Качественная реакция на гемовую группу. Бензидиновая проба

При добавлении к дефибринизированной крови растворов бензидина и Н₂О₂ развивается окраска от зеленного до синего тона, что связано с окислением бензидина пероксидом водорода в присутствии гемоглобина. В обычных условиях эта реакция идет крайне медленно, но под действием катализаторов – моментально. Гем обладает каталитической активностью, резко ускоряющей окисление бензидина в присутствии Н₂О₂. Реакция очень чувствительна и под названием бензидиновой пробы на кровь используется в судебно-медицинской экспертизе.

Фосфопротеиды

Фосфопротеиды – это сложные белки, простетической группой которых является ортофосфорная кислота. Процессы фосфорилирования и дефосфорилирования белков играют важную роль в системах регуляции метаболических путей. Этот механизм позволяет контролировать активность ряда жизненно важных ферментов. Примером может служить гликогенфосфорилаза, катализирующая фосфоролиз гликогена в печени. Фосфорилирование одного из остатков серина обеспечивает активацию этого фермента, при отщеплении фосфатной группы происходит его инактивация. Во многих случаях цикл фосфорилирования/дефосфорилирования белков зависит от аденилатциклазной системы. Известно, что эффекты сАМР связаны с фосфорилированием или дефосфорилированием эукариотических белков. Любое воздействие сАМР на такие разные процессы, как стероидогенез, секреция, транспорт ионов, метаболизм углеводов и жиров, индукция ферментов, регуляция транскрипции генов, рост и деление клеток регулируется активностью специфической протеинкиназы или специфической фосфатазы, либо доступностью субстратов для фосфорилирования. Многие белки, в том числе казеин, гистоны и протамины могут подвергаться фосфорилированию.

Выделение казеина

Наиболее доступным для изучения фосфопротеидом является белок молока – казеин. Вследствие присутствия фосфатной группы он обладает кислыми свойствами и в молоке находится в виде кислой кальциевой соли. Чаще всего казеин выделяют путем подкисления молока. Эта процедура основана на том, что казеин является гидрофобным белком, лишенным гидратной оболочки, поэтому в изоэлектрической точке (слабокислая среда) он становится крайне нестабильным и выпадает в осадок (см. лабораторную работу №2).

Определение фосфорной кислоты в казеине

Обнаружение фосфорной кислоты в образце можно осуществить с использованием молибдата аммония или магнезиальной смеси.

1. Фосфорная кислота образует с молибденовым реактивом желтый кристаллический осадок фосфорномолибденовокислого аммония:

H₃PO₄ + 12(NH₄)₂MoO₄ + 21HNO₃ → (NH₄)₃PO₄ × 12MoO₃ + 21NH₄NO₃ + + 12H₂O.

2. Реакция с магнезиальной смесью основана на образовании кристаллического осадка фосфата магний-амония MgNH₄PO₄ в ходе двух последовательных реакций: образования фосфата аммония и взаимодействия данной соли со смесью хлорида магния и хлорида аммония.