Реакция с раствором кадмия хлорида.

Несколько капель исследуемого хлороформного раствора помещают на предметное стекло, растворитель испаряют без нагревания. Остаток на предметном стекле растворяют в капле 0,1н раствора HCI, раствор соединяют с каплей 10% раствора кадмия хлорида. Образуются характерные сростки из тонких пластинок кубической формы.

Реакция с реактивом Фреде.

Несколько капель исследуемого хлороформного раствора помещают в фарфоровую чашку или на фарфоровую пластинку, растворитель испаряют без нагревания. К сухому остатку добавляют одну каплю реактива Фреде ( молибдат аммония в концентри-рованной серной кислоте). При наличии папаверина наблюдается зелёная окраска.

Реакция с реактивом Манделина.

Несколько капель исследуемого хлороформного раствора помещают в фарфоровую чашку или на фарфоровую пластинку, растворитель испаряют без нагревания. К сухому остатку добавляют одну каплю реактива Манделина ( ванадат натрия в концентрированной серной кислоте). При наличии папаверина наблюдается сине-фиолетовая окраска.

УИРС.ТСХ –анализ алкалоидов.

Условия проведения ТСХ-анализа :

хроматографическая пластинка « Сорбфил»

хроматографическая система:метанол : 25% раствор аммиака(100:0,1)

исследуемые вещества: хлороформный раствор папаверина.

Обработка пластинки : Реактив Драгендорфа по Мунье.

После проведения исследования зарисовать полученную хроматограмму и рассчитать значение Rf .

ЗАНЯТИЕ № 9

КОНТРОЛЬНАЯ РАБОТА №2

(по итогам занятий 5 - 9)

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

1. Токсикокинетика лекарственных и наркотических веществ.

2. Биотрансформация лекарственных ядовитых веществ в организме. Реакции метаболизма и конъюгации.

3. Изолирование ядовитых веществ полярными растворителями. Этапы изолирования. Факторы влияющие на эффективность изолирования. Классификация методов.

4. Выбор методов изолирования в зависимости от постановки экспертной задачи, физико-химических свойств яда и вида биологического материала.

5. Общие методы изолирования. Принципиальные схемы извлечения.

6. Частные методы изолирования. Принципиальные схемы извлечения.

7. Принципиальная схема изолирования лекарственных и наркотических средств из биологических жидкостей.

8. Влияние состава извлекающей жидкости и рН среды при изолировании ядовитых веществ.

9. Методы и методические приёмы очистки, используемые при изолировании полярными растворителями.

10. Общие принципы качественного химико-токсикологического анализа.

11. Общие принципы количественного химико-токсикологического анализа. ГЖХ методы в анализе ядовитых веществ.

12. Общие принципы химико-токсикологического анализа биоматериала на наличие алкалоидов.

13. Общеалкалоидные осадительные и цветные реакции.

14. Алкалоиды, производные тропана. Токсические и физико-химические свойства. Особенности изолирования и химико-токсикологического анализа.

15. Алкалоиды, производные изохинолина. Токсикологические и физико-химические свойства. Особенности изолирования и химико-токсикологического анализа.

16. Алкалоиды, производные пиридина и пиперидина. Токсикологические и физико-химические свойства. Особенности изолирования и химико-токсикологического анализа.

17. Алкалоиды, производные пурина. Токсикологические и физико-химические свойства. Особенности изолирования и химико-токсикологического анализа.

18. Алкалоиды, производные индола. Токсикологические и физико-химические свойства. Особенности изолирования и химико-токсикологического анализа.

19. Алкалоиды, производные хинолина. Токсикологические и физико-химические свойства. Особенности изолирования и химико-токсикологического анализа.

20. Введение в наркологию. Наркотическое средство, его фармакологические, социальные и правовые характеристики. Наркомания, токсикомания. Организации, осуществляющие контроль за незаконным оборотом наркотиков и их употреблением.

Литература для подготовки к контрольной работе:

1.Лужников Е.А. Клиническая токсикология[Текст] / Е.А.Лужников.- Изд. 3-е, перераб.и доп.- М.: Медицина, 1999.-С. 39-67, 256-276.

2.Крамаренко,В. Ф. Токсикологическая химия[Текст]/ В.Ф.Крамаренко. – Киев: Выща школа, 1989.-С. 34-87, 172-295, 88-100.

3.Швайкова, М.Д. Токсикологическая химия [Текст] / М.Д.Швайкова. – М.: Медицина, 1975.-С. 119-241.

4.Белова, А.В. Руководство к практическим занятиям по токсикологической химии [Текст] / А.В.Белова. - Изд. 2-е, исправ.-М.:-Медицина,1976.-С. 56-131.

5.Якушева Н.Ю., Минаева Н.Н. Сборник вопросов и задач по токсикологической химии. [Текст] Учебное пособие / Н.Ю.Якушева, Н.Н.Минаева – Х : ДВГМУ , 2007 .-С.118-126.

6. Токсикологическая химия [Текст] / Под ред. Т.В.Плетенёвой.- М.:ГОЭТАР-МЕД, 2005.-С.177-182, 263-275,280-288.

7.Токсикологическая химия. Метаболизм и анализ токсикантов в биосредах человека [Текст] / Под ред. Н.И.Калетиной.-М.: ГОЭТАР-МЕД,2007 –C. 222-236, 556-571,586-596.

8. Ерёмин, С. К. Анализ наркотических средств [Текст]: руково­дство по химико - токсикологическому анализу наркотических и дру­гих одурманивающих средств / С.К. Ерёмин, Б.Н.Изотов, Н.В. Веселовская.-М.: Мысль, 1993.-С. 6-8, 17-53, 76-98, 105-148.

9.Материалы лекций.

СОДЕРЖАНИЕ АУДИТОРНОГО ЗАНЯТИЯ:

3. Проведение рубежного тестового контроля.

4. Проведение контрольной работы №2 .

ЗАНЯТИЕ № 10

ТЕМА:	Свойства и ХТА производных барбитуровой кислоты и п-аминофенола.
ЦЕЛЬ:	Сформировать знания и практические навыки проведения ХТА барбитуратов и производных п-аминофенола.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ ПОДГОТОВКА СТУДЕНТА К ЗАНЯТИЮ:

Основные термины, понятия и ключевые соединения:

Барбитураты. Барбамил,барбитал, фенобарбитал, бутобарбитал, этаминал натрий. Фенацетин.Парацетамол.

Логическая структура темы:

Производные барбитуровой кислоты
Фенобарбитал, Барбитал, Бутобарбитал, Барбамил, Этаминал-натрий
Действие на организм. Токсичность. Токсикокинетика. Метаболизм.	Седативное, снотворное, противосудорожное действие. В больших дозах: угнетение ЦНС (кома),нарушение дыхания,нарушение функции сердечно-сосудистой системы, трофические расстройства, нарушение функции почек
Изолирование	Экстракция Общие методы Частные методы: метод Поповой метод Валова метод Швайковой
Химико-токсикологический анализ.
Качественный	Предварительная реакция- Co(CH3COOH)2 + LiOH Подтверждающие реакции: цветные – Реакция Парри Co(CH3COOH)2 + КOH Мурексидная проба Родамин 6 Ж микрокристаллические реакции: Выделение кислотной формы Хлорцинкйод Реакция Цвиккера: пиридин и CuSO4 , NH4OH Железоиодидный реактив Медноиодидный реактив Спиртовой раствор KI Реакция образования п-нитрофенилэтилбарбитуровой кислоты (фенобарбитал ТСХ УФС,ИКС, ГЖХ,ВЭЖХ
Количественный	ФЭК,СФМ ( прямая и дифференциальная), ГЖХ, ВЭЖХ,ГХ/МС
Производные п-аминофенола
Фенацетин, Парацетамол
Действие на организм. Токсичность. Токсикокинетика. Метаболизм.	При больших дозах – аллергические реакции, метгемоглобинемия, анемия, «фенацетиновый» нефрит.
Изолирование	Экстракция общими методами
Химико-токсикологический анализ.
Качественный	Предварительная проба на метаболит – п-аминофенол- реакция образования азокрасителя Анализ продуктам гидролиза: -реакция образования индофенолового красителя -реакция образования азокрасителя -реакция образования аммонийной соли индофенолового красителя Анализ по нативному веществу: -HNO3 конц. ТСХ,УФС, ИКС,ГЖХ, ВЭЖХ
Количественный	СФМ, ФЭК,ГЖХ,ВЭЖХ

Литература для самоподготовки:

1.Лужников Е.А. Клиническая токсикология[Текст] / Е.А.Лужников.- Изд. 3-е, перераб.и доп.- М.: Медицина, 1999.-С. 256-264,271-272.

2.Крамаренко,В. Ф. Токсикологическая химия[Текст]/ В.Ф.Крамаренко. – Киев: Выща школа, 1989.-С. 197 – 213, 232-234.

3.Швайкова, М.Д. Токсикологическая химия [Текст] / М.Д.Швайкова. – М.: Медицина, 1975.-С. 119-168.

4.Белова, А.В. Руководство к практическим занятиям по токсикологической химии [Текст] / А.В.Белова. - Изд. 2-е, исправ.-М.:-Медицина,1976.-С. 62 – 77.

5.Якушева Н.Ю., Минаева Н.Н. Сборник вопросов и задач по токсикологической химии. [Текст] Учебное пособие / Н.Ю.Якушева, Н.Н.Минаева – Х : ДВГМУ , 2007 .-С.118-126.

6. Токсикологическая химия [Текст] / Под ред. Т.В.Плетенёвой.- М.:ГОЭТАР-МЕД, 2005.-С.260-262, 305-307

7.Токсикологическая химия. Метаболизм и анализ токсикантов в биосредах человека [Текст] / Под ред. Н.И.Калетиной.-М.: ГОЭТАР-МЕД,2007 –C. 614-634.

8. Ерёмин, С. К. Анализ наркотических средств [Текст]: руково­дство по химико - токсикологическому анализу наркотических и дру­гих одурманивающих средств / С.К. Ерёмин, Б.Н.Изотов, Н.В. Веселовская.-М.: Мысль, 1993.-С. 17-21,105-108.

9.Материалы лекций.

Вопросы для самоподготовки:

1.Какими методами изолируют производные барбитуровой кислоты из биоматериала?

2.С помощью каких общих реакций можно обнаружить барбитураты, выделенные из биологического материала?

3.Какие микрокристаллические реакции используются при идентификации барбитуратов?

4.Каким методом проводят количественное определение барбитуратов? В чём состоит преимущество дифференциальной спектрофотометрии?

5.Каким образом проводят изолирование из биологического материала производных п-аминофенола?

6.Чем обусловлены ядовитые свойства фенацетина?

7.Какие реактивы используют для проявления пластинок при ТСХ-анализе барбитуратов и производных п-аминофенола?

8.Решите задачи:

8.1.Фенобарбитал изолировали из 100 г биологического объекта методом Валова (изолирование водой, подщелоченной гидроксидом натрия). В результате получено эфирное извлечение объемом 50 мл. Часть эфирного извлечения (10 мл) упарили до сухого остатка, растворили в 25 мл боратного буфера с рН 10. Оптическая плотность полученного раствора, измеренная при 240 нм при толщине поглощающего слоя 1 см, составила 0,675. Затем путем добавления 2 капель концентрированной соляной кислоты в кювете создавали рН 2 и вновь снимали оптическую плотность раствора. Оптическая плотность при рН 2 составила 0,102. Рассчитать содержание фенобарбитала в 100 г биологического объекта, если удельный показатель поглощения фенобарбитала равен 380.

8.2. Для изолирования этаминала натрия из 5 мл мочи использовалась дробная жидкость-жидкостная экстракция хлороформом при рН 2. Получено извлечение объемом 15 мл. Часть извлечения (5мл) упаривали до получения сухого остатка и растворяли в 10 мл боратного буфера с рН 10. Оптическая плотность полученного раствора при 260 нм составила 0,212. Затем в кювету с раствором добавили 2 капли насыщенного раствора гидроксида натрия до создания рН 13 и измерили оптическую плотность данного раствора. Оптическая плотность раствора с рН 13 составила 0,450. Определить концентрацию этаминала натрия в моче (мг/мл), если удельный показатель поглощения этаминала натрия равен 416.

Тестовый контроль по теме:

ТЗ 1-2.Установите соответствие:

Вещество: Основной метаболит:

1. Барбитал. 2.Фенацетин.

А. 5,5-диэтилбарбитуровая кислота. Б. Фенетидин В. Кетоциклобарбитал. Г. п-аминобензальдегид Д. 5-этил-5-(парагидроксифенил)-барбитуровая кислота.

ТЗ 3. Формула расчёта количественного содержания барбитуратов в моче и крови при дифференциальном СФМ анализе:

1. С_%= (Дрн10 – Дрн2) / l_(см.)×Е^1%_1см.

2. С_%= (Дрн13 – Дрн10) / l_(см.)×Е^1%_1см.

3. С_%= Дрн10 / l_(см.)×Е^1%_1см.

4. С_%= l_(см.)×Е^1%_1см. / (Дрн10 – Дрн2)

5. С_%= l_(см.)×Е^1%_1см. / (Дрн13 – Дрн10)

ТЗ 4. Фенобарбитал экстрагируется органическими растворителями из …………. водных вытяжек.

ТЗ 5. Реактив, используемый в качестве проявителя в ТСХ анализе барбитуратов:

1. Драгендорфа.

2. Нингидрин в ацетоне.

3. H₂SO₄ конц. в этиловом спирте.

4. Марки.

5. Дифенилкарбазон в хлороформе и 5% р-р сульфата ртути.

ТЗ 6. Метод количественного определения барбитуратов в ХТА:

1. Заместительная алкалиметрия.

2. Аргентометрия.

3. Фотоколориметрия

4. Полярография.

5. Броматометрия.

ТЗ 7. Реактив, используемый для предварительного обнаружения барбитуратов в моче:

1. Ацетат кобальта и гидроксид лития в метиловом спирте.

2. Дифенилкарбазон и сульфат ртути.

3. Ацетат кобальта и изопропиламин в метиловом спирте.

4. Пиридин и соли меди.

5. Серная кислота конц.

ТЗ 8. Реактив, используемый для качественного обнаружения этаминала натрия в биологических объектах:

1. Нингидрин.

2. Марки.

3. Ацетат кобальта и гидроксид калия.

4. FPN – реактив.

5. Пикриновая кислота.

ТЗ 9. Препарат, определяемый мурексидной пробой и железоиодидным реактивом :

1. Оксазепам.

2. Фенобарбитал.

3. Аминазин.

4. Фенацетин.

5. Антипирин.

ТЗ 10. Метод количественного определения фенацетина в ХТА:

1. Поляриметрия

1. Броматометрия.

2. ФЭК.

3. Поляриметрия.

4. Гравиметрия.

ТЗ 11. Реактив, используемый для предварительного обнаружения фенацетина и его метаболитов в моче:

1.Хлорид железа (III).

2.Нингидрин.

3.Дифенилкарбазон.

4.H₂SO₄ конц. , НCl, NaNO₂, щелочной раствор b-нафтола

5.Реактив Драгендорфа

ТЗ 12. Реактив – проявитель, используемый в ТСХ – анализе фенацетина:

1. H₂SO₄.

2. НNO₃.

3. Нингидрин.

4. Марки.

5. FPN – реактив.

ТЗ 13. Фенацетин экстрагируется органическими растворителями из ………….. водных вытяжек.

ТЗ 14. Реакция обнаружения фенацетина, не требующая предварительного его омыления:

1. Образование азокрасителя.

2. Окисление хромовым ангидридом.

3. Индофеноловая проба.

4.Получение нитрофенацетина.

5.Реакция с хлоридом железа.

ТЗ 15. Реактив, образующий с фенобарбиталом микрокристаллы характерной формы:

1.Медноиодидный комплекс.

2.Железоиодидный комплекс.

3.Спиртовой раствор йодида калия.

4.Меднопиридиновый реактив.

5.Реактив Драгендорфа.

СОДЕРЖАНИЕ АУДИТОРНОГО ЗАНЯТИЯ

1. Семинар по теме занятия.

2. Практикум.

3. Оформление протокола практического занятия.

4. Тестовый контроль усвоения темы.

ПРАКТИКУМ.