Опыт №2. ВЛИЯНИЕ рН СРЕДЫ НА ДЕЙСТВИЕ

А-АМИЛАЗЫ СЛЮНЫ

Изменение пространственного расположения активных участков молекулы фермента пол влиянием рН приводит к изменению активного центра фермента и изменению скорости ферментативной реакции

ХОД РАБОТЫ', В три пробирки наливают 0,2 М раствор двузамещенного фосфорнокислого натрия и 0,1 М раствор лимонной кислоты в соотношениях, указанных а таблице. Получают буферные растворы со значением рН - 4,0, 6,8, 10,0. В каждую пробирку добавляют по 5 ил 1% раствора крахмала и по I мл разбавленного раствора слюны в 5 раз Содержимое перемешивают и ставят в баню на 15 минут. Затем во все пробирки добавляют 1-2 капли йода в йодистом калии.

НАБЛЮДАЮТ ОКРАШИВАНИЕ И ОПРЕДЕЛЯЮТ рН, ПРИ КОТОРОМ АМИЛАЗА ДЕЙСТВУЕТ НАИБОЛЕЕ АКТИВНО.

Таблицы:

I. ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУРЫ НА АКТИВНОСТЬ ФЕРМЕНТОВ (термолабильность)

пробы	Субстрат крахмала 1%	Амилаза, фермент слюны 1.3	Т°С	Цвет йодной пробы
до бани	после бани
	5 мл	1 мл	100°
	5 мл	1 мл	38°
	5 мл	1 мл	0°

ВЛИЯНИЕ РЕАКЦИИ СРЕДЫ рН НА АКТИВНОСТЬ

АМИЛАЗЫ

№ пробы	р 1Нр	Соль Na2HPO<0.2 М	Лимонная кислота С 6 Н8 О7, 0,1 М	Субстрат крахмала 1%	Фермент амилаза слюны 1-3	Цвет 1 иодной пробы
	44,0	0,38	0,62	5мл	1мл
	66,8	0,77	0,23	5мл	1мл
		1мл + 1капля NaOH 0,1н	-	5мл	1мл

Лабораторная работа по теме: «ГОРМОНЫ»

Пыт№1.КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ИНСУЛИН.

а) РЕАКЦИЯ ГЕЛЛЕРА. К 10 каплям конц. HN0₃ осторожно по стенке пробирки приливают равный объем 10 капель раствора инсулина. Пробирку наклоняют под углом 45 градусов так, чтобы обе жидкости не смешивались.

На границе двух жидкостей образуется белый аморфный осадок в виденебольшого кольца.

б) БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ. К 10 каплям инсулина добавляют 5 капель 10%-го раствора едкого натра и 1 каплю 1%-го CuS0₄.

Жидкость окрашивается в фиолетовый цвет.

в) РЕАКЦИЯ ФОЛЯ. К 5 каплям раствора инсулина приливают 5 капель реактива Фоля и кипятят. Через 1-2 минуты при стоянии появляется бурый или черный осадок.

Опыт №2. КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА АДРЕНАЛИН.

В пробирку наливают 10 капель раствора адреналина и добавляют 1 каплю FeCl₃. Наблюдается зеленое окрашивание вследствие присутствия пирокатехина в молекуле адреналина. Добавив 1 каплю 10%-го раствора NaOH, наблюдают вишнево-красное окрашивание.

Опыт №3. ЩЕЛОЧНОЙ ГИДРОЛИЗ ТИРЕОИДИНА.

В ступку помещают 5 таблеток тиреоидина и тщательно их растирают. Растертую массу пересыпают в колбочку для гидролиза, добавляют 5 мл. 10%-го раствора щелочи и 5 мл. Н₂0. Затем кипятить колбочку на асбестовой сетке в течении 10-15 минут.

а) ОТКРЫТИЕ ЙОДА В ПОЛУЧЕННОМ ГИДРОЛИЗАТЕ.

К 25 каплям охлажденного гидролизата прибавляют 10%-ый раствор H₂SO₄ до кислой реакции на лакмус. После подкисления добавляют 3 капли 1%-го раствора крахмала и 5-10 капель 2%-го раствора йодноватого калия (не избыток). Выделившийся йод дает синее окрашивание с крахмалом.

Опыт Ш. КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА ФОЛЛИКУЛИН /эстрон/ с КОНЦ.H₂SO₄.

В маленькую пробирку наливают 2 капли спиртового раствора 'фолликулина и помещают ее в кипящую водную баню на 5-10 минут для удаления спирта. К оставшемуся в пробирке фолликулину добавляют 10 капель конц. H₂SO₄, и помещают пробирку вновь в кипящую водяную баню на 5-10 минут. Появляется соломенно-желтое окрашивание, переходящее при нагревании в оранжевое.

Лабораторная работа по теме "ОБМЕН УГЛЕВОДОВ"

Опыт № I. «ПОЛУЧЕНИЕ ГЛИКОГЕНА ПО ПФЛЮГЕРУ»

Принцип метода. Печень или мышечная ткань только что убитого животного кипятят с равным объемом 60%-ного раствора КОН.

При этом гидролизуется белки ткани, а гликоген переходит в раствор, из которого затем осаждается спиртом.

Ход работы: В центрифужную пробирку налагают 2 мл 60%-ного КОН гуда же кладут 1,5-2 г ткани. Пробирку ставят на час в кипящую водяную баню, часто взбалтывают. Через час пробирку вынимают из бани, охлаждают и добавляют в нее 8-10 мл спирта. Выпадает ОСАДОК ГЛИКОГЕНА. Пробирку ставят в центрифугу и центрифугируют. Жидкость сливают. Осадок растворяют в 2 мл 15%-ного раствора КОН и снова добавляют 8-10 мл спирта. Снова выпадает осадок гликогена. Центрифугируют и жидкость над осадком сливают.

Опыт №2. «ГИДРОЛИЗ ГЛИКОГЕНА»

Ход работы: Осадок гликогена растворяют е 3-4 мл 2,5%-ного раствора соляной кислоты и кипятят 15-20 минп Охлаждают и нейтрализуют 10%-ным раствором щелочи, добавляют реактив Фслинга и кипятят Проба должна бить положительной

Лабораторная работа по теме «ОБМЕН ЛИПИДОВ.

ФОСФОЛИПИДЫ»

Опыт №1: «ВЫДЕЛЕНИЕ ЛЕЦИТИНА ИЗ ЖЕЛТКА

Куриного яйца

Понятие о лецитинах. Лецитины относятся к фосфоглицеридам (фосфатидилхолинам). При гидролизе лецитинов освобождается молекула глицерина, две молекулы жирных кислот ( из которых одна является непредельной), молекулы фосфорной кислоты и азотистого основания холина.

Фосфорная кислота в молекуле лецитина соединена сложноэфирной связью со спиртовой группой холина

холин

В зависимости от того, к какому углеродному атому глицерина присоединен остаток холинфосфорной кислоты, выделяют а и р-лецитины. Лецитины различаются также по жирным кислотам, входящим в их состав.

Реактивы: 1) желток куриного яйца, б) этиловый спирт, в) ацетон, г) хлористый кадмий, насыщенный спиртовой раствор.

Ход работы:

В небольшой стаканчик вносят желток куриного яйца и, помешивая стеклянной палочкой, добавляют 10 мл горячего спирта. После остывания содержимое фильтруют в сухую пробирку. Фильтрат должен быть прозрачным.

Осаждение ацетоном.

В сухую пробирку наливают 2-3 мл ацетона и по каплям прибавляют спиртовой раствор лецитинов. Выпадает осадок. Так как лецитины в ацетоне не растворяются.