Теоретическое приложение

Лабораторная работа №3. Выращивание микробов на различных питательных средах

Цель: освоить основные методики приготовления искусственных питательных сред, наиболее широко применяемых в лабораториях.

Материалы и оборудование:сухая смесь (пептонно-агарная среда), водная баня, электронные весы, чашки Петри.

Задания:

1) Приготовить пептонно-агарную питательную среду (смотреть методику ниже).

2) Залить питательную среду в чашки Петри (всего 4 шт.)

3) Взять пробы воздуха (из двух мест), воды и смывы с рук.

4) Ответить на вопросы.

5) Сделать вывод.

Теоретическое приложение.

Искусственные питательные среды для бактерийИскусственные среды разделяют на животные [например, мясопептонный агар (МПА) или мясопептонный бульон (МПБ)] и растительные (например, настои сена и соломы, отвары злаков, дрожжей или фруктов, пивное сусло и др.). Естественные среды для выращивания бактерий Естественные питательные среды могут содержать компоненты животного (например, кровь, сыворотка, жёлчь) или растительного (например, кусочки овощей и фруктов) происхождения. По назначению выделяют консервирующие среды (для первичного посева и транспортировки), среды обогащения (для накопления определённой группы бактерий), среды для культивирования {универсальные простые, сложные специальные и для токсинообразования), среды дм выделения и накопления (консервирующие, обогащения и элективные) и среды для идентификации (дифференциальные и элективно-дифференциальные). Классификации питательных сред по загрязнённости материала Если материал слабо загрязнён посторонней микрофлорой, то для выделения чистых культур применяют простые (по составу) среды. При обильной контаминации сапрофитами используют специальные или элективные (для отдельных видов), селективные (только для отдельных бактерий), дифференциально-диагностические (для облегчений идентификации) среды.

Агар-агар получают из некоторых морских водорослей путем экстракции водой при кипячении. Образуемая масса представляет собой студень. Высококачественный агар-агар изготавливают из красных морских водорослей. По составу это сложное органическое соединение, в котором преобладают полисахариды (70 - 80 %). Готовый агар-агар слабожелтого цвета, имеет вид шнуров, пластинок или порошка. Плавится при температуре примерно 100 °С, застывает при 40 °С. При добавлении к среде придает ей плотность.

Пептон- продукт неполного распада белков, происходящего под действием ферментов в кислой среде. По составу это смесь полипептидов и некоторых аминокислот. Содержит вещества, необходимые для жизни многих микроорганизмов. Получают пептон из рубца крупного и мелкого рогатого скота. Препарат легко растворяется в воде, при нагревании не свертывается, не выпадает в осадок при добавлении в раствор солей.

Желатин- животный клей, состоящий из белка. Получают его путем варки хрящей, костей и сухожилий. Внешне он напоминает листочки светло-коричневого цвета, не имеет запаха и вкуса. Плавится при температуре 32 - 34 °С, застывает при 16 °С.

Ход работы:

Мясопептонный агар (МПА)– среда искусственная, твёрдая, общего назначения. Представляет собой плотную студнеобразную массу. Питательная среда имеет вид студня светло-коричневого цвета и содержит:
- пептон сухой ферментативный - 10 г;
- натрий хлористый - 5 г;
- агар микробиологический - 13 г;
- мясной экстракт(из мяса крупного рогатого скота) - до 1 л.

Мясо-пептонный агар (МПА). Для приготовления рабочих сред навеску сухого порошка в количестве, указанном на этикетке (чаще 15-18 г), растворяют при нагревании в 300 мл дистил. воды, кипятят, помешивая, до образования быстрооседающей крупной пены, не допуская пригорания, охлаждают до 50°С , взбалтывают и разливают по бактериол. чашкам.

1. На аптекарских весах необходимо отвесить 0.66 грамма сухой смеси.

2. Высыпать в пробирку с 11 мл дистиллированной воды,

3. Поставить на водяную баню стакан с водой и поместить в него пробирку

4. Довести до кипения и оставить на 20 минут до получения равномерной желтоватой вязкой жидкости.

5. Перед разливом в чашки Петри среду охладить до 50°C, разливать слоем 4 — 6 мм. Разливку питательной среды лучше производить, когда она имеет температуру около 50°, так как при этом на крышках чашек не образуется капель воды в результате конденсации пара.

6. Подсушить питательную среду.

7. Произвести пробы воды, воздуха и смывы с рук. Пробы воздуха берутся в течение 1 минуты (крышка чашки Петри поднимается и засекается 60с, далее крышка закрывается). Студенты отправляются брать пробы в столовую и из вестибюля. Смывы с рук осуществляются следующим образом. Непосредственно перед взятием смыва ватную паочку увлажняют средой. При взятии смывов с рук протирают тампоном ладонные поверхности обеих рук, проводя не менее 5 раз по каждой ладони и пальцам, затем протирают межпальцевые пространства. Перед посевом смывов в пробирку с тампоном добавляют 5 мл 0,1% пептонной воды или изотонического раствора хлорида натрия. Тампон тщательно отмывают, после чего 1,0 мл смывной жидкости помещают в чашку Петри и заливают расплавленным МПА. Изотонический раствор соли получают, растоворяя 3 г NaСl и 220 мл дистиллята. Тампон тщательно отмывают, после чего 1,0 мл смывной жидкости помещают в чашку Петри и заливают расплавленным МПА. Аналогично берем пробу воды. Проба воды наносится на питательную среду.

8. Все пробы подписываются!

Вопросы для самоконтроля:

1. Для чего используют питательные среды?

2. Как подразделяются питательные среды по происхождению?

3. Какие компоненты используются для приготовления питательных сред?

4. Какие вещества служат для уплотнения сред?

Вывод:_________