Оплодотворение искусственное
Биотехнологические методы регулирования воспроизводства сельскохозяйственных животных и их преимущества.
Стимуляция суперовуляции.
Оплодотворение искусственное.
1. Биотехнологические методы регулирования воспроизводства сельскохозяйственных животных и их преимущества.Воспроизводство животных –это основной фактор, лимитирующий эффективность производства животноводческих продуктов на промышленной основе. Причины, препятствующие достижению оптимальных результатов воспроизводстве домашнего скота различны. Так, традиционные методы разведения животных позволяют получать от них лишь несколько потомков за всю жизнь. Низкий уровень воспроизводства у самок и длительный интервал времени между поколениями (6-7 лет у КРС) ограничивают генетический процесс в животноводстве.
Новые методы расширяют возможности регулирования воспроизводства . Они связаны с манипулированием на уровне клеток или эмбрионов, с использованием физиолочески активных соединений, поэтому названных биотехнологическими. К числу этих методов относятся: стимуляцию и синхронизацию охоты, суперовуляцию, искусственное осеменение, трансплантацию эмбрионов, хранение гамет и эмбрионов, целенаправленное двоен, регулирование пола, раннюю диагностику беременности, управления процессом родов, создание химер и др.
Современная технология трансплантации эмбрионов позволяет освободить генетически выдающихся самок от необходимости вынашивания плода и вскармливании потомства. Кроме того, их стимулируют с целью увеличения выхода яйцеклеток, которые затем извлекают на стадии ранних зародышей и пересаживают менее ценным в генетическом отношении реципиентам.
2. Стимуляция суперовуляции. Стимуляция и синхронизация охоты осуществляется с помощью прогестерона – женского полового гормона стероидной природы, регулирующего ход эстрального цикла. Простагландинов , а так же их комбинация. Этот прием позволяет вызывать появление охоты у групп пленных животных в один и тот же период времени. В США для синхронизации охоты у телок в молочном и мясном скотоводстве выпускается новый препарат под названием «синхро-мейт-В». Он представляет совокупность двух гормонов, один из которых имплантируется под кожу, а другой инъецируется внутримышечно. Имплант помещается под кожу уха телки и сразу же после этого следует инъекция другого гормона. Под действием этих двух гормонов эстральный цикл телки прерывается и временно останавливается. Через некоторое время имлпант удаляют из уха животного, начинается новый эстральный цикл. Так как, имплант удаляется одновременно у всех телок, то и цикл начинается в одно и то же время. Применение гормональных препаратов снимает необходимость ежедневного контроля за состоянием половой активности животных. Преимущества синхронизированной охоты состоит в реальной возможности формирования однородных групп животных в период осеменения, одновременности рождения приплода , точном учете кормов в группах.
3. Оплодотворение искусственное.-комплекс лечения бесплодия , включающий оплодотворения путем искусственного осеменения (введение в половые пути женщины спермы мужа или донора) и экстракорпоральное оплодотворение с последующей трансплантацией дробящихся эмбрионов в полость матки. В последние годы разрабатывают метод трансплантации женских и мужских половых клеток в просвет маточной трубы. Искусственное осеменение(имсеминация) . В зависимости введения спермы различают влагалищный, внутримышечный и внутриматочный метод осеменения. Влагалищный метод(введение спермы в заднюю часть свода влагалища) используют редко, он наиболее прост, но наименее эффективен, поскольку влагалищное содержимое может неблагоприятно действовать на сперматозоиды. Внутримышечый метод(введение спермы в канал шейки матки) так же недостаточно эффективен в связи с возможностью образования антиспермальных антител в шеечной слизи. Наиболее эффективный внутриматочный метод – введение спермы в полость матки. Однако при титре антиспермальных антител в шеечной слизи более 1:32 они образуются в полости матки, в подобных случаях перед введением спермы необходимо неспецифическое десенсибилизирующая терапия.
Искусственное осеменение спермой мужа проводят по следующим показаниям: со стороны мужа – гипоспадия мочеиспускательного канала, потенция,олигоспермия при нормальном строении и подвижности сперматозоида. Со стороны женщины- анатомические изменения в шейке матки, неподдающийся лечению вагинизм, наличием спермальных антител в шеечной слизи. Перед осеменением необходимо исследовать сперму мужа, исключить трубно-перитонеальные и маточные причины бесплодия. С целью установления времени овуляции и наличия желтого тела проводят тесты функциональной диагностики, определяют содержание дютеннизирующего гормона и протестеронов в крови. С помощью ультразвука выясняют диаметр доминантного фоликулла.
Осеменение осуществляется амбулаторно в течении 3-5 менструальных циклов, по 2-3 раза в течении цикла( на 12-14 дни при 20-дневном цикле). Необходимыми условиями являются симптом зрачка не менее 3 плюса, натяжение шеечной слизи не менее 8см, диаметр фолликула не менее 12 см.
Процедуру проводят с соблюдением правил, асептики в положении женщины на гинекологическом кресле. Сперма мужа ,полученная при мастурбации после воздержания от половых сношений не менее чем в течении 3-х дней, набирают в пластмассовый шприц ,емкость 1мл. К шприцу присоединяют полиэтиленовый катетер(можно использовать подключичный катетер), который без фиксации шейки матки вводят в канал шейки матки или в полость матки за внутренний зев. Сперму в количестве 0,4 мл вводят в канал в шейки или в полость матки. Для удержания спермы на шейку матки надевают колпачок, применяемый в целях контрацепции, женщина остается в положении лежа в течении 30мин.
При неполноценной лютеиновой фазе менструального цикла после искусственного осеменения рекомендуется введение препаратов стимулирующих развитие желтого тела. При удлиненной фолликулярной фазе менструального цикла проводят созревание фолликулы и овуляции. Для этого назначают кломифенцитрат по 50-100мг внутрь с 5-9 день менструального цикла и вводят 3000-4500 МЕ хорионического гонадотропина внутримышечно на 12 день менструального цикла. Обязательным условием наблюдения после искусственного оплодотворения измерения базальной температуры или определение содержания в-субъединицы хорионического гонадотропина в крови с целью ранней диагностики беременности.
Искусственное осеменение донором проводят после получения согласия обоих супругов. Донор должен быть моложе 36 лет, физически и психически здоров, не иметь наследственных заболеваний и нарушений развития.
Перед осеменением необходимо проведение теста для выявления локальных антиспермальных антител к сперме донора и пробы на способность сперматозоидов проникать в клеточную слизь.
Для осеменения донора спермы может быть использована нативная или консервированная сперма. Наиболее распространенным методом консервации спермы является креоконсервация в жидком азоте, позволяющая создавать банк спермы и длительно хранить ее.
Частота наступления беременности после осеменения спермой мужа или донора примерно одинакова и достигает , по данным разных авторов, 30-70%. Женщины, забеременевшие после искусственного осеменения, должны находиться под наблюдением акушера-гинеколога женкой консультации, так же как и беременные с отягощенным акушерским кнамнезом. Течение беременности и родов не отличается от таковых при нормальном зачатии, аномалии развития плода возникают не чаще, чем в популяции.
Экстракорпоральное оплодотворение с последующей трансплантацией эмбрионов и полость матки- один из современных методов лечения женского бесплодия. В его применение достигнуты определенные успехи, но в связи с необходимостью использования дорогостоящей аппаратуры и диагностики, применение лекарственных препаратов в основном импортного производства в СССР он налажен только в крупных научных- исследовательских и клинических учреждениях.
Противопоказания: отсутствие новообразований, а также возраст женщины старше 40 лет.
Метод состоит из 5 этапов: 1. Стимуляция суперовуляции.2. аспирация яйцеклеток.3. оплодотворение яйцеклеток.4. культивирование оплодотворенных яйцеклеток.5. перенос дробящихся эмбрионов в матку.
Успех метода в значительной мере зависит от числа яйцеклеток, полученных при пункции преовуляторных фолликулах, и от числа перенесенных в матку эмбриона.
Яйцеклетки помещают в специальный термостат ,в который переносят и сперматозоиды, полученные после промывания спермы мужа и отделения при центрифугировании семенной плазмы. На одну яйцеклетку добавляют 200-300 тысяч сперматозоидов. Процесс культивирования дробящихся яйцеклеток осуществляется в специальной среде при температуре 37 градусов, абсолютной влажности, 5% содержания двуокиси углерода, обеспечивающем оптимальный уровень рН. На стадии 4 и более бластомеров дробящиеся эмбрионы помещают в специальный пластиковый катетер и через канал шейки матки вводят в полость матки в минимальном объеме питательной среды.
Эффективность метода повышается совершенствованием аппаратуры и лекарственных препаратов для стимуляции овуляции. Неудачи метода могут быть обусловлены многими причинами, среди которых основными являются безуспешный перенос эмбрионов в матку, нарушение функции желтого тела.
Трансплантация женских и мужских половых клеток в просвет маточной трубы осуществляется с помощью тефлонового катетера и пластикового зонда в качестве проводника , который вводят через полость матки в просвет ампулы маточной трубы под контролем эхограции с применением влагалищного датчика .Через катетер шприцом вводят яйцеклетки и 200-600тыс.сперматозоидов и 50мл питательной среды. При этом оплодотворение происходит в маточной трубе что значительно физиолгичнее, чем в пробирке. Метод признается достаточно перспективным для лечения бесплодия неясного генеза , бесплодия при некоторых формах эндометриоза, а так же бесплодия ,обусловленного нарушения сперматогенеза у мужчин. Обязательным условием его применения является проходимость маточных труб.