Качественные реакции на гормоны

Женские половые гормоны (фолликулин, эстрадиол и эстриол)содержат фенольное кольцо, в связи с чем они дают ряд реакций, характерных для фенолов.

Тироксин можно обнаружить, отщепляя от него с помощью кислотного гидролиза йодоводородную кислоту и переводя её в свободный йод. Последний экстрагируется хлороформом, который приобретает фиолетовую окраску.

Опыт 1. Реакции на фолликулин (эстрон)

1.Образование фенолята фолликулина

В двесухие пробирки помещают по 0,5 мл спиртового раствора фолликулина. В первую приливают 1 мл воды и наблюдают образование эмульсии фолликулина. Во вторую добавляют 1 мл 30%-ного раствора гидроксида натрия – помутнение не возникает.

2.Диазореакция

К 3 мл спиртового раствора фолликулина прибавляют 2 мл 10%-ного раствора карбоната натрия и 2-3 мл диазореактива (диазотированная сульфаниловая кислота). Наблюдают возникновение бледно-жёлтого окрашивания.

Опыт 2. Качественная реакция на тироксин

К половине предварительно измельчённой в ступке таблетки тиреоидина прибавляют 10 капель концентрированной азотной кислоты и осторожно нагревают до появления фиолетовых паров. Затем добавляют 20 капель 1%-ного раствора иодата калия, перемешивают и охлаждают. Добавляют 1-2 мл хлороформа и тщательно встряхивают. После расслаивания слой хлороформа окрашивается в фиолетовый цвет.

Опыт 3. Качественные реакции на адреналин

1.Реакция с иодатом калия

К 0,5 мл раствора адреналина прибавляют 1 мл 1%-ного раствора иодата калия, 10 капкль 10%-ного раствора уксусной илиортофосфорной кислоты и смесь подогревают до температуры 60-65ºС. Появляется интенсивное красно-фиолетовое окрашивание.

2.Реакция с хлоридом железа (III)

К 0,5 мл раствора адреналина прибавляют 2 мл воды и 1 каплю 3%-ного раствора хлорида железа (III). Наблюдают появление изумрудно-зелёной окраски вследствие образования фенолята железа. Прибавляют 1 каплю гидроксида аммония и наблюдают переход окраски в вишнёво-красную, а затем – коричневую.

Содержание отчёта

Полученные результаты заносят в таблицу:

Гормон	Реактив	Наблюдаемый эффект

Контрольные вопросы

1. Напишите уравнения реакций образования фенолята натрия и взаимодействия между фолликулином и диазореактивом.

2. Напишите уравнения реакций, происходящих при определении тироксина.

3. Напишите уравнения реакций, происходящих при взаимодействии адреналина с хлоридом железа (III) с последующим добавлением гидроксида аммония.

Уравнения реакций:

Лабораторная работа №12

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

КАЛЬЦИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Кальций, содержащийся в сыворотке крови, переводят в оксалат кальция. Последний растворяют в серной кислоте, что приводит к освобождению щавелевой кислоты в количестве, эквивалентном количеству кальция. Щавелевую кислоту титруют перманганатом калия.

Реактивы и оборудование

· Сыворотка крови.

· 4% раствор щавелевокислого аммония.

· 2% раствор аммиака.

· 1 н раствор серной кислоты.

· 0,01 н раствор перманганата калия.

· Центрифуга, центрифужные пробирки, центрифужные весы, пипетки, стеклянные палочки, микробюретки, водяная баня, колбы для титрования.

Ход работы

Подписывают 2 опытные и 2 контрольные пробирки и проводят прибавление реагентов по следующей схеме:

№ п/п	Операция	Опыт	Контроль
	Дистиллированная вода	2 мл	4 мл
	Сыворотка	2 мл	-
	Раствор щавелевокислого аммония	1 мл	1 мл
	30 мин. при комнатной температуре	+	+
	Центрифугирование 10 мин. при 2000 об/мин	+	+
	Удаление надосадочной жидкости	+	+
	4 мл раствора аммиака,ресуспендирование осадка, центрифугирование 10 мин. при 2000 об/мин., удаление надосадочной жидкости	+	+
	2 мл раствора серной кислоты	+	+
	Размешивание осадка и инкубация 2 мин. на горячей водяной бане	+	+
	Титрование перманганатом калия	+	+

Полученные результаты заносят в таблицу:

Объём KMnO4, израсходованного на титрование	Содержание кальция (мг на 100 мл)
опытных проб	контрольных проб
		среднее			среднее

Расчёт содержания кальция в сыворотке проводят по формуле:

x = 0,2(a – b), где x – содержание кальция (мг) в 100 мл сыворотки, a и b – средние результаты титрования опытной и контрольной проб.

Контрольные вопросы

1. Напишите уравнения реакций, на которых основано определение кальция.

2. Объясните, как была получена формула для определения содержания кальция в крови.

3. Биологическая роль кальция.

4. Регуляция обмена кальция.

Уравнения реакций:

ЛИТЕРАТУРА

1. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1990.

2. Ленинджер А. Основы биохимии. – Т. 1, 2, 3. – М.: Мир, 1983.

3. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. М.: Высшая школа, 1980.

4. Практикум по биохимии / Под редакцией С.Е. Северина и Г.А. Соловьевой. – М.: Издательство МГУ, 1989.

5. Филиппович Ю.Б., Егорова Т.А., Севастьянова Г.А. Практикум по общей биохимии. – М.: Просвещение, 1982.

6. Филиппович Ю.Б. Основы биохимии. – М.: Высшая школа, 1993.

7. Генгин М.Т.Общая биохимия, Пенза 1997.

СОДЕРЖАНИЕ

Качественные реакции на белки. Реакции осаждения белков. 2

Хроматография аминокислот на бумаге 6

Определение содержания белка методом Лоури. Определение белка 8 спектрофотометрическим методом

Гель-фильтрация 11

Качественные пробы на присутсвие ферментов. Специфичность действия 13

ферментов

Определение активности глицил-глицин-дипептидазы 14

Качественные реакции на витамины 17

Определение концентрации нуклеиновых кислот методом Спирина 19

Количественное определение глюкозы микрометодом Хагедорна-Иенсена 19

Качественные реакции на липиды 21

Качественные реакции на гормоны 22

Количественное определение кальция в сыворотке крови 23

Литература 25