синуса угла падения к синусу угла преломления называется показателем (коэффициентом) преломления:

Степень рефракции раствора обусловлена количеством, размерами и физическим состоянием растворённых в нём частиц, а также температурой окружающей среды. В сыворотке крови величина рефракции зависит в первую очередь от количества и качества белков; солям и другим составным частям принадлежит меньшая роль. Для определения показателя преломления служат особые приборы – рефрактометры.

Рис. 1. Схема устройства рефрактометра:

1 – зеркало; 2 и 4 – призмы; 3 – сыворотка; 5 – окуляр; 6 – белое и тёмное поле в окуляре; 7 – шкала для отсчёта поворота угла призм, показатель преломления (рефракция)

Расчёт. Определив показатель преломления по таблице, вычисляют процент содержания белка в испытуемой пробе (г/100 мл). Коэффициент пересчета в единицы СИ (г/л) равен 10.

Показатель преломления	Белок в сыворотке крови, г/100 мл	Показатель преломления	Белок в сыворотке крови, г/100 мл
1,33705 1,33743 1,33781 1,33820 1,33858 1,33896 1,33934 1,33972 1,34000 1,34048 1,34086 1,34124 1,34162 1,34199 1,34237 1,34275 1,34313 1,34350 1,34388 1,34426 1,34463 1,34500 1,34537	0,63 0,86 1,08 1,30 1,52 1,74 1,96 2,18 2,40 2,62 2,84 3,06 3,28 3,50 3,72 3,94 4,16 4,38 4,60 4,81 5,03 5,25 5,47	1,34575 1,34612 1,34650 1,34687 1,34724 1,34761 1,34798 1,34836 1,34873 1,34910 1,34947 1,34984 1,35021 1,35058 1,35095 1,35132 1,35169 1,35205 1,35242 1,35279 1,35316 1,35352 1,35388	3,68 5,90 6,12 6,34 6,55 6,77 6,98 7,20 7,42 7,63 7,85 8,06 8,28 8,49 8,71 8,92 9,14 9,35 9,57 9,78 9,99 10,20 10,41

Клинико-диагностическое значение: повышение содержания белка в крови (гиперпротеинемия) наблюдается при венозном стазе, гипогидратации, гипериммуноглобулинемии. Снижение уровня белка в крови (гипопротеинемия) ниже 60 г/л может быть связано с потерей белка (при гастроэнтеропатиях, ожогах, нефротическом синдроме) и снижением синтеза белка (при тяжелой белковой недостаточности, хронических заболеваниях печени). Норма (сыворотка) - 65 - 85 г/л.

Работа 2. «Разделение белков методом электрофореза»

Принцип метода. Метод основан на том, что при определённом значении рН и ионной силы раствора белки двигаются в электрическом поле со скоростью, пропорциональной их суммарному заряду. Белки, имеющие суммарный отрицательный заряд, двигаются к аноду (+), а положительно заряженные белки - к катоду (-).

Электрофорез проводят на различных носителях: бумаге, крахмальном геле, полиакриламидном геле (ПААГ) и др. В отличие от электрофореза на бумаге, где скорость движения белков пропорциональна только их суммарному заряду, в полиакриламидном геле скорость движения белков пропорциональна их молекулярным массам. Разрешающая способность электрофореза в полиакриламидном геле выше, чем на бумаге. Так, при электрофорезе белков сыворотки крови человека на бумаге обнаруживают только 5 главных фракций: альбумины, α₁ глобулины, α₂-глобулины, β-глобулины и γ-глобулины. Электрофорез тех же белков в ПААГ позволяет получить до 18 различных фракций. Для обнаружения белковых фракций полоски бумаги или столбики геля обрабатывают красителем (чаще всего бромфеноловым синим или амидовым чёрным). Окрашенный комплекс белков с красителем выявляет расположение различных фракций на носителе.

Клинико-диагностическое значение: При многих заболеваниях очень часто изменяется процентное соотношение отдельных белковых фракций, хотя общее содержание белка в сыворотке крови остается в пределах нормы. Такое состояние носит название диспротеинемия. Низкий уровень альбумина (гипоальбуминемия) может возникать из-за нефритического синдрома, болезни печени, ожогов, голодания и др. Повышение уровня γ-глобулинов говорит о наличии в организме инфекции и воспаления, снижение может свидетельствовать об иммунодефиците. Повышение уровня α –глобулинов наблюдается при острых воспалительных процессах.