Гидролиз казеина и открытие в гидролизате фосфорной кислоты.
Фотоэлектроколориметр
Для измерения оптической плотности или светопропускания жидких растворов по отношению к растворителю или стандартному раствору предназначен фотоэлектрический колориметр (ФЭК).
В основу работы этого прибора положен принцип уравнения интенсивности двух световых пучков, проходящих через оптические среды, при помощи переменной щелевой диафрагмы.
Световые лучи от лампы, отразившись от зеркал, проходят через светофильтры, кюветы и попадают на фотоэлементы, которые подключены к гальванометру. Так что при равенстве интенсивности падающих на фотоэлементы световых пучков стрелка гальванометра стоит на нуле.
При вращении барабана диафрагма, связанная с ним, меняет свою ширину и тем самым величину светового потока, падающего на фотоэлемент.
Фотометрически нейтральный клин служит для ослабления светового потока, падающего на фотоэлемент.
Способ измерения.
1.В пучок света помещают кюветы с контрольным раствором.
2.Вращением ручки круговых фотометрических клиньев устанавливают стрелку гальванометра на нуль.
3.Затем в пучок света вводится кювета с исследуемым раствором, при этом стрелка гальванометра отклоняется от нулевого положения. Снимается показание.
4.Прибор после окончания работы выключить. Осторожно промыть кюветы.
2. Пользоваться лабораторной центрифугой, термостатом, песчаной и водяной баней. Центрифу́га — устройство, (машина или прибор), служащее для разделения сыпучих тел или жидкостей различного удельного веса и отделения жидкостей от твёрдых тел путем использования центробежной силы. При вращении в центрифуге частицы с наибольшим удельным весом располагаются на периферии, а частицы с меньшим удельным весом — ближе к оси вращения.
Термоста́т — прибор для поддержания постоянной температуры. Поддержание температуры обеспечивается либо за счёт использования терморегуляторов, либо осуществлением фазового перехода (например, таяние льда)
Песчаные бани используют при необходимости в ещё более высоких температурных показателях. Они, по сути, являются лотками с двумя термоэлектрическими нагревателями, куда засыпают кварцевый песок. Обрабатываемые образцы помещаются в рабочую зону, образуемую 10-15 мм равномерно прогретого верхнего слоя. Эксплуатационные преимущества таких приборов очевидны: экономичное энергопотребление, простота в обслуживании и высокая равномерность прогрева теплоносителя.
лабораторные водяные баниобеспечивают более равномерное нагревание. Принцип их действия прост: сосуд с исследуемым материалом погружается в жидкость или, в случае с паровыми моделями, охватывается её парами. Поскольку в условиях нормального атмосферного давления температура кипения не превышает 100°C, её предельное значение устанавливается автоматически. Если силу нагрева требуется увеличить, они могут наполняться маслом или парафином (для t° до 250°С).
3. Провести кислотный гидролиз белка.
Гидролиз казеина и открытие в гидролизате фосфорной кислоты.
Ход работы. 100 мг порошка казеина растворяют в пробирке в 3 мл 10% раствора едкого натра или кали. Пробирку закрывают пробкой со стеклянной трубкой в качестве холодильника, закрепляют ее на асбестовой сетке металлической лапкой и нагревают. Через час после начала кипения жидкости гидролиз прекращают, жидкости дают остыть и нейтрализуют ее концентрированной азотной кислотой (12-15 капель) до слабокислой реакции на лакмус. При нейтрализации выпадает осадок высокомолекулярных продуктов неполного гидролиза белков (пептоны). После отстаивания жидкость фильтруют, с фильтром проделывают молибденовую пробу на фосфорную кислоту (к 20 каплям молибденового реактива добавляют 2-3 капли гидролизата и кипятят несколько минут на голом огне). Выпадает небольшой кристаллический осадок фосфорномолибденовокислого аммония (лимонно-желтого цвета).
12(NH4)2·Mo O4 + H3PO4 + 21HNO3 → (NH4)3PO4·12Mo O3 + 21 NH4NO3 + 12 H2O
желтый кристаллический осадок
4. Провести очистку белка от низкомолекулярных примесей методом диализа и гельфильтрации на молселекте.