Работа № 4. Реакция Умикова на отличие женского молока от коровьего
В одну пробирку отмеривают 2 мл женского молока, в другую — 2 мл коровьего. В обе пробирки прибавляют по 2 мл 15% раствора аммиака и помещают их на 10 минут в водяную баню при 60° С. В пробирке с женским молоком развивается буро-фиолетовое окрашивание. Окраска коровьего молока не меняется.
Работа № 5. Определение витамина А.
Работа № 6. Определение витамина B2 (рибофлавин).
Реакция основана на способности витамина В2 легко восстанавливаться. Раствор витамина В2, имеющий желтый цвет, при восстановлении приобретает сначала розовый цвет за счет образования промежуточных соединений, а затем обесцвечивается. Восстановленная форма рибофлавина бесцветна.
В пробирку наливают 10 капель 0,025% раствора витамина В2, добавляют 5 капель концентрированной НСl и опускают зернышко металлического цинка. Сразу же начинается выделение пузырьков водорода. Жидкость сначала розовеет, затем обесцвечивается.
Рекомендации по оформлению результатов работы и написанию выводов
Результаты исследования молока на содержание химических веществ внести в таблицу №1. При обнаружении в-ва поставить знак «+», при отсутствии «-».
Таблица 1.
| № | казеиноген | Альбумины | глобулины | Са2+ | Фн | Лактоза | аминокислоты | Вит . А | Вит. В2. | Реакция Умикова |
7. Контрольные вопросы по теме занятия (см. задание к занятию).
8. Литература для подготовки (см. задание к занятию).
9. Обсуждено на заседании кафедры 18. 04. 2011 г.
10. Учебное задание подготовлено доц. Трубачев С.Д.
ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия
Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
кафедра биохимии
Утверждаю
Зав. каф. проф., д.м.н.
Мещанинов В.Н.
_____‘’_____________2011 г
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ № 32/3
(для студентов)
Факультеты: лечебно-профилактический
Курс: 2
1. Тема занятия: Факторы внешней среды и метаболизм.
2. Учебная цель занятия: Изучить изменение обмена веществ в организме при воздействии повреждающих факторов внешней среды.
3. Задачи занятия:
1. Изучить теоретический материал о воздействии различных неорганических и органических токсинов на обмен веществ организма.
2. Изучить теоретический материал о видах излучений и их воздействии на организм.
3. Изучить теоретический материал о токсическом воздействии этанола на организм.
4. Исследовать в ходе выполнения лабораторной работы маркеры различных видов токсических поражений.
4. Продолжительность занятия: 3 акад. часа.
5. Задание студентам:
1. Исследовать пробы мочи на содержание ацетальдегида, фенола, пролина – маркеров токсического поражения.
2. Исследовать содержание малонового диальдегида в цельной крови – маркеры лучевого поражения.
6. Методические указания к выполнению самостоятельной работы на занятии.
Работа № 1. Качественное определение ацетальдегида в моче при отравлении этанолом.
Принцип метода: Ацетальдегид с фуксинсернистой кислотой образует комплекс фиолетового цвета.
Ход работы: В пробирку №1 и №2 добавляют 1 мл мочи здорового человека и больного алкоголизмом. В каждую пробирку вносят по 1 мл фуксинсернистой кислоты. Наблюдают изменения в окраске.
Рекомендации по оформлению результатов работы и написанию выводов
В выводе сравнить между собой пробы №1 и №2. Делают обобщения о диагностической важности определения ацетальдегида в моче.
Работа № 2. Качественное определение фенола в моче.
Принцип метода: Лекарственные препараты (производные салициловой кислоты и ПАСК), ароматические углеводороды частично обезвреживаются в печени с образованием гидроксила в бензольном кольце. В гидроксилированной форме они попадают в мочу и с хлорным железом дает красно-фиолетовое окрашивание.
Ход работы: в пробирку добавляют 2 капли раствора фенола, затем вносят 3 капли воды и 1 каплю хлорного железа.
Рекомендации по оформлению результатов работы и написанию выводов
В выводе отметить наличие изменения окраски и дать клинико-диагностическое значение определения фенола.
Работа № 3. Качественное определение малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты.
Принцип метода: Малоновой диальдегид (МДА) является конечным продуктом перекисного окисления липидов в клетке. Увеличение его концентрации свидетельствует об увеличении липидной пероксидации в организме, вызванной радиоактивным излучением.
Ход работы: К 1 мл цельной крови дабовляют 6 мл 57% трихлоруксусной кислоты. Отбирают 2 мл безбелкового экстракта в который вносят 1 мл 0,8% р-р тиобарбитуровой кислоты. Полученный раствор помещают на кипящую водяную баню на 10 минут. Полученный р-р фотоколориметрируют при светофильтре. Расчет концентрации МДА производят по формуле: С = Е • 6,73 •10-5 ммоль/л крови, где Е – экстинция раствора.
Рекомендации по оформлению результатов работы и написанию выводов
В выводе отметить изменение окраски раствора и указать клинико-диагностическое значение определения МДА. Написать формулу МДА.
Работа № 4. Качественное определение пролина в моче.
Принцип метода: Пролин одна из основных аминокислот белка соединительной ткани - коллагена. При увеличении фиброзного процесса в тканях увеличивается концентрация его в крови и моче. Пролин при высокой температуре образует в изотиновом растворе ярко-голубой комплекс.
Ход работы: Фильтрованную бумагу смачивают в изотиновом растворе и затем высушивают при комнатной температуре. Затем на нее наносят каплю мочи. Образец помещают в сушильный шкаф (t = 100˚C) на 10 минут. Промачивают 1Н HCl и дистиллированной водой. При наличии пролина в моче наблюдают появление ярко-голубой окраски.
Рекомендации по оформлению результатов работы и написанию выводов
В выводе отметить наличие характерной окраски образца и дать клинико-диагностическое значение определения пролина.
7. Контрольные вопросы по теме занятия (см. задание к занятию).
8. Литература для подготовки (см. задание к занятию).
9. Обсуждено на заседании кафедры 18. 04. 2011 г.
10. Учебное задание подготовлено доц. Даниловой И.Г.
ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия
Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
кафедра биохимии
Утверждаю
Зав. каф. проф., д.м.н.
Мещанинов В.Н.
_____‘’_____________2011 г
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ № 31/2
(для студентов)
Факультеты: лечебно-профилактический, медико-профилактический, педиатрический
Курс: 2
1. Тема занятия: Биохимические основы медицинской витаминологии. Витамины-коферменты – регуляторы и интеграторы тканевого метаболизма.
2. Учебная цель занятия: Изучить биологически активные вещества витамины-регуляторы и интеграторы тканевого метаболизма, их биохимические функции и механизмы действия.
3. Задачи занятия:
- Раскрыть биохимический смысл понятия витамины, познакомить студентов с принципами классификации, номенклатуры витаминов и истории развития науки витаминологии.
- Изучить теоретический материал, касающийся причин и видов нарушения обмена витаминов, методов оценки обеспеченности организма витаминами, основных источников поступления их в организм.
- Изучить нормы потребления витаминов по возрастным группам, уметь обосновать их на основе знаний об интеграции метаболических процессов в организме.
- Изучить теоретический материал касающийся строения, физических, химических свойств, участие в обмене веществ, механизм действия, признаков гипо- и авитаминозов важнейших витаминов-коферментов (РР1, В1, В2, В6, В12, ТГФК, биотин), научиться связывать симптомы витаминной недостаточности с изменением молекулярных процессов в клетке.
- Освоить методики проведения качественных реакций обнаружения витаминов В1, В2, В6, РР, фолиевой кислоты в биологических жидкостях.
- Обобщить теоретический материал, данные лабораторной работы, сделать выводы о связи: уровень витаминов в организме – интеграция метаболических процессов в клетке.
4. Продолжительность занятия: 3 акад. часа.
5. Задание студентам:
1. Исследовать присутствие витаминов РР1, В1, В6, фолиевой кислоты в биологических жидкостях с помощью качественных реакций.
2. Изучить результаты клинических наблюдений лабораторных данных биохимических исследований пациентов различного возраста и сделать заключение об обеспеченности их организма витаминами (ситуационные задачи).
6. Методические указания к выполнению самостоятельной работы на занятии.
Работа № 1. Качественные реакции на витамины В1, В2, В6, В12, РР, фолиевую кислоту.
Диагностическое значение: позволяет обнаружить витамины в биологических жидкостях, пищевых продуктах определить подлинность лекарственного препарата.
| Витамин | Принцип метода | Порядок выполнения работы | Качественная реакция |
| В1 | В щелочной среде тиамин окисляется в тиохром, который флуоресцирует в УФ | 1. 2 капли 5% раствора тиамина 2. 2-4 капли 10% раствора NaOH 3. 2-3 капли 5% р-ра K3[Fe(CN)6] (окислитель) 4. 10 минут выдержки после перемешивания | УФ, синяя флуоресценция |
| В2 | Рибофлавин и флавиновые ферменты флуоресцируют в УФ. Восстановленные формы не флуорисцируют в УФ. | 1. 10 капель 0,025% р-ра рибофлавина 2. 10 капель 0,025% р-ра рибофлавина, 2 капли 0,5% р-ра тиосульфата натрия (восстановитель). Перемешивают. | УФ, желто-зеленая УФ, отсутствие флуоресценции |
| Фолиевая к-та | В щелочной среде флуоресцирует | 1. 10 капель 0,001% р-ра фолиевой к-ты 2. 1 мл 0,1Н р-ра NaOH. Перемешивают | УФ, голубая флуоресценция |
| В6 | Качественная реакция связана с присутствием в молекуле вит. В6 фенольного гидроксила. | 1. 5 капель 1% р-ра вит. В6. 2. 5 капель 1% р-ра FeCl3. Перемешивают | Красное окрашивание |
| РР | Качественная реакция связана с кислотными свойствами никотиновой кислоты. | 1. 20 капель 3% р-ра вит. РР взбалтывают и нагревают до кипения 2. Добавляют 20 капель ацетата меди. Нагревают до кипения. 3. Охлаждают под струей воды. | Синий осадок медной соли никотиновой кислоты |
Работа № 2.
Изучить результаты клинических наблюдений и лабораторные данные биохимических исследований пациентов различного возраста и сделать заключение об обеспеченности их организма витаминами (ситуационные задачи).
Клинико-диагностическое значение. Клиническое наблюдение состояния больного позволяет выделить ведущие симптомы аллиметарного заболевания (гипо- или гипервитаминоза), а лабораторные биохимические исследования подтвердить предполагаемый диагноз.
7. Контрольные вопросы по теме занятия (см. задание к занятию).
8. Литература для подготовки (см. задание к занятию).
9. Обсуждено на заседании кафедры 18. 04. 2011 г.
10. Учебное задание подготовлено ст. преп. Каминская Л.А..
ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия
Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
кафедра биохимии
Утверждаю
Зав. каф. проф., д.м.н.
Мещанинов В.Н.
_____‘’_____________2011 г
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ № 31/3
(для студентов)
Факультеты: лечебно-профилактический, медико-профилактический, педиатрический
Курс: 2
1. Тема занятия: Витамины в патохимии экстремальных состояний. Витамины-антиоксиданты.
2. Учебная цель занятия: Изучить свойства и механизмы действия витаминов-антиоксидантов, их биологическую роль в процессах адаптации организма в экстремальных состояниях.
3. Задачи занятия:
1. Повторить основной теоретический материал о механизмах поддержания уровня свободно-радикальных процессов в клетке.
2. Изучить теоретический материал, касающийся строения, физических, химических свойств, участие в обмене веществ, механизма действия, признаков гипо- и авитаминозов важнейших витаминов-антиоксидантов (А, Е, С, К, Р, Д, липоевая кислота).
3. Научиться соотносить нарушение молекулярных процессов в клетке при гипо- и авитаминозах А, Е, С, К, Р, Д с симптомами алиментарных заболеваний.
4. Изучить теоретический материал, связанный с биохимическим обоснованием состава комплекса витамины-микроэлементы, обладающих геропротекторным, антиоксидантным, мембранотропным действием.
5. Освоить методы качественного определения витаминов А, Е, С и количественного определения вит. С в биологических жидкостях.
6. Обобщить теоретический материал, данные лабораторной работы, сделать выводы о специализированных возможностях применения витаминных комплексов для коррекции патохимических изменений и восстановлении нормы в экстремальных состояниях организма.
4. Продолжительность занятия: 3 акад. часа.
5. Задание студентам:
1. Исследовать с помощью качественных реакций присутствие витаминов С, А ,Е в биологических жидкостях организма (кровь, моча).
2. Исследовать количественное содержание витамина С в биологических жидкостях.
6. Методические указания к выполнению самостоятельной работы на занятии.
Работа № 1. Качественные реакции на витамины А, Е, Д.
Диагностическое значение: позволяет обнаружить витамины в биологических жидкостях, пищевых продуктах определить подлинность лекарственного препарата.
| Витамин | Принцип метода | Порядок выполнения работы | Качественная реакция |
| А | Дегидратация в кислой среде приводит к образованию окрашенного соединения | 1. 3 капли масляного раствора витамина А в хлороформе 2. 1 капля конц. Н2SO4. Перемешивают | Красно-фиолетовая окраска переходит в красно-бурую |
| Д | Продукт взаимодействия витамина Д с бромом – окрашенное соединение | 1. 2-4 капли масляного раствора витамина Д. 2. 2-4 капли раствора брома в хлороформе (1:60). Перемешивают. | Зеленовато-голубое окрашивание |
| Е | Α-токоферол окисляется в хинон, который окрашивает раствор | 1. 4-5 капель 0,1% спиртового раствора витамина Е. 2. 0,5 мл 1% раствора FeCl3. Перемешивают | Красное окрашивание |