Определение оптимума рН действия амилазы слюны

№	Кол-во 0,2 М Na₂HPO₄ (мл)	Кол-во 0,1 М лимонной кислоты	рН	Кол-во 0,5 % р-ра крахмала (капли)	Кол-во слюны 1:100 (1:50), капли
1.	0,58	0,42	5,6
2.	0,63	0,37	6,0
3.	0,69	0,31	6,4
4.	0,77	0,23	6,8
5.	0,87	0,13	7,2
6.	0,94	0,06	7,6
7.	0,97	0,03	8,0

Содержимое пробирок перемешивают и помещают их в водяную баню или термостат при температуре 38^о на 8 минут.

Затем во все пробирки добавляют по 1 капле раствора йода в йодистом калии, перемешивают, наблюдают окраску и определяют рН, при котором амилаза действует наиболее активно (оптимальную рН).

Результат занести в таблицу 9. Сделать вывод об оптимуме рН действия амилазы слюны.

Таблица 9

№	рН	Окраска с йодом	ВЫВОД

Лабораторная работа №15

ВЛИЯНИЕ АКТИВАТОРОВ И ИНГИБИТОРОВ

НА ДЕЙСТВИЕ ФЕРМЕНТОВ

Вещества, усиливающие действие ферментов, называются активаторами. Активаторы стимулируют действие ферментов, но в отличие от коферментов не принимают участия в реакции.

Ингибиторами (парализаторами) называются вещества, снижающие скорость ферментативных реакций. Ингибирование действия ферментов может происходить в том случае, если с активным центром фермента вместо специфического субстрата соединяется близкий структурный аналог субстрата, т.е. вещество, близкое по строению к субстрату (конкурентное торможение). Ингибиторами нередко являются продукты промежуточных или конечных реакций какого-либо биохимического процесса.

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Активность амилазы слюны усиливается в присутствии хлористого натрия – специфического активатора амилазы. Сернокислая медь оказывается тормозящее действие на активность амилазы. Крахмал и декстрины открывают реакцией с раствором йода.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) слюна в разведении 1:5; 2) крахмал, 1 %; 3) NaCl, 1 %; 4) CuSO₄, 1 %; 5) 0,1 % раствора йода в 0,2 % йодистом калии; 6) пробирки.

ХОД РАБОТЫ:

В 3 пронумерованные пробирки приливают по 3 мл слюны, разведенной 1:5.

В пробирку №1 добавляют 2 капли 1 % раствора NaCl.

В пробирку №2 добавляют 2 капли 1 % раствора CuSO₄.

В пробирку №3 (контрольная) добавляют 2 капли дистиллированной воды.

Затем во все три пробирки приливают по 5 капель 1 % раствора крахмала.

Оставляют на 2 минуты при комнатной температуре. После чего проделывают реакцию на крахмал, приливая по 1 капле раствора йода в йодистом калии.

Результат занести в таблицу 10. Сделать вывод о том, какое из добавленных веществ является активатором, а какое – ингибитором.

Таблица 10

№	Субстрат	Фермент	Добавленное вещество	Окраска с йодом	ВЫВОД
1.
2.
3.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ:

При каких оптимальных условиях следует определять активность ферментов?

Как влияет рН на активность ферментов?

Как можно оценить специфичность ферментов?

Как можно воздействовать на скорость ферментативной реакции?

Как зависит скорость ферментативной реакции от концентрации субстрата?

Как влияют активаторы и ингибиторы на действие ферментов?

Конкурентные и неконкурентные ингибиторы. Механизм их действия.

Ингибиторы необратимого действия.

Регуляция активности ферментов. Единица активности.

Напишите уравнение реакции гидролиза крахмала до глюкозы под влиянием ферментов слюны.

Напишите уравнение химической реакции Троммера с глюкозой.

Тема 7

ДЕЙСТВИЕ ФЕРМЕНТОВ ОТДЕЛЬНЫХ КЛАССОВ

Катализируемая химическая реакция является тем признаком, по которому можно отличить один фермент от другого. Этот принцип был положен в основу классификации ферментов, согласно которой все известные ферменты подразделяют на шесть классов.

v ЗАДАНИЕ: заполнить таблицу 11.

Таблица 11